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1、免疫组化结果的分析和判断,免疫组化结果的分析和判断,第一节 免疫组化结果的判断原则 免疫组化结果的判断原则概括起来有以下几点：,第一节 免疫组化结果的判断原则,必须同时设对照染色。没有对照染色的免疫组化染色结果是不可信的。 抗原表达必须在特定部位。如LCA应定位在细胞膜上；CK应定位在细胞浆内；PCNA及p53蛋白应定位在细胞核内；EMA应定位在细胞膜上，等等。不在抗原所在部位的阳性着色，一概不能视为阳性。,必须同时设对照染色。没有对照染色的免疫组化染色结果,阴性结果不能视为抗原不表达。由于检测方法灵敏度有高低之分，有时可因染色方法灵敏度不够，而导致阴性反应，判断时应注意。,阴性结果不能视为抗
2、原不表达。由于检测方法灵敏度有高,尽量避开出血、坏死及切片刀痕和界面边缘细胞的阳性表达，特别是酶免疫标记。因为这类阳性着色多系内源干扰，或系人为因素所致。,尽量避开出血、坏死及切片刀痕和界面边缘细胞的阳性表,对免疫组化标记结果的意义不能绝对化，应结合临床资料、X线等影像学及实验结果综合分析。,对免疫组化标记结果的意义不能绝对化，应结合临床资料,第二节 对照染色设计,第二节,(一）对照染色的目的 设对照的目的是为了排除假阴性和假阳性。假阴性的原因主要有三：组织处理不当，抗原丢失过多或被遮蔽；抗体失活、效价过低或稀释度不合适（主要指一抗，即特异性抗体）；染色步骤遗漏及差错，或显色剂的选择、缓冲液的
3、pH和离子强度不当等。,(一）对照染色的目的,假阳性均系由多种因素造成的非特异着色所致，原因主要有：自发荧光或内源酶等干扰；抗体试剂不纯(特别是一抗）；操作失误，如污染、切片干枯或显色剂操作不当等；Fc受体的干扰，等等。,假阳性均系由多种因素造成的非特异着色所致，原,（二）对照的种类及其选用目的 对照染色大致可分为阳性组织对照、阴性组织及阴性试剂对照和自身对照四大类：,（二）对照的种类及其选用目的,阳性组织对照 指用已证实含有靶抗原的同源及不同源组织切片或细胞涂片与待检实验切片同时作同样处理和免疫染色的组织对照。正确的结果应呈现阳性，目的是为了证实所用免疫组化染色流程的有效性，排除假阴性的可能
4、。,阳性组织对照 指用已证实含有靶抗原的同源及不同源组织切片,阴性组织对照 指用已证实不含靶抗原的同步处理和免疫标记染色的组织对照。正确的结果应为阴性，目的是除外假阳性。,阴性组织对照 指用已证实不含靶抗原的同步处理和免,阴性试剂对照 是指用于证实在免疫组化染色中所用试剂，尤其是特异性抗体试剂的有效性和可靠性而所设立的同步免疫染色对照，包括有：空白对照；替代对照；吸收试验和抑制试验，等。目的在于除外假阳性和证实所用免疫组化试剂及其技术方法的有效性和待检实验切片免疫标记阳性结果的可靠性。,阴性试剂对照 是指用于证实在免疫组化染色中所用试剂，,空白对照 指以缓冲液（PBS、TBS等）取代第一抗体（
5、主要的，必要时还可做第二抗体及桥联抗体的空白取代），其他各步不变的试剂对照染色，结果应为阴性。,空白对照 指以缓冲液（PBS、TBS等）取代第一抗,取代对照 指以所用方法第一抗体同源动物的正常血清，或与本实验无关的抗体(靶生物缺如的)取代第一抗体，其他步骤不变的试剂对照染色，结果应为阴性。吸收试验 是指用事先经过量抗原吸收的第一抗体上清液取代第一抗体，其他步骤不变的免疫染色试剂对照。结果应是阴性或阳性着色明显减弱（吸收不全时）。,取代对照 指以所用方法第一抗体同源动物的正常血清，或与本,抑制试验 是指用标记抗体和未标记抗体（可以是一抗，也可以是二抗或桥抗体）两者的混合物作试剂，其他步骤不变的免
