《紫外可见分光光度计原理使用及维护ppt课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《紫外可见分光光度计原理使用及维护ppt课件.ppt（26页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、一、吸收光光度法概述,1、吸收光度法概念：基于物质对光的选择性吸收而建立的分析方法称为吸收光度法。,2、吸收光谱的分类,3、吸收光度法的理论基础和适用范围,1）吸收光度法的理论基础：朗伯比尔定律：A=kbc，朗伯定律是说明光的吸光度与吸收层厚度成正比；比尔定律说明光的吸光度与溶液浓度成正比。2）朗伯比尔定律适用范围：朗伯定律对于各种有色溶液都适用，比尔定律只有在一定浓度范围内使用，吸光度A和浓度才成直线关系，它只适用于浓度小于0.01mol/L的稀溶液。,二、分光光度计的特点及结构,1、特点：a、与其它光谱分析方法相比，其仪器设备和操作都比较简单，费用少，分析速度快；b、灵敏度高；c、选择性好
2、，有最大吸收波长。d、精密度和准确度较高;e、用途广泛。,2、结构,1）光源（氘灯、钨灯）2）单色器（光栅）3）吸收池4）检测器 样品 5）信号显示系统,三、分光光度法测定时需要考虑的因素,1、反应条件的选择1)显色剂的用量；2)溶液酸度；3)溶液温度；4)显色时间；5)溶剂，比如有机溶剂常能降低有色化合物的分离度，从而提高显色反应的灵敏度。,2、显色反应时应注意共存离子的干扰消除办法：1)、控制溶液酸度；2)、加入掩蔽剂；3)、选择适当的参比溶液；4)、选择适当的波长；5)、利用氧化还原反应；6)、采用适当的分离方法；7)、利用导数光谱法、双波长等新技术。,3、参比溶液的选择用参比溶液调节分
3、光光度计的吸光度为0，然后测定试样溶液或者标准溶液的吸光度值，参比溶液的作用除了消除吸收池壁对入射光的放射和散射等影响外，合理选用时还可以消除其他干扰，使测得的吸光度正确反映被测物的浓度，提高测定的准确性。,4、测定条件的选择1）吸收波长；一般选择最大吸收波长处。2）吸光度范围，一般来说，吸光度在0.20.8时，浓度测量的误差最小，这就是适宜的吸光度范围，解决办法：a 调节溶液浓度如减少或者增加取样量，改变稀释倍数；b 使用厚度不同的吸收池比如提高或者减少吸收池的厚度，需要重新作校正曲线；3）狭缝宽度的选择，狭缝宽度直接影响测定的灵敏度和工作曲线的线性范围，狭缝宽度太大，灵敏度下降，工作曲线线
4、性范围变窄，反之，相反。,四、紫外可见分光光度计主要部件介绍,光源：紫外可见分光光度计的辐射源有两类：热辐射光源和气体放电光源。热辐射光源如钨灯和卤钨灯，可用于可见光区；气体放电光源如如氢灯和氘灯，主要用于紫外光区。,主要部件,光源绝大多数紫外分光光度计主要使用钨灯和氘灯作为辐射光源，钨灯的波长范围在3502500nm，主要用于可见光区的光源；氘灯的波长范围在180460nm之间，主要用于紫外光区的光源。如果测定波长在180400nm之间，应选择氘灯作为辐射光源，如果波长在400nm以上应选择钨灯作为辐射光源，关闭不用的光源。,主要部件,吸收池吸收池材质：吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为
5、玻璃吸收池和石英吸收池。切记：玻璃比色皿不能用于紫外区！区分方法:可用仪器实测紫外区200nm波长处的吸光度值。,主要部件,吸收池 因比色皿的使用不当易导致数据重复性差。原因：角度、位置变化、表面洁净度、污染程度 注意：粘接的比色皿不适合装浓硫酸、不适合用高于25瓦的超声波机清洗。,主要部件,吸收池吸收池的污染和清洗 ：1）比色皿沾污会直接严重影响分析测试的结果！这个非常重要，在日常的分析工作中，往往不大重视比色皿的沾污问题。2）、污染清洗方法：a、如果肉眼观察有污点，就应清除掉；可用高级擦镜纸、软的黄鼠狼毛笔等柔软的物质擦洗；b、也可用洗液清洗；常用洗液：盐酸-水-甲醇（1:3：4体积比）或
