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1、动物检疫学高致病性禽流感,动物检疫学高致病性禽流感,2,高致病性禽流感是禽流行性感冒的简称,它是由A型流感病毒引起的一种禽类传染病。禽流感病毒感染后能够表现为轻度的呼吸道和消化道症状,死亡率较低;或表现为较严重的全身性、出血性、败血性症状,死亡率较高。,2高致病性禽流感是禽流行性感冒的简称,它是由A型流感病毒引起,3,非致病性禽流感 可不能引起明显症状,仅使染病的禽鸟体内产生病毒抗体。低致病性禽流感 可使禽类出现轻度呼吸道症状,食量减少、产蛋量下降,出现零星死亡。高致病性禽流感 最为严重,发病率和死亡率高。感染的鸡群常常“全军覆没”。,按病原体的致病性,禽流感可分为:,3 非致病性禽流感 按病
2、原体的致病性,禽流感可分为:,4,高致病性禽流感因其在禽类中传播快、危害大、病死率高等特点,被国际兽疫局定为A类传染病,又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟。现为通报性疫病,我国将其列为一类动物疫病。,4,5,近年来出现了禽流感病毒感染人的事例:1997年中国香港禽流感爆发,有12人感染H5N1型禽流感病毒,6人死亡,这是世界上首次证实禽流感感染人类;2003年4月荷兰发生H7N7型禽流感,人类感染者达89人,并出现了死亡病例;2003年11月27日,香港一男童感染禽流感;,5近年来出现了禽流感病毒感染人的事例:,6,2003年12月至2004年2月,韩国、中国台湾、日本、越南、印尼、巴基斯坦、老挝、泰国、
3、中国大陆、美国和加拿大等国家和地区相继爆发禽流感,其中在越南和泰国又出现了禽流感(H5N1)感染人类的病例,并出现了死亡。2004年禽流感的大爆发,给世界人民带来极大的恐慌。,62003年12月至2004年2月,韩国、中国台湾、日本、越,7,2005年4月,我国青海湖自然保护区候鸟感染H5N1毒株,约6000多只候鸟死亡。2006年亚洲、欧洲、亚洲均有H5N1亚型HPAI爆发。最近国内外有H5N1血清型引起的禽流感发病率和死亡率都特别高,危害巨大。,72005年4月,我国青海湖自然保护区候鸟感染H5N1毒株,8,病原,禽流感病毒属于正粘病毒科流感病毒属的A型流感病毒。病毒的基因组属于单股负链R
4、NA。典型的A型流感病毒粒子呈圆球形,有囊膜,对乙醚、氯仿、丙酮等脂溶剂敏感。,8病原禽流感病毒属于正粘病毒科流感病毒属的A型流感病毒。病毒,9,鸡瘟病毒,9鸡瘟病毒,10,依照流感病毒的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的抗原性差异,可将其分为不同的亚型。迄今为止,A型禽流感病毒的HA已发现16种,NA有9种,分别以H1-H16、N1N9命名。所有的禽流感病毒均属A型,不同毒株的致病性有差异。,10依照流感病毒的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的抗原性,11,禽流感病毒能在鸡胚上生长繁殖。以尿囊腔、羊膜腔或绒毛囊膜上感染时,强毒株病毒初代感染鸡胚后26-36h死亡。禽流感病毒通过鸡胚继代后
5、增强毒力。除鸡胚外,本病毒也能感染鸭胚和鸽胚。犬肾细胞(MDCK)广泛用于流感病毒的分离培养。非洲绿猴肾细胞(Vero)也适用于A型流感病毒的分离培养。,11禽流感病毒能在鸡胚上生长繁殖。以尿囊腔、羊膜腔或绒毛囊膜,12,流感病毒能凝集鸡、豚鼠、猫、小白鼠、马、绵羊、人和其他动物红细胞。对干燥和低温的抵抗力强。低温和冻干状态下可保存病毒。不耐热,病毒经55、1h灭活,60经20min灭活,100 2分钟即被灭活。,12流感病毒能凝集鸡、豚鼠、猫、小白鼠、马、绵羊、人和其他动,13,常用消毒剂容易将其灭活,如氧化剂、稀酸、漂白粉和碘剂等都能迅速破坏其活性。,13常用消毒剂容易将其灭活,如氧化剂、