6、疫组化染色试剂对照，结果其阳性着色应成比例的减弱（等量或1：9）。此试剂对照多用于直接法。,抑制试验 是指用标记抗体和未标记抗体（可以是一抗，也可以,这类阴性试剂对照的选用原则是：空白对照不能省，其他对照在预实验中应尽量多做，尤其是应用新抗体试剂；对照必需与实验片同步进行染色；对照的结果应附合要求。,这类阴性试剂对照的选用原则是：空白对照不能,自身对照 是指在同一标记切片上的自身组织成分的阴性背景对照。即与靶抗原阳性反应细胞或成分相邻的阴性背景结构的显色，结果应为阴性或着色较浅，需与阳性着色成分呈鲜明对比。目的在于排除内源性干扰产生的假阳性和因抗原弥散移位造成的错误结果。,自身对照 是指在同一
7、标记切片上的自身组织成分的阴性背景对,第三节 非特异染色,第三节,非特异染色是指免疫组化染色过程中产生的非靶抗原的呈色结果，属假阳性，又称背景着色，能严重干扰免疫组化染色结果的正确判断，应竭力避免或减轻。其原因涉及免疫组化染色流程的各个环节，可来自：,非特异染色是指免疫组化染色过程中产生的非靶抗,内源性干扰(自发荧光、内源酶、内源性生物素等)；试剂污染(质量差，交叉反应，Fc受体干扰等)；组织处理不当(组织固定不及时或固定不良所导致的抗原弥散移位、洗涤不充分所导致的游离试剂残留等)。,内源性干扰(自发荧光、内源酶、内源性生物素等)；试剂污染,纠正的方法视原因而异，可在预实验基础上，采用有针对性
8、的纠正对策，即对症下药(具体纠正方法不展开讲了，同学们可以自己阅读讲义p123-126) 。,纠正的方法视原因而异，可在预实验基础上，采用,第四节 阳性标记的形态特征和判断,第四节,免疫组化标记具有一定形态特点，若能熟练掌握则有助于对免疫组化标记结果的正确判断。特点包括定性、定位和定量三方面。,免疫组化标记具有一定形态特点，若能熟练掌握,免疫显色强度和阳性细胞密度是定性定量指标，实际工作中常采用强度和密度结合的方法综合计量，与抗原含量有关；阳性细胞的着色形态及组织分布特点主要是定位指标，与功能有关。,免疫显色强度和阳性细胞密度是定性定量指标，实,一、阳性标记免疫特征：分弱(+)、中(+)、强(
9、+)三级。免疫荧光法（FITC为例） 则表现为浅绿色荧光、明显绿色荧光和亮绿色耀眼荧光；,一、阳性标记免疫特征：分弱(+)、中(+,免疫酶标记（HRP- DAB/H2O2）则表现为淡黄色细颗粒、棕黄色颗粒和褐黄色粗颗粒，后者耀眼易见。一般图片照像，原则上多取强阳性区域。,免疫酶标记（HRP- DAB/H2O2）则表,二、阳性标记细胞学特征（以HRP-DAB/H2O2为例） 可分为胞膜型；胞核型；胞质(浆)型；微绒毛型和复合型（胞膜-胞质兼有，胞核-胞质兼有，或微绒毛-胞质兼有）等五种阳性细胞类型。这与抗原所在部位相关联，但应注意排除因组织固定不好引起的抗原弥散假象，尤其是复合型图像。,二、阳性
10、标记细胞学特征（以HRP-DAB/H2O2为例） 可,免疫组化结果的分析和判断课件,免疫组化结果的分析和判断课件,免疫组化结果的分析和判断课件,免疫组化结果的分析和判断课件,三、阳性标记组织学特征（以HRP-DAB/H2O2为例） 免疫组化染色阳性细胞在组织中的分布排列形式可以有如下7种：局灶型；弥漫型；片块型；网状型；腺管型；腔缘型和菊团型，等。这主要取决于抗原抗体复合物在细胞内的分布和阳性细胞在组织内的群体分布特点。,三、阳性标记组织学特征（以HRP-DAB/H2O2为例） 免,四、阳性标记强度特征 依照细胞阳性着色程度（抗原含量），可分为弱阳性（+）1分；中等阳性（+）2分；强阳性（+）
