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1、人感染H7N9禽流感实验室采样与检测技术,1,t课件.,人感染H7N9禽流感实验室采样与检测技术1ppt课件.,H7N9禽流感病毒介绍,2,t课件.,H7N9禽流感病毒介绍2ppt课件.,病原学特征,禽流感病毒属正粘病毒科流感病毒按照病毒核蛋白（NP）和基质蛋白（MP）的差异可以分成甲、乙、丙型流感病毒甲型流感根据病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的差异可以分成不同的亚型，目前可分为16个H亚型（H1H16）和9个N亚型（N1N9）。禽甲型流感病毒除感染禽外，还可感染人、猪、马、水貂和海洋哺乳动物。可感染人的禽流感病毒亚型为H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3，此次报道的为H7
2、N9禽流感病毒。该病毒为新型重配病毒，其内部基因来自于H9N2禽流感病毒。,3,t课件.,病原学特征禽流感病毒属正粘病毒科3ppt课件.,病原学特征,病毒基因组结构 甲、乙型病毒分为8节段 丙型病毒分为7个节段（缺少编码NA的节段）单链、负链RNA单纯的病毒RNA不具感染性,4,t课件.,病原学特征病毒基因组结构4ppt课件.,6个内部片段来源于H9N2最新的研究表明，该病毒可能是H7N3（鸭）H7N9（野禽）H9N2中国科学院研究显示，H7N9禽流感病毒基因来自于东亚地区野鸟和中国上海、浙江、江苏鸡群的基因重配。,病毒基因组特征,5,t课件.,PB2PB1HANPNAMPNSPA6个内部片段
3、来源于H9N,理化特征,禽流感病毒普遍对热敏感，对低温抵抗力较强，65加热30分钟或煮沸（100）2分钟以上可灭活。病毒在较低温度粪便中可存活1周，在4水中可存活1个月，对酸性环境有一定抵抗力，在pH4.0的条件下也具有一定的存活能力。在有甘油存在的情况下可保持活力1年以上。,6,t课件.,理化特征禽流感病毒普遍对热敏感，对低温抵抗力较强，65加热,人感染H7N9禽流感病毒标本采集运输及实验室检测,7,t课件.,人感染H7N9禽流感病毒7ppt课件.,临床样本的选择,采样对象：不明原因肺炎、人禽流感待查病例 最佳采集时间：发病后3天内，一般不超过7天要有医院专家组的会诊记录,8,t课件.,临床
4、样本的选择采样对象：不明原因肺炎、人禽流感待查病例8pp,病例定义,不明原因肺炎病例应同时具备以下4条，不能明确诊断为其它疾病的肺炎病例：发热（腋温38）；具有肺炎的影像学特征；发病早期白细胞总数降低或正常、淋巴细胞分类计数减少；经规范抗菌药物治疗35天监测病例（同时具备以下4项）：发热(腋下体温38)具有肺炎的影像学特征发病早期白细胞总数降低或正常,或淋巴细胞分类计数减少不能从临床或实验室角度诊断为常见病原所致肺炎,9,t课件.,病例定义不明原因肺炎病例应同时具备以下4条，不能明确诊断为其,病例定义,疑似病例：符合临床症状及血常规/生化及胸部影像学特征甲型流感病毒通用引物阳性并排除季节性流感
5、可以有流行病学接触史 确诊病例：符合疑似病例诊断标准呼吸道标本中分离出H7N9禽流感病毒呼吸道标本中H7N9禽流感病毒核酸检测阳性动态检测双份血清H7N9禽流感病毒特异性抗体水平呈4倍或以上升高,10,t课件.,病例定义疑似病例：10ppt课件.,标本类型,上呼吸道标本咽拭子、鼻咽拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液等下呼吸道标本气管吸取物、肺洗液、肺组织标本等血清标本急性期血清：发病7天内，尽量采集恢复期血清：间隔2-4周的尸检组织标本肺组织、气管、支气管组织等,11,t课件.,标本类型上呼吸道标本11ppt课件.,采样液要求,常用的采样液有：普通肉汤（只用于鸡胚，对细胞有毒性），PH 7.4-