6、稀酸、漂白粉和碘剂等都,14,流行病学,各种家禽(火鸡、鸡、珠鸡、石鸡、鹤鹑、雉、鹅及鸭)和野禽(包括鸭、鹅、矶鹬、燕鸥、鹭、海鸥、天鹅等)均易感。从迁徙水禽,尤其是鸭中分离的病毒最多;流感在家禽中对火鸡和鸡的危害最严重。,14流行病学各种家禽(火鸡、鸡、珠鸡、石鸡、鹤鹑、雉、鹅及鸭,15,现在发现,禽流感病毒能直截了当感染人,并可引起发病甚至死亡。在实验室人工试验中,猪、水貂、猴、猫等均可被禽流感病毒感染。,15现在发现,禽流感病毒能直截了当感染人,并可引起发病甚至死,16,禽流感病毒可通过消化道和呼吸道进入人体传染给人,也可经过眼结膜和破损皮肤引起感染。人类直截了当接触受禽流感病毒感染的家
7、禽及其粪便或直截了当接触禽流感病毒也能够被感染,并可引起发病甚至死亡。,16禽流感病毒可通过消化道和呼吸道进入人体传染给人,也可经过,17,流行特点:发病急、传播快、流行范围广,常呈地方性或大面积流行,其中高致病性禽流感的发病率与死亡率均可高达100%。该病一年四季均可流行,但以冬季和气温骤冷骤热的季节更易暴发。,17流行特点:发病急、传播快、流行范围广,常呈地方性或大面积,18,临床检疫,1、临床症状禽流感的症状依感染禽类的品种、年龄、性别、并发感染程度、病毒毒力和环境因素等而有所不同,主要表现为呼吸道、消化道、生殖系统或神经系统的异常。,18临床检疫 1、临床症状,19,病鸡头部肿胀,冠和
8、肉髯发黑,眼分泌物增多,眼结膜潮红、水肿,羽毛蓬松无光泽,体温升高;下痢,粪便黄绿色并带多量的黏液或血液;呼吸困难,歪头;产蛋率急剧下降或几乎完全停止,蛋壳变薄、褪色、无壳蛋、畸形蛋增多;鸡脚鳞片下呈紫红色或紫黑色。在发病后的5d7d内死亡率几乎达到100%。少数病程较长或耐过未死的病鸡出现神经症状,包括转圈、前冲、后退、颈部扭歪或后仰望天等。,19病鸡头部肿胀,冠和肉髯发黑,眼分泌物增多,眼结膜潮红、水,20,20,21,肉髯发绀,21肉髯发绀,22,鸡冠和肉垂肿胀发绀,22鸡冠和肉垂肿胀发绀,23,23,24,24,25,脚磷片下出血,25 脚磷片下出血,26,26,27,27,28,神经
9、症状,呼吸症状,28神经症状 呼吸症状,29,禽流感病鸭具有神经症状,29禽流感病鸭具有神经症状,30,30,31,2、病理变化,最急性型病鸡常无眼观变化。急性者可见头部和颜面浮肿,鸡冠、肉髯肿大达三倍以上;皮下有黄色胶样浸润、出血,胸、腹部脂肪有紫红色出血斑;心包积水,心外膜有点状或条纹状坏死,心肌软化;病鸡胸部肌肉有出血点或出血斑。消化道变化表现为腺胃乳头水肿、出血,肌胃角质层下出血,肌胃与腺胃交界处呈带状或环状出血;肝、脾、肾瘀血肿大,有灰黄色小坏死灶;,312、病理变化 最急性型病鸡常无眼观变化。,32,呼吸道有大量炎性分泌物或灰黄色干酪样坏死;胸腺萎缩,有不同程度的点、斑状出血;法氏
10、囊萎缩或呈黄色水肿,有充血、出血;母鸡卵泡充血、出血,卵黄液变稀薄;严重者卵泡破裂,卵黄散落到腹腔中,形成卵黄性腹膜炎,腹腔中充满稀薄的卵黄。输卵管水肿、充血,内有浆液性、黏液性或干酪样物质。,32呼吸道有大量炎性分泌物或灰黄色干酪样坏死;,33,33,34,34,35,35,36,36,37,37,38,38,39,39,40,40,41,脚鳞出血(严重病例),41脚鳞出血(严重病例),42,42发病鸡胸肌出血产蛋鸡输卵管中的粘液渗出物流感病鸡心冠脂肪,43,43,44,44,45,禽流感病鸭胰腺白坏死点,45禽流感病鸭胰腺白坏死点,46,鹅流感胰,46鹅流感胰,47,实验室检疫,诊断技术:
11、我国已建立琼脂扩散(AGP)技术、亚型分型技术、病毒分子诊断与检测技术。国家监测标准:流行性感冒诊断标准及处理原则,47实验室检疫诊断技术:我国已建立琼脂扩散(AGP)技术、亚,48,1、样品采集:(1)病料样品:至少从5只病禽和病死禽中采集病料样品。样品应包括:泄殖腔(新鲜粪尿样)棉拭子和气管棉拭子(置于缓冲液体中);气管和肺的混样;肠管及内容物的混样;肝、脾、肾、脑等其他组织样品(不能混样)。,481、样品采集:,49,组织和气管拭子悬液中加入青霉素(2000IU/ml)、链霉素(2mg/ml)或庆大霉素(50g/ml)。肠管及内容物、粪便样品和泄殖腔棉拭子所用的抗生素浓度应提高5倍。,4