11、3分。依照阳性细胞数量，可分为：弱阳性（+ ，指阳性细胞总数在25%以下）；,四、阳性标记强度特征 依照细胞阳性着色程度（抗原含量），可,中等阳性（+,指阳性细胞总数在25%49%)；强阳性（+ ，指阳性细胞总数在50%以上)。目前多采用积分综合计量。计算公式为：（+）%x1 +（+）%x2+（+）%x3；总数值1.5者为(+)。至少随机观察5-10个HPF。,中等阳性（+,指阳性细胞总数在25%49%)；强阳性（+,第五节 染色失败的可能原因,第五节,免疫组化染色的基本要求有二：实验切片的阳性抗原定位准确，呈色鲜明，背景着色浅或无，二者的比值应大于1（阳性/背景）；对照染色的结果应附合要求。
12、否则，所得实验结果都是错误的，或为假阳性或为假阴性。,免疫组化染色的基本要求有二：实验切片的阳性,假阳性是指实验切片呈阳性，阴性组织对照或阴性试剂对照也呈阳性的结果，谓之假阳性。其原因与内源性干扰，试剂不纯，交叉反应等有关。,假阳性是指实验切片呈阳性，阴性组织对照或阴性试,假阴性是指实验切片呈阴性，阳性组织对照及阴性试剂对照也均呈阴性的结果，谓之假阴性。其原因与组织处理不当，组织细胞抗原丢失或试剂错误(如漏加、错加、失效、变质等),操作失误等有关。,假阴性是指实验切片呈阴性，阳性组织对照及阴性试剂,对照结果判断：,对照结果判断：表中15结果无效，6、7结果可靠（）（）,染色失败原因：均为阴性均
13、为弱阳性（除阴性对照）背景染色过深阳性对照好，待检标本弱阳性阳性对照无背景，待检标本背景深,染色失败原因：,判断原则：实验设计抗体选择抗原定位性抗原分布不均一性,判断原则：,识别假阴性 抗原丢失或减弱 抗体失活 操作不当识别假阳性 抗原弥散 抗原异位表达 瘤细胞吞噬 病变中正常组织残留 抗体交叉反应 内源性物质着色,识别假阴性 抗原丢失或减弱,历史岳麓版第13课交通与通讯的变化资料,精品课件欢迎使用,历史岳麓版第13课交通与通讯的变化资料精品课件欢迎使用,免疫组化结果的分析和判断课件,免疫组化结果的分析和判断课件,免疫组化结果的分析和判断课件,自读教材填要点,一、铁路，更多的铁路 1地位 铁路
14、是 建设的重点，便于国计民生，成为国民经济发展的动脉。 2出现 1881年，中国自建的第一条铁路唐山 至胥各庄铁路建成通车。 1888年，宫廷专用铁路落成。,交通运输,开平,自读教材填要点 一、铁路，更多的铁路交通运输开平,3发展 (1)原因： 甲午战争以后列强激烈争夺在华铁路的 。 修路成为中国人 的强烈愿望。 (2)成果：1909年 建成通车；民国以后，各条商路修筑权收归国有。 4制约因素 政潮迭起，军阀混战，社会经济凋敝，铁路建设始终未入正轨。,修筑权,救亡图存,京张铁路,3发展修筑权救亡图存京张铁路,二、水运与航空 1水运 (1)1872年, 正式成立，标志着中国新式航运业的诞生。 (
