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1、恶性肿瘤的细胞免疫疗法,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,细胞治疗的概念,广义：指给机体输入或去除细胞制剂，以增强/减弱机体的免疫应答，恢复机体的正常功能与状态。例如使用各种细胞性血液成分、细胞疫苗、干细胞移植、过继免疫细胞治疗等狭义：是取患者自身或无关供体的免疫细胞在体外经特异性抗原和细胞因子刺激，活化、增殖后，再转输入患者体内，使其在患者体内发挥抗肿瘤作用,2,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,细胞治疗的概念广义：指给机体输入或去除细胞制剂，以增强/减弱,3,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,3恶性肿瘤的细胞免疫疗法,4,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,4恶性肿瘤的细胞免疫疗法,5,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,5恶性肿瘤的细胞免疫
2、疗法,细胞治疗种类,细胞疫苗 肿瘤细胞疫苗 基因修饰瘤苗干细胞 造血干细胞（骨髓、外周血、脐血） 间充质干细胞 其他干细胞免疫性细胞 DC细胞 特异性杀伤性T细胞 LAK细胞和CIK细胞,6,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,细胞治疗种类细胞疫苗6恶性肿瘤的细胞免疫疗法,过继性细胞治疗是继手术、放疗、化疗之后的第四种模式，是最有效的免疫治疗手段之一美国食品和药品管理局（FDA）于2005年批准应用干细胞治疗心肌梗塞和创伤性脑损伤，使细胞治疗从科研走向了临床阶段理想的过继性细胞免疫治疗的活性细胞的必备条件是：对肿瘤细胞有特异性的选择性杀伤活性，对正常细胞无明显作用，不产生GVHD，无排斥，宿主能耐受，细胞
3、来源丰富，能在体内增殖，无致热原，无致病原,7,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,过继性细胞治疗是继手术、放疗、化疗之后的第四种模式，是最有效,过继性免疫细胞治疗的优点,免疫细胞通过在体外培养，绕过体内肿瘤免疫障碍，原来对肿瘤抗原已产生耐受的免疫细胞可以恢复其敏感性免疫细胞的活化及效应过程由细胞因子介导，体外活化扩增大量的抗肿瘤免疫细胞更有效免疫细胞的体外活化扩增可避免一些制剂体内大量应用带来的严重毒副作用在体外大量扩增自体或异基因的抗肿瘤免疫细胞，其数量大于肿瘤疫苗在体内激活的效应细胞数,8,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,过继性免疫细胞治疗的优点免疫细胞通过在体外培养，绕过体内肿瘤,DC治疗性疫苗的近期临床
4、研究,抗原致敏DC的策略表位肽、肿瘤抗原蛋白、编码肿瘤抗原的DNA、mRNA、病毒载体、肿瘤细胞裂解物、凋亡小体树突状细胞细胞因子(IL-2,IFN-等)树突状细胞佐剂(CD40L,KLH,Flt-3等)树突状细胞淋巴细胞,9,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,DC治疗性疫苗的近期临床研究 抗原致敏DC的策略表位肽、肿,10,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,10恶性肿瘤的细胞免疫疗法,抗原致敏的DC治疗的输注途径,静脉皮下皮内肿瘤局部淋巴结内淋巴内,11,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,抗原致敏的DC治疗的输注途径11恶性肿瘤的细胞免疫疗法,DC疫苗在前列腺癌治疗中的应用,以DC治疗性疫苗研发著名的Dendroen公司
5、，2005年已经完成了前列腺癌DC治疗性疫苗(前列腺磷酸酯酶与GM-CSF的融合蛋白致敏的DC,PROVENGE)的I-III期临床研究，获得了明显的疗效，已经向FDA提出上市申请,12,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,DC疫苗在前列腺癌治疗中的应用以DC治疗性疫苗研发著名的De,在III期临床试验的第一阶段(D9901)，127例接受治疗的前列腺癌患者中位生存时间及3年生存率分别为25.9个月和34%，高于安慰剂组的21.4和11%，而在III期临床试验的第二阶段(D9902A)接受治疗的98例患者中，中位生存时间及3年生存率分别为19个月和32%，亦高于安慰剂组的15.4个月和21%，全部III期