6、者铬酸洗液，彻底清洗吸收池或者其他玻璃器皿。了解内容：铬酸洗液的配制方法：20g的K2Cr2O7，溶于40mL水中,将浓H2SO4 360mL徐徐加入K2Cr2O7溶液中。,主要部件,吸收池c、严重的污染需要用超声波清洗。清洗注意事项：1）、不能用金属棒或硬的木棒(如牙签等)重擦比色皿，否则，也会损坏比色皿的通光面，特别强调：比色皿的通光面不能损坏！2）、不能用带易掉毛的工具(如劣质纸、劣质棉花等) 擦拭比色皿的受光面，不要用洗洁精之类的清洁剂。以免影响测量。,主要部件,检测器检测器的作用是检测光信号，并将光信号转变为电信号。现今使用的分光光度计大多采用光电管或光电倍增管作为检测器。,仪器展示
7、,1、高档 - 紫外可见分光光度计 19系列,仪器展示,2、中档 - 紫外可见分光光度计 18系列,岛津UV-1800双光束,仪器展示,3、 普及型 - 紫外可见分光光度计 T6系列,五、紫外分光光度计测样不稳定和不准确的原因,1）市电不稳如：大功率用电器的启停(空调、烘箱、大型电机、电炉等)2）比色皿的原因如：紫外区错用玻璃比色皿；脏污；比色皿质量差；3）操作原因如：参数设置不当；样池架设置不当；比色皿放置倾斜、晃动；取放比色皿时方向不竖直，用力过大使样池架挪位等。,4）样品自身的问题 如：空白值过大、样品浓度过高，超出动态线性范围；试剂等被污染或纯度不高；有气泡；样品显色在变化，未稳定；有
8、悬浮或沉淀物；见光分解；挥发、溶剂使用不当等。5）环境影响 如：温度、湿度、粉尘、电场、磁场、振动等影响6）仪器自身或PC机的原因如：光源及光学器件、电路、机械、计算机病毒等,六、紫外分光光度计常见的非仪器问题,常见非仪器问题及判断：1）自检时提示样品池电机项失败，或有异常响声；原因：样品室内放置有干燥剂或杂物，造成机械卡住。2）自检时提示光源电机项失败；原因：样池架类型设置错误(样品池类型与使用样池数的区别)、自检时样品池架内放有比色皿或其它物件挡了光、光源未点亮或老化、损坏等。3）自检时提示钨灯能量低或提示氘灯能量低；原因：同上一条原因4）自检时提示氘灯能量高原因：附件类型设置错误(非积分
9、球附件错设置成积分球),七、钨灯和氘灯的更换,1、仪器需要更换钨灯一般有这几种情况如:钨灯不亮、玻璃表面变黄或变黑、灯体漏气变白等。2、仪器需要更换氘灯一般有这几种情况如:氘灯不亮、氘灯能量低等。3、更换钨灯和氘灯时注意事项：在更换氘灯及钨灯时注意保护光源反射镜镜面，禁止触摸镜面以及擦拭镜面。,八、日常维护,1、温度和湿度是影响仪器性能的重要因素。他们可以引起机械部件的锈蚀，使金属镜面的光洁度下降，引起仪器机械部分的误差或性能下降；造成光学部件如光栅、反射镜、聚焦镜等的铝膜锈蚀，产生光能不足、杂散光、噪声等，甚至仪器停止工作，从而影响仪器寿命。维护保养时应定期加以校正。特别是地处南方地区的实验室，仪器室最好应具备四季恒湿，配置恒温设备，仪器不用时，样品室内要及时放上干燥剂，干燥剂失效后要及时更换。,2、仪器的防尘和防止腐蚀性气体：环境中的尘埃和腐蚀性气体亦可以影响机械系统的灵活性、降低各种限位开关、按键、光电偶合器的可靠性，也是造成必须学部件铝膜锈蚀的原因之一。因此必须定期清洁，保障环境和仪器室内卫生条件，防尘，仪器使用后要及时盖上防尘罩。仪器的外罩拆除和内部除尘工作只能由仪器维修人员操作，分析人员不能擅自拆除仪器外罩。,