15、2)1900年前后，民间兴办的各种轮船航运公司近百家，几乎都是在列强排挤中艰难求生。 2航空 (1)起步：1918年，附设在福建马尾造船厂的海军飞机工程处开始研制 。 (2)发展：1918年，北洋政府在交通部下设“ ”；此后十年间，航空事业获得较快发展。,轮船招商局,水上飞机,筹办航空事宜,处,二、水运与航空轮船招商局水上飞机筹办航空事宜处,三、从驿传到邮政 1邮政 (1)初办邮政： 1896年成立“大清邮政局”，此后又设 ，邮传正式脱离海关。 (2)进一步发展：1913年，北洋政府宣布裁撤全部驿站；1920年，中国首次参加 。,邮传部,万国邮联大会,三、从驿传到邮政邮传部万国邮联大会,2电讯
16、 (1)开端：1877年，福建巡抚在 架设第一条电报线，成为中国自办电报的开端。 (2)特点：进程曲折，发展缓慢，直到20世纪30年代情况才发生变化。 3交通通讯变化的影响 (1)新式交通促进了经济发展，改变了人们的通讯手段和 ， 转变了人们的思想观念。 (2)交通近代化使中国同世界的联系大大增强，使异地传输更为便捷。 (3)促进了中国的经济与社会发展，也使人们的生活 。,台湾,出行,方式,多姿多彩,2电讯台湾出行方式多姿多彩,合作探究提认知,电视剧闯关东讲述了济南章丘朱家峪人朱开山一家，从清末到九一八事变爆发闯关东的前尘往事。下图是朱开山一家从山东辗转逃亡到东北途中可能用到的四种交通工具。,
17、合作探究提认知 电视剧闯关东讲述了济南章丘,依据材料概括晚清中国交通方式的特点，并分析其成因。 提示：特点：新旧交通工具并存(或：传统的帆船、独轮车， 近代的小火轮、火车同时使用)。 原因：近代西方列强的侵略加剧了中国的贫困，阻碍社会发展；西方工业文明的冲击与示范；中国民族工业的兴起与发展；政府及各阶层人士的提倡与推动。,依据材料概括晚清中国交通方式的特点，并分析其成因。,串点成面握全局,串点成面握全局,免疫组化结果的分析和判断课件,一、近代交通业发展的原因、特点及影响 1原因 (1)先进的中国人为救国救民，积极兴办近代交通业，促进中国社会发展。 (2)列强侵华的需要。为扩大在华利益，加强控制
18、、镇压中国人民的反抗，控制和操纵中国交通建设。 (3)工业革命的成果传入中国，为近代交通业的发展提供了物质条件。,一、近代交通业发展的原因、特点及影响,2特点 (1)近代中国交通业逐渐开始近代化的进程，铁路、水运和航空都获得了一定程度的发展。 (2)近代中国交通业受到西方列强的控制和操纵。 (3)地域之间的发展不平衡。 3影响 (1)积极影响：促进了经济发展，改变了人们的出行方式，一定程度上转变了人们的思想观念；加强了中国与世界各地的联系，丰富了人们的生活。 (2)消极影响：有利于西方列强的政治侵略和经济掠夺。,2特点,1李鸿章1872年在上海创办轮船招商局，“前10年盈和，成为长江上重要商局
19、，招商局和英商太古、怡和三家呈鼎立之势”。这说明该企业的创办()A打破了外商对中国航运业的垄断B阻止了外国对中国的经济侵略C标志着中国近代化的起步D使李鸿章转变为民族资本家,1李鸿章1872年在上海创办轮船招商局，“前10年盈和，成,解析：李鸿章是地主阶级的代表，并未转化为民族资本家；洋务运动标志着中国近代化的开端，但不是具体以某个企业的创办为标志；洋务运动中民用企业的创办在一定程度上抵制了列强的经济侵略，但是并未能阻止其侵略。故B、C、D三项表述都有错误。答案：A,解析：李鸿章是地主阶级的代表，并未转化为民族资本家；洋务运动,二、近代以来交通、通讯工具的进步对人们社会生活的影响 (1)交通工