6、临床试验中接受治疗的患者中位生存时间及3年生存率分别为23.2个月和33%，显著高于安慰剂组的18.9个月和15%。,13,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,在III期临床试验的第一阶段(D9901)，127例,DC疫苗在恶性黑色素瘤治疗中的应用,Michael对期恶性黑色素瘤患者进行了/期的临床试验，采用经照射的自身肿瘤细胞刺激的DC经皮下输注于患者的方法。,14,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,DC疫苗在恶性黑色素瘤治疗中的应用Michael对期恶性黑,17例有足够的肿瘤组织刺激DC而接受治疗的病例，在分别接受0.9106或5106DC治疗后出现3例CR，平均维持时间为35个月，3例PR，维持时间分别为19
7、.5、8、21个月，以及6例PD（其中一例在14个月后转为CR），患者对不同剂量的DC均有良好的耐受，未见明显的副作用。,15,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,17例有足够的肿瘤组织刺激DC而接受治疗的病例，在分别接受0,DC疫苗在肾癌治疗中的应用,Holtl等 2002年完成对35名转移性肾癌患者的DC临床试验。肿瘤抗原为自体或异体癌细胞系A-498溶解产物以及KLH。,16,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,DC疫苗在肾癌治疗中的应用Holtl等 2002年完成对35,2/27名患者出现CR，1名PR，7名SD，17名PD。11/11出现对KLH的强免疫反应，5/6出现对瘤胎抗原(OFA/LRP未成熟的层粘
8、蛋白受体)免疫反应的增强，到结果公布，平均随访时间32月，且有8名病人存活。,17,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,2/27名患者出现CR，1名PR，7名SD，17名PD。11,非成熟DC瘤内注射在神经胶质瘤治疗中的应用,Yamanaka等进行了自体肿瘤细胞裂解物致敏的DC治疗复发的神经胶质瘤的/期临床试验，致敏的DC经OK-432细胞刺激成熟或不经其刺激的非成熟的DC，采用经皮内注射或瘤内与皮内相结合的方法输入患者体内。,18,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,非成熟DC瘤内注射在神经胶质瘤治疗中的应用Yamanaka等,在24名接受治疗的患者中，1/24 PR，3/24 MR，10/24 SD，10/24
9、PD，4期胶质瘤患者的总体生存时间为480天，明显高于对照组，采用两种输注方式结合的患者的有效率高于单一输注方式的患者，接受治疗的患者ELISPOT和DTH检测均标明体内产生了免疫反应。,19,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,在24名接受治疗的患者中，1/24 PR，3/24 MR，1,供者淋巴细胞输注(DLI),供者淋巴细胞可识别宿主细胞表面主要组织相容性抗原(MHC)、次要组织相容性抗原(MiHC)和肿瘤相关抗原，是天然有效的抗肿瘤工具 DLI适用于恶性血液病BMT后早期复发的患者及allo-BMT后Epstein-BaIT病毒相关的淋巴细胞增殖性疾病、巨细胞病毒感染和腺病毒感染等,20,恶性肿瘤
10、的细胞免疫疗法,供者淋巴细胞输注(DLI)供者淋巴细胞可识别宿主细胞表面主要,恶性肿瘤的细胞免疫疗法培训课件,DLI治疗BMT后白血病复发的特点,起效时间较慢：多出现于治疗后37周，达到分子水平缓解所需时问更长，约半年以上 显效者常伴有轻度至中度的急性和/或慢性GVHDalto-BMT后DLI的GVHD较alLo-BMT后并发的GVHD轻，较易处理，与输人的异基因细胞数量不成比例DLI治疗效果有明显的疾病相关性，虽对各类白血病复发均能产生一定的逆转作用，但对CM1的疗效最佳IL-2等细胞因子可增强DLI的GVL效应,22,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,DLI治疗BMT后白血病复发的特点 起效时间较慢
11、：多出现于治,细胞因子激活的杀伤细胞（CIK细胞）,CIK细胞是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子如抗CD3单抗(CD3McAb)、白介素(IL)-2、干扰素(IFN)-及IL-1等共同培养一段时间后获得的,具有非主要组织相容性抗原(MHC)限制性杀瘤活性的一群异质细胞 CIK细胞主要用于自体骨髓移植物的净化、微小残留病灶的清除及晚期恶性肿瘤(包括急慢性血液系统恶性疾病和各种实体瘤)的免疫治疗,23,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,细胞因子激活的杀伤细胞（CIK细胞）CIK细胞是将人外周血单,CIK细胞抗肿瘤的特点,CIK细胞增值速度快，且细胞活性也大大增强。CIK细胞在培养过程中加入多种细胞因
