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1、分子病理学讲座,分子病理学讲座,The development of molecular and genetic approaches to the diagnosis and classification of human tumours,The design and validation of predictive biomarkers for treatment response and disease progression,The susceptibility of individuals of different genetic constitution to develop ca
2、ncer,一、分子病理学诊断的定义,开发分子和遗传学方法用于人类肿瘤诊断和分类,设计和确认生物标志物用于疾病进展和疗效的预测,不同遗传背景个体对于肿瘤发生的敏感性,The development of molecular a,二、常用分子病理学诊断方法,PCR 聚合酶链反应,FISH 荧光原位杂交,Microarray 基因芯片,二、常用分子病理学诊断方法PCR 聚合酶链反应FISH 荧光,PCR发明者获得诺贝尔化学奖,PCR发明者获得诺贝尔化学奖,三、PCR(结合DNA测序)技术在 分子病理诊断中的应用,三、PCR(结合DNA测序)技术在,基因突变检查,EGFR,c-kit,PDGFRA,k
3、-ras,B-raf,PIK3CA,基因突变检查EGFRc-kit PDGFRAk-rasB-r,EGFR基因突变与肺癌的靶向治疗,EGFR基因突变与肺癌的靶向治疗,什么是EGFR基因及其突变？,表皮生长因子受体erbB1HER1,什么是EGFR基因及其突变？表皮生长因子受体,肺癌患者为什么要进行EGFR基因突变检测？,西妥昔单抗（爱必妥）,易瑞沙（吉非替尼）,特罗凯（厄罗替尼）,肺癌患者为什么要进行EGFR基因突变检测？西妥昔单抗（爱必妥,非小细胞肺癌中药敏相关的EGFR突变,耐药,非小细胞肺癌中药敏相关的EGFR突变耐药,EGFR突变检查及其临床意义,易瑞沙和特罗凯是治疗非小细胞肺癌的重要
4、靶向药物,EGFR基因突变主要集中在酪氨酸激酶区，18，19，21外显子。19外显子约占45，21外显子约占40,突变可以增强肿瘤细胞对酪氨酸激酶抑制剂的敏感性,EGFR突变检查可以作为靶向治疗的有效预测指标,EGFR突变检查及其临床意义易瑞沙和特罗凯是治疗非小细胞肺,c-kit和PDGFRA突变检测在胃肠间质瘤诊断和治疗中的意义,c-kit 基因第11、9、13和17外显子存在突变,PDGFRA基因第12和18外显子存在突变,大多数GIST（6585）的基因突变发生在c-kit的第11或9外显子,突变使其在无配体结合的情况下，蛋白仍然保持活性,c-kit和PDGFRA突变检测c-kit 基因
5、第1,甲磺酸伊马替尼（格列卫）最初是用来治疗慢性髓性白血病，最近才用来治疗c-kit异常表达的GIST,在突变的患者中，相对于第9号外显子突变和野生型，第11号外显子突变患者疗效最佳,第9号外显子突变患者一线治疗应用800比400md/d明显延长中位无进展生存期,C-kit突变与临床治疗,甲磺酸伊马替尼（格列卫）最初是用来治疗慢性在突变的患者中，相,k-ras 基因检测及其临床应用,k-ras 基因检测及其临床应用,k-ras基因突变,k-ras基因被激活最常见的方式是点突变,多发生在N端第12,13和61密码子,其中又以第12密码子突变最常见,为GGT突变成GAT或GTT2050结直肠癌发生
6、K-ras基因突变第12和13密码子突变占90，第61密码子 占5,k-ras基因突变k-ras基因被激活最常见的方式是点突变,k-ras突变的临床意义,K-ras基因突变型患者不能从抗EGFR治疗中获益，反而增加不良反应危险和治疗费用只有k-ras基因野生型患者才能接受EGFR抑制剂（如西妥昔单抗和帕尼单抗）治疗但并不是所有k-ras基因野生型对靶向治疗都有效,k-ras突变的临床意义K-ras基因突变型患者不能从抗EG,石蜡组织中基因突变检测流程,石蜡组织中基因突变检测流程,分子病理学讲座,小 结,分子病理学检查在某些肿瘤靶向治疗 和诊断中具有重要价值,基于PCR的多种生物学技术和方法用于
