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1、化学发光法检测传染病,更灵敏、更特异、更准确,放免,酶联免疫,化学发光,荧光免疫,60年代,70年代,80年代,90年代,免疫标记技术发展,国产,进口,酶促化学发光,直接化学发光,化学发光技术的优势与应用前景,.敏感度高，(10-21mol/L)超过酶免，荧光免疫等方法.精密度，准确度超过放免，酶免，荧光免疫等方法.试剂稳定，无放射性，污染或生物毒性；.测定耗时短，方便快速提供结果报告；.测定项目齐全； 已发展成全自动的测定系统。,包被技术的发展-磁微粒子,包被磁微粒 标记异鲁米诺,Eg:双抗夹心法分析模式 磁微粒子上包被的抗体与待检测抗原及异鲁米诺标记抗体结合,提升检测功能灵敏度增加检测线性
2、范围比吖啶酯更稳定延长试剂效期,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,微粒包被,液相反应,磁微粒、直接化学发光反应反应充分速度更快,酶标板，板式,磁微粒，纳米级，均相,CLIA,板式载量,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,磁微粒子直接化学法Ag/Ab,酶标板发光板Ag/Ab,微粒子化学发光法抗体载量优势,微粒子化学发光原理,磁性微粒子及其分离技术,磁性微粒子技术的优点：快速分离结合相与游离相提高与Ag或Ab包被亲和力提高接触表面积/反应容量比例，实现微量分析不需要抗体分离步骤，杜绝干扰与交叉反应允许共价耦合反应，因此可以检测大/小分子的各种物质成分能应用各种分析设计与反应模式，扩大应用范围
3、 如：夹心法，竟争法，抗体检测法等利于检测自动化与微量分析,磁微粒子直接化学发光是最新一代免疫检测新技术具有液相、快速、灵敏、准确的特点通过多中心的临床评估，基本上验证了LICA在乙肝、丙肝、梅毒、艾滋、肿瘤标志物、甲状腺功能等项目的临床可用性多家临床试验显示产品的质量不亚于进口的雅培、罗氏和西门子等厂家的产品媲美。,AutolumiS2000微粒子化学发光仪,全自动化学发光免疫分析系统开发及其产业化，在2011年12月通过国家科学技术委员会的鉴定，鉴定委员会认为：,该项目具有创新性和自主知识产权，整体达到国际先进水平。,1）磁性微粒子技术： 便于分离，反应均匀，提高灵敏度2）泉涌内外壁清洗技
4、术： 最小的交叉污染率3）试剂盒盖设计： 减少人工操作误差和交叉污染，避免试剂挥发影响结果准确性4）试剂冷藏系统： 保证在仪器操作的过程中试剂能够一直保持稳定5）磁性分离技术： 保证了清洗效率，对于灵敏度要求极高的标记免疫分析是十分关键的,专利，独有技术,AutolumiS2000 免疫项目,甲状腺功能甲状腺素三碘甲状腺原氨酸游离甲状腺素游离三碘甲状腺原氨酸促甲状腺素性腺激素人绒毛膜促性腺激素催乳素雌二醇卵泡刺激素黄体生成素孕酮睾酮,肿瘤标志物甲胎蛋白癌胚抗原前列腺特异性抗原游离前列腺特异性抗原糖类抗原125糖类抗原15-3糖类抗原19-92微球蛋白铁蛋白神经元特异性烯醇化酶人钙结合蛋白肿瘤相
5、关抗原72-4鳞状上皮癌相关抗原细胞角蛋白CYFRA 21-1,心血管及心肌标志物N末端脑钠肽肌钙蛋白肌酸激酶同工酶C反应蛋白心肌脂肪酸结合蛋白脂蛋白相关磷脂酶A2髓过氧化物酶肌红蛋白肝纤维化四项透明质酸型前胶原N端肽型胶原蛋白层粘连带白,传染病乙型肝炎病毒前S1抗原乙型肝炎病毒e抗体乙型肝炎病毒e抗原乙型肝炎病毒核心抗体乙型肝炎病毒表面抗体乙型肝炎病毒表面抗原丙型肝炎抗体（HCV）梅毒抗体（TP）人类免疫缺陷病毒抗体糖代谢类胰岛素C-肽,全自动、管式、直接化学发光法 -特异性强、性能稳定 超长时间无人值守 （1）试剂区15个试剂位， （2）样本区12 12 = 144 个样本位 （3）码垛区
6、一次性装载720个反应杯 测试中可随时添加，随时替换,AutolumiS2000微粒子化学发光仪,AutolumiS2000微粒子化学发光仪,真正的急诊功能，急诊样本，随到随测。测试速度高达220测试/小时原试管上样，无需倒管。全封闭反应舱，有效减少外界环境干扰和污染全中文软件，图标式界面，操作更简便综合测试成本低,管式、微粒子包被技术，反应速度更快，结果更准确。ELISA法检测乙肝表面抗原、梅毒、艾滋、丙肝按照2010年药典规定反应时间至少要2小时30分钟；而全自动微粒子化学发光试剂则不到30分钟即可完成。稳定性更好特异性更好,AutolumiS2000微粒子化学发光仪,大部分国际一流厂家也