12、子后，其细胞增值速度迅速加快，远远超过LAK细胞，经过23周左右的培养，其中CD3、CD56细胞不仅绝对数量增加501000倍，而且其在总细胞中所占百分比也大幅上升 杀瘤活性高：其体内的杀瘤细胞毒性的维持不必依赖大剂量外源性IL-2的持续给予，其杀伤单位（TLU）为LAK细胞的73倍以上具有识别肿瘤的机制，对正常细胞无毒性作用。CIK细胞杀瘤活性不受CsA、FK506等免疫抑制剂的影响，其对正常骨髓造血前体细胞毒性很小,24,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,CIK细胞抗肿瘤的特点CIK细胞增值速度快，且细胞活性也大大,CIK细胞抗肿瘤的特点,杀瘤谱广，没有T淋巴细胞杀伤时的MHC限制性，对于多肿瘤细胞
13、系和新鲜肿瘤组织均表现出较大的杀伤活性。可用于白血病、淋巴瘤、胃癌、肺癌、大肠癌等多种肿瘤的治疗对多重耐药肿瘤细胞同样敏感：研究发现CIK细胞对化疗敏感的亲本细胞和不敏感的转化细胞均具有强大的杀伤活性 能抵抗肿瘤细胞引发的效应细胞FasFasL凋亡：研究表明过继性免疫治疗失败的一个重要原因是效应细胞被肿瘤细胞表面表达的某些蛋白诱导而凋亡，而CIK细胞虽然在Fas被占据后会引起少量细胞凋亡，但对其杀瘤细胞毒性没有明显影响，Verneris的研究表明CIK细胞具有合成FasL的能力,25,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,CIK细胞抗肿瘤的特点杀瘤谱广，没有T淋巴细胞杀伤时的MHC,CIK细胞与LAK细胞、
14、TIL细胞的差别,LAK细胞主要来源于CD3、CD56 NK细胞，对靶细胞的杀伤性无MHC限制性，但由于LAK细胞体外扩增能力较低和体内杀瘤活性不高，故临床应用受到限制TIL细胞是从肿瘤组织中分离出来的具有杀伤肿瘤细胞特性的淋巴细胞，杀伤活性较LAK强，但是对肿瘤的杀伤作用有MHC限制性，其在分离过程中容易变异同时体外扩增较为困难，因此难以广泛应用于临床CIK细胞的杀伤活性明显较LAK细胞为高，具有非MHC限制性，其不似TIL细胞样需要与肿瘤细胞直接接触才能增殖。由于CIK细胞具有高增殖能力和高细胞毒力且对正常骨髓细胞抑制轻微，其更适用于肿瘤生物治疗,26,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,CIK细胞与
15、LAK细胞、TIL细胞的差别LAK细胞主要来源于,CIK细胞与LAK细胞、TIL细胞的差别,27,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,项目CD3CD4CD8CD3+CD56+CD3-CD56+C,CIK细胞的作用机制,释放多种炎性细胞因子,如IFN-、TNF-、穿孔素、颗粒酶B等杀伤肿瘤细胞,亦可通过Fas途径诱导肿瘤细胞凋亡CIK细胞中的CD4+T细胞通过释放多种免疫活性细胞因子上调机体免疫力,并诱导肿瘤细胞凋亡来发挥其抗肿瘤效应。 CIK细胞与树突状细胞(DC)共同孵育后,可有效降低其中抑制性CD4+CD25+调节T细胞比例,从而显著增强CIK细胞对多种肿瘤细胞的杀伤活性,28,恶性肿瘤的细胞免疫疗法
16、,CIK细胞的作用机制释放多种炎性细胞因子,如IFN-、TN,29,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,29恶性肿瘤的细胞免疫疗法,童春容等对111例急性白血病患者行自体CIK或DC-CIK治疗,96例达完全缓解(CR),7年无病生存率(DFS)为66% Schmidt Wolf等利用人IL-2 cDNA转染的CIK细胞治疗了10例转移性实体瘤患者,1例CR,3例病情稳定,30,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,童春容等对111例急性白血病患者行自体CIK或DC-CIK治,CIK细胞治疗肿瘤临床疗效,31,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,病种例数CRPRMRSDPDCR+PR%胃癌14543832,CIK细胞过继免疫治疗的
17、副反应,CIK 细胞输注后46 h内9例患者(20.9 )出现发热反应，体温375385C，发热2 h后自动退热；1例患者出现恶心，胸闷症状，对症处理后缓解观察全身反应中，回输后引起了流感样等副作用症状，其中寒战13例，发热9例，恶心呕吐1例，全身不适3例,32,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,CIK细胞过继免疫治疗的副反应CIK 细胞输注后46 h内,体内数量少，分离纯化有一定困难必须配合系统的内科治疗出凝血机制障碍、严重感染病人需谨慎操作容易引起过敏反应和GVHD可能增加的感染机会操作本身异体过继免疫细胞,细胞过继免疫治疗存在的问题,33,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,体内数量少，分离纯化有一定困难细胞过继免疫治疗存在的问题33,谢 谢！,34,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,谢 谢！34恶性肿瘤的细胞免疫疗法,钱宝华 主任医师、教授、博士研究生导师上海长海医院输血科主任中国人民解放军上海血站主任中国人民解放军血液监督中心主任上海市临床输血质量控制中心主任,35,恶性肿瘤的细胞免疫疗法,钱宝华35恶性肿瘤的细胞免疫疗法,