7、 突变检测，各有利弊，需要合理选择,小 结分子病理学检查在某些肿瘤靶向治疗基于PCR的多,四、FISH 荧光原位杂交技术及其应用,四、FISH 荧光原位杂交技术及其应用,荧光原位杂交(FISH)技术的简介： 发展历史、原理和实验操作程序,FISH检查在肿瘤靶向治疗中的应用： 乳腺癌（Her2）、肺癌（EGFR、ALK）,FISH检查在病理诊断中的应用： 宫颈癌、膀胱癌、淋巴瘤、前列腺癌等,FISH检查在其他方面的应用： 流产、遗传病等,荧光原位杂交(FISH)技术的简介： FISH检查在肿,基本原理,碱基互补配对原则，同源的DNA-DNA，DNA-RNA, RNA-RNA两条单链在一定条件下能
8、结合成双链。用放射性或非放射性物质标记一条链作为探针，与组织切片或细胞内待测核酸（RNA或DNA）片段进行杂交，通过放射自显影或其他方法显示目的基因存在和定位。,基本原理碱基互补配对原则，同源的DNA-DNA，DNA-RN,基本原理,基本原理,组织切片脱蜡,酶消化,杂交过夜,清洗,DAPI染细胞核,荧光显微镜观察,FISH检查实验流程图,组织切片脱蜡酶消化杂交过夜清洗DAPI染细胞核荧光显微镜观察,乳腺癌和胃癌HER2 FISH检查,乳腺癌和胃癌HER2 FISH检查,荧光原位杂交探针制备,荧光原位杂交探针制备,典型的乳腺癌HER2 FISH结果,A,B,C,D,典型的乳腺癌HER2 FISH
9、结果ABCD,结 果 判 断,Ratio= Her2信号总数/CEP17信号总数,结 果 判 断HER2:CEP17胃癌 乳腺癌 无扩增,FISH检查淋巴瘤基因重排和其他应用,FISH检查淋巴瘤基因重排和其他应用,淋巴瘤FISH检测试剂盒,淋巴瘤类型探针名称涉及基因发生率临床意义B细胞淋巴瘤GLP,IGH/BCL2融合基因检测辅助诊断滤泡性淋巴瘤（FL）,IGH/BCL2融合基因检测辅助诊断滤泡性淋巴瘤（FL）,分子病理学讲座,IGH/BCL2基因FISH检测,IGH/BCL2基因FISH检测,双色双融合易位探针(IGH/BCL2）,IgHBcl2IGH/BCL2探针14（灰）号和18号（黑）
10、,正常,融合,基因拷贝数增加,双色融合易位探针( IGH/BCL2）,正常融合基因拷贝数增加双色融合易位探针( IGH/BCL2）,FISH检查在其他方面的应用,产前染色体异常诊断,遗传病染色体分析,自然流产染色体异常诊断,膀胱癌、前列腺癌,肺癌靶向治疗,FISH检查在其他方面的应用产前染色体异常诊断遗传病染色体分,小 结,FISH技术给乳腺癌、胃癌肿瘤靶向 治疗提供了金标准,为某些疾病诊断提供了无创性检查手段 病理诊断提供了有用的辅助指标,为开展科学研究提供了重要实验技术,小 结FISH技术给乳腺癌、胃癌肿瘤靶向为某些疾病诊,美国斯坦福大学病理科,美国斯坦福大学病理科,分子病理学讲座, Au
11、topsy Pathology Clinical Biochemical Genetics Clinical Chemistry Clinical Microbiology Clinical Virology Cytogenetics Cytopathology Dermatopathology Hematopathology / Clinical Hematology Immunodiagnosis Molecular Genetic Pathology Neuropathology Renal Pathology Surgical Pathology (general and consul
12、tation services) Transfusion Medicinesfusion Medicine, Autopsy Pathology,分子病理学讲座,分子病理学讲座,分子病理学讲座,分子病理学讲座,分子病理学讲座,分子病理学讲座,分子病理学诊断未来发展,细胞形态,蛋白表达,基因检测,外科病理学诊断,免疫组织化学检查,分子病理学检查,现代病理学诊断,总结,分子病理学诊断未来发展细胞形态蛋白表达基因检测外科病理学诊断,复习题,1、常用的分子病理学检查有哪些？简述其应用。2、什么是FISH检查？请举例说明该技术在临床的应用。,复习题1、常用的分子病理学检查有哪些？简述其应用。,谢 谢,Thank you,谢 谢Thank you,感谢聆听,感谢聆听,