20、具和交通事业的发展，不仅推动各地经济文化交流和发展，而且也促进信息的传播，开阔人们的视野，加快生活的节奏，对人们的社会生活产生了深刻影响。 (2)通讯工具的变迁和电讯事业的发展，使信息的传递变得快捷简便，深刻地改变着人们的思想观念，影响着人们的社会生活。,二、近代以来交通、通讯工具的进步对人们社会生活的影响,2清朝黄遵宪曾作诗曰：“钟声一及时，顷刻不少留。虽有万钧柁，动如绕指柔。”这是在描写 ()A电话 B汽车C电报 D火车解析：从“万钧柁”“动如绕指柔”可推断为火车。答案：D,2清朝黄遵宪曾作诗曰：“钟声一及时，顷刻不少留。虽,免疫组化结果的分析和判断课件,典题例析,例1上海世博会曾吸引了大
21、批海内外人士利用各种交通工具前往参观。然而在19世纪七十年代，江苏沿江居民到上海，最有可能乘坐的交通工具是 () A江南制造总局的汽车 B洋人发明的火车 C轮船招商局的轮船 D福州船政局的军舰,典题例析 例1上海世博会曾吸引了大批海内外人,解析由材料信息“19世纪七十年代，由江苏沿江居民到上海”可判断最有可能是轮船招商局的轮船。 答案C,解析由材料信息“19世纪七十年代，由江苏沿江居,题组冲关,1中国近代史上首次打破列强垄断局面的交通行业是 ()A公路运输 B铁路运输C轮船运输 D航空运输解析：根据所学1872年李鸿章创办轮船招商局，这是洋务运动中由军工企业转向兼办民用企业、由官办转向官督商办
22、的第一个企业。具有打破外轮垄断中国航运业的积极意义，这在一定程度上保护了中国的权利。据此本题选C项。答案：C,题组冲关1中国近代史上首次打破列强垄断局面的交通行业是,2. 右图是1909年民呼日报上登载的一幅漫画，其要表达的主题是( )A帝国主义掠夺中国铁路权益B西方国家学习中国文化C西方列强掀起瓜分中国狂潮D西方八国组成联军侵略中国,2. 右图是1909年民呼日报上登载的,解析：从图片中可以了解到各国举的灯笼是火车形状，20世纪初的这一幅漫画正反映了帝国主义掠夺中国铁路权益。B项说法错误，C项不能反映漫画的主题，D项时间上不一致。答案：A,解析：从图片中可以了解到各国举的灯笼是火车形状，20
23、世纪初的,免疫组化结果的分析和判断课件,典题例析,例2(2010福建高考)上海是近代中国茶叶的一个外销中心。1884年，福建茶叶市场出现了茶叶收购价格与上海出口价格同步变动的现象。与这一现象直接相关的近代事业是 () A电报业 B大众报业 C铁路交通业 D轮船航运业 解析材料主要反映了信息交流的快捷，故选A。 答案A,典题例析 例2(2010福建高考)上海是近,题组冲关,3假如某爱国实业家在20世纪初需要了解全国各地商业信息，可采用的最快捷的方式是 ()A乘坐飞机赴各地了解 B通过无线电报输送讯息C通过互联网 D乘坐火车赴各地了解解析：本题考查中国近代物质生活的变迁。注意题干信息“20世纪初”
24、“最快捷的方式”，因此应选B，火车速度远不及电报快。20世纪30年代民航飞机才在中国出现，互联网出现在20世纪90年代。答案：B,题组冲关3假如某爱国实业家在20世纪初需要了解全国各地,4下列不属于通讯工具变迁和电讯事业发展影响的是()A信息传递快捷简便B改变着人们的思想观念C阻碍了人们的感情交流D影响着人们的社会生活解析：新式通讯工具方便快捷，便于人们感情的沟通和交流。答案：C,4下列不属于通讯工具变迁和电讯事业发展影响的是(),免疫组化结果的分析和判断课件,关键词交通和通讯不断进步、辛亥革命和国民大革命顺应图说历,关键词交通和通讯不断进步、辛亥革命和国民大革命顺应时图说,关键词交通和通讯不断进步、辛亥革命和国民大革命顺应时图说,