7、都采用直接发光法：,罗 氏西门子雅 培.,传染病试剂传统酶免法和微粒子化学发光法对比,参比试剂：雅培I2000,试剂性能多中心临床评估（乙肝）,免疫测定试剂的关键点,作为免疫反应，抗原抗体的选择是整个免疫分析特异性和总体表现的关键如何选择好一个抗体(单克隆或多克隆)去检测一个被检物质，而不与非常相似结构的其它代谢产物有交叉反应,或着是一些没有临床意义的分解产物等，这是分析设计的重点中之重点。批内、批间的分析重现性。,AFP,HBsAg,4.50%,1.79%,4.91%,2.14%,批内,批间,微粒子化学发光试剂的精密度,参比试剂：雅培,试剂性能多中心临床评估,N=500，参比试剂：雅培I20
8、00,试剂性能多中心临床评估,丙型肝炎抗体诊断试剂,丙肝病毒复杂的基因结构： 决定了抗体谱的差异，从而为丙肝抗体检测敏感度的提高带来了困难。,丙肝诊断试剂目前存在的问题,1、灰区标本的困惑2、阳性标本的漏检,问题形成的技术原因-灰区的形成,1、重组抗原的原因 （1）融合蛋白 （2）大肠杆菌杂蛋白2、第二抗体的非特异反应 （1）酶标抗体对固相载体的直接吸附 酶标二抗对于丙肝抗体是非特异的，和各种人IgG均能反应结合。 （2）个别标本中IgG浓度过高 多聚体的混合：E-E、E-Ab、E-Ab-E、E-Ab-E-Ab ，既引起本底背景，又阻遏抗原抗体反应,问题形成的技术原因-阳性标本的漏检,1、关于
9、灵敏度的两个概念 （1）分析灵敏度 决定因素： a.单个抗原决定族的抗原性强弱。 b.试剂盒的信号放大能力 （2）流行病学敏感度 决定因素： a.抗原片段的种类是否齐全。 b.是否含构像抗原。 c.分析灵敏度的高低。,丙型肝炎病毒的基因结构,ELISA-1st RIBA-1st,ELISA-2stRIBA-2st,ELISA-3stRIBA-3st,2、抗原片段种类不全,3、包涵体抗原，抗原性弱4、缺乏构像表位5、原核表达分子量小，抗原表位有限6、抗原非糖基化，稳定性差7、信号放大能力有限8、固相载体形成的空间位阻,问题形成的技术原因-阳性标本的漏检,威高新型丙肝化学发光试剂的关键技术,1、包
10、被和标记实现双特异，以降低假阳性率，并提高分析敏感度。2、通过整体系统优化，进一步扩大阴阳反差，使结果判读泾渭分明。,威高新型丙肝化学发光试剂技术策略-灰区的解决,1、酵母真核表达抗原，高效减少灰区标本 eg: E.coli与Pichia pastoris 检测国标,Anti HCV重组 NS3 抗原,NS3 HCV病毒的最重要的抗原 通过酵母真核系统成功的表达NS3抗原, 多重折叠以达到高度的免疫活性 高纯度; 易于直接标记,2、针对Fab端的单特异性抗体标记物一般二抗和单特异抗体的对比,3、板式固相载体升级为管式磁微粒子包被 包被量更富足 管式液相反应更充分 更有效的解决空间位阻效应,4、
11、光信号检测，提高信噪比 信号放大代替靶标放大，减少靶标放大带来的非特异性反应，远远大于ELISA的信噪比。,新型丙肝化学发光试剂-降低漏检率,1、在CORE、NS3、NS4、NS5的基础上增加了E1区，保证抗原片段的齐全2、pichia pastoris表达系统带来以下优势 （1）非包涵体而可溶性表达，抗原性强 （2）因糖基化而提高稳定性 （3）分子量大，抗原表位丰富 （4）具有构像抗原表位，而提高检出率3、磁微粒子标记抗原增加抗原抗体的反应强度,新型丙肝化学发光试剂检测国家参考品符合率对比,新型双特异丙肝化学发光诊断试剂临床验证报告,丙肝化学发光试剂临床对比试验报告,对照试剂：雅培I2000
12、SR试验单位：包头市中心医院,RIBA试验结果：阴性。,定性检测项目结果判读-有反应性和无反应性,定性项目一般以阴阳性作为结果判断的基础。阴阳性判读基于量化的结果，主观进行阴阳性的定义。真正的确认的阴阳性需要通过金标准测量方法才能确证。HCV的确证实验RIBA（重组免疫印迹法）HIV的确证实验Western-Blot（蛋白质印迹法）感染初期，可能使用确证实验也无法得出准确的阴阳性结论。检验方法的局限性，使用有反应性和无反应性来评估该样本针对该检测方法的检测结果。半定量检测，通过病员的动态随访，相隔一定时间再行检测，可通过S/CO值的变化程度来进行确证。,高特异经典免疫学原理，单克隆抗体技术大分
13、子采用夹心法分析小分子采用竞争法分析专利的磁性分离技术,全自动微粒子直接化学发光Autolumis2000系统特点,高灵敏采用最灵敏、最稳定的直接发光级联放大系统采用最持久最稳定的发光剂ABEI 采用磁性微粒子技术，扩大包被面积,全自动微粒子直接化学发光Autolumis2000系统特点,高稳定发光信号稳定，持续高质量试剂, 无需预处理稳定，持久的标准曲线，有效期长机上试剂冷藏系统，试剂有效期长胶膜试剂盒，确保试剂稳定,全自动微粒子直接化学发光Autolumis2000系统特点,高准确超灵敏光电倍增管检测发光信号发光3秒内完成，原位检测泉涌式内外壁清洗系统，严格防止交叉污染(1ppm),全自动微粒子直接化学发光Autolumis2000系统特点,降低诊断成本，惠及民生全自动操作，重复性好，易于标准化高特异性、高灵敏度，避免漏检误诊,小结全自动微粒子化学发光检测优势,谢 谢,