6、7.6的Hanks液，Eagels培养液或水解乳蛋白溶液或不加抗菌素的生理盐水（漱口液）。为防止采样液生长细菌和真菌，在采样液中需加入抗菌素，加入庆大霉素（终浓度0.1mg/ml可高至0.5mg/ml ）、抗真菌药物（终浓度2ug/ml）。加入抗菌素以后重新调节pH值为7.4， 配制好的采样液，分装每个采样管3-4ml，-20冻存。庆大霉素:80mg（万单位）2ml,12,t课件.,采样液要求常用的采样液有：普通肉汤（只用于鸡胚，对细胞有毒性,Eagels基础培养基,13,t课件.,Eagels基础培养基13ppt课件.,咽拭子 用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR
7、实验）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去,14,t课件.,咽拭子14ppt课件.,15,t课件.,15ppt课件.,采咽拭子的器材和容器,16,t课件.,采咽拭子的器材和容器16ppt课件.,17,t课件.,17ppt课件.,标本采集要求,同时采集呼吸道标本：34ml血清标本：12ml尽量采集病例发病早期的呼吸道标本特别是下呼吸道标本 填写标本采集登记表务必填写清楚，不要缺漏项目复印一份交收样单位，签字盖章,18,t课件.,标本采集要求同时采集18ppt课件.,19,t课件.,19ppt课件.,20,t课件.,20ppt课件.,标本送检,送检单位县级疾控中心/
8、临床医院送检时限在24小时内送达接受单位流感监测网络实验室（设区市疾控中心）,21,t课件.,标本送检送检单位21ppt课件.,标本的运送要求新鲜的临床采集标本应在4条件下24小时内运送至全国流感监测网络实验室;未能24小时内送至实验室的，应置-70或以下保存 冻存的临床采集标本应在冻存的条件下，低温送至实验室,22,t课件.,标本的运送要求22ppt课件.,生物安全,23,t课件.,生物安全23ppt课件.,传播风险及管理,病毒特征分析表明存在人间传染的风险暂时按“高致病性禽流感病毒”类型管理参考人间传染的病原微生物名录需重点考虑生物安全标本采集标本运输实验室活动,24,t课件.,传播风险及
9、管理病毒特征分析表明存在人间传染的风险24ppt课,标本采集和运输,标本采集重点做好采样人员的个人防护必须佩带N95口罩、防护服、手套等防护用品采样后器材高压消毒标本运输经过行政审批包装临床样品：B类， UN3373包装病毒分离物： A类， UN2814包装专人专车运输并注意防护,25,t课件.,标本采集和运输标本采集25ppt课件.,感染性物质包装分类,航空运输B类包装（ UN号3373,26,t课件.,感染性物质包装分类航空运输B类包装（ UN号337326pp,A类、 B类包装的区别,27,t课件.,A类、 B类包装的区别A类包装 B类包装 定义 对人或动,检测活动,标本分装、灭活和核酸
10、提取BSL-2+生物安全柜核酸扩增BSL-2病毒培养BSL-3：细胞及鸡胚的接种ABSL-3：动物感染实验活动需要行政审批、报备个人防护BSL-2：N95口罩、眼镜、防护服等BSL-3：按相关要求,28,t课件.,检测活动标本分装、灭活和核酸提取28ppt课件.,病原学检测,核酸检测Real-time RT-PCR病毒分离从三个病例中分离到3株病毒A/Shanghai/1/2013(H7N9)A/Shanghai/2/2013(H7N9)A/Anhui/1/2013(H7N9)序列测定完成全基因组测定,29,t课件.,病原学检测核酸检测29ppt课件.,谢 谢！,30,t课件.,谢 谢！30ppt课件.,此课件下载可自行编辑修改，供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！,此课件下载可自行编辑修改，供参考！,