12、9组织和气管拭子悬液中加入青霉素(2000IU/ml)、链,50,(2)血样:分别采集至少10只病禽的,并单独存放,不能混合。,50(2)血样:分别采集至少10只病禽的,并单独存放,不能混,51,2、电镜观察禽流感病毒一般为球形,直径为80120nm,但也常有同样直径的丝状形态,长短不一。病毒表面有1012nm的密集钉状物或纤突覆盖,病毒囊膜内有螺旋形核衣壳。两种不同形状的表面钉状物是HA(棒状三聚体)和NA(蘑菇形四聚体)。,512、电镜观察,52,3、病毒分离鉴定将感染鸡胚或病禽气管、脾、肺、肾和脑等可用磷酸缓冲液或肉汤培养基制成10倍乳剂,加抗菌素抑菌;如系泄殖腔拭子,可将拭子在溶液中浸
13、渍后去掉拭子,然后用2500-3000r/min离心30min,除残渣,滤过液接种9-11d的SPF鸡胚尿囊腔分离病毒。,523、病毒分离鉴定,53,在35-37孵化箱内孵育,18h后每8h观察鸡胚死亡情况。病毒收获:无菌收取18h以后的死胚及96h仍存活的鸡胚尿囊液,作血凝试验,以鉴定病毒。阳性反应说明估计有正粘病毒科的流感病毒;若无血凝活性或血凝价特别低,则用尿囊液接着传2-3代,并重复以上血凝试验,若仍阴性,则认为病毒分离阴性。,53在35-37孵化箱内孵育,18h后每8h观察鸡胚死亡情,54,4、血清学检查琼脂扩散试验(AGP):用于流感病毒型的鉴定,是用病毒的核蛋白抗原检查血清中的抗
14、体。既能够定性(如免疫双扩散及免疫电泳中以沉淀线判定),又能够定量(如单辐射扩散)。比较简便、快捷。,544、血清学检查,55,血凝试验(HA)与血凝抑制试验(HI):证实流感病毒的血疑活性及排除NDV,也可用病毒抗原鉴定流感病毒的亚型。简单的方法是:取1滴1:10稀释的正常鸡血清(最好是SPF鸡)和1滴ND抗血清,分别滴于瓷板上,再各加1滴有血凝活性的鸡胚尿囊液,混匀后各加1滴5的鸡红细胞悬液,若两份血清均出现血凝现象,则表明尿囊液中不含有新城疫病毒(NDV);假如ND抗血清出现HI现象,表明尿囊液中含NDV。,55血凝试验(HA)与血凝抑制试验(HI):证实流感病毒的,56,神经氨酸酶抑制
15、试验(NIT):利用流感病毒的糖蛋白神经氨酸酶与底物的反应来检测病毒的存在与否。用于鉴定AIV另一种表面抗原神经氨酸酶(NA)的亚型。,56神经氨酸酶抑制试验(NIT):,57,具体方法是:在96孔聚苯乙烯平板反应孔中分别加入已稀释好的羊膜尿囊液25l,然后分别加入1-9型已处理的NA抗血清25l,振荡混匀,室温静置1h,每孔加入25l胎球蛋白,37孵育3h,每孔加入25l砷试剂至最先出现棕色的孔褪色,最后每孔加入100l 1、6%硫酸巴比妥,将反应板用56水漂洗30-60min后判定结果,呈粉红色为抗血清NI阴性,无粉红色为抗血清NI阳性。依照结果判定AIV亚型。NIT实验一般需在AI中心实
16、验室方可进行。,57具体方法是:在96孔聚苯乙烯平板反应孔中分别加入已稀释好,58,ELISA:具有较高的敏感性,既能够检测抗体,又能够检测抗原。尤其适合于大批样品的血清学调查,能够标准化而且结果易于分析。在流感的控制、扑灭、检疫中特别有用途。,58ELISA:具有较高的敏感性,既能够检测抗体,又能够检测,59,中和试验以中和试验(NT)来鉴定或滴定流感病毒时,常用鸡胚或组织培养细胞,操作方法与其他病毒(如NDV)的中和试验相同。取9-10日龄鸡胚接种后37 孵育3-4d,鸡胚死亡出现HA活性,表示鸡胚感染流感病毒。但由于中和试验的操作相当繁琐,费时间也较长,试验材料耗费也多,没有条件和不必要时可不进行。,59中和试验,60,免疫荧光技术 常用直截了当荧光抗体法,即在组织触(印)片上直截了当染色,以荧光显微镜检查荧光。一种AIV的荧光抗体能够用来检测同亚型的其他病毒。荧光抗体技术用于诊断,具有快速、简便、敏感等特点,而且费用较低。需要有荧光显微镜才能观察。,60免疫荧光技术,61,5、分子生物学技术(RT-PCR)检测禽流感病毒核酸。,615、分子生物学技术(RT-PCR),感谢您的聆听！,感谢您的聆听！,
