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1、特定蛋白的检测方法与质量控制,重庆市涪陵中心医院 涂伟2023/1/6,几个有关蛋白数字：200050020050,概述,特定蛋白：,白蛋白、前白蛋白、转铁蛋白、C反应蛋白、AAT、AAG、铜蓝蛋白、视黄醇结合蛋白、纤维蛋白、巨球蛋白、免疫球蛋白、补体、脂蛋白,因为这些蛋白都具有”某一特定抗原性”,多采用免疫方法对血液、尿液、脑脊液等标本进行检测,故专称这些蛋白统称为”特定蛋白”。,分类,免疫球蛋白及补体系列风湿及类风湿系列尿微量蛋白系列急性炎症蛋白营养状态神经系统疾病检测血液病疾病检测心脑血管疾病,肾功能监测尿微量白蛋白(MA)尿转铁蛋白(TRU)尿免疫球蛋白(IgU)1-微球蛋白(1-M)
2、2-微球蛋白(2-M)痕迹蛋白(Cystatin C),心血管疾病风险评估载脂蛋白A-1(apoA-1)载脂蛋白B(apoB)脂蛋白(a)(Lp(a)超敏CRP,神经系统疾病白蛋白(ALB)2-巨球蛋白(AMG)免疫球蛋白A(IgA,脑脊液)免疫球蛋白G(IgG,脑脊液)免疫球蛋白M(IgM,脑脊液),免疫功能监测免疫球蛋白A(IGA)免疫球蛋白E(IGE)免疫球蛋白G(IGG)免疫球蛋白M(IGM)IgG14亚型补体C3(C3)补体C4(C4)轻链(KAP)轻链(LAM)Free 轻链Free 轻链,类风湿类关节炎类风湿因子(RF)抗链球菌溶血素O(ASO)C-反应蛋白(CRP),检测项目人
3、体示意图,不同检测方法检测范围,常量检测,微量检测,痕量检测,检测方法,胶乳法免疫比浊法,检测方法发展历程,定性,定量,专业化,半定量,透射免疫比浊法,原理,抗原与抗体在一定缓冲液中形成IC，当光线透过反应溶液时，由于溶液内IC粒子对光线的反射和吸收，引起透射光减少，IC越多透射光越少，可用吸光度表示。,透射比浊法测定遵循的原理,Lambert-Beer定律（朗伯-比尔定律）,检测器,光源 透镜 滤光片,平光线,透射光,透射免疫比浊法,IC足够大(35-100nm)IC足够多控制温度和时间使用增敏剂保证抗体效价标准曲线定量,反应要求,透射免疫比浊法,灵敏度较低。要求抗原抗体复合物分子应足够大、
4、足够多，分子太小则入射光直接通过。直线光路，灵敏度有缺陷。透射比浊是依据透射光减弱的原理来定量的，因此只能测定抗原抗体反应的第二阶段，检测仍需抗原抗体温育反应时间，检测时间较长。,缺陷,散射免疫比浊法,抗原抗体复合物对一定波长的光产生折射、偏转，偏转角度及散射光强度与复合物粒子的大小和量有关。,原理,单色器,散射比浊计,散射光,Rayleigh定律（瑞利散射定律）粒子尺度远小于入射光波长时（小于波长的十分之一），其各方向上的散射光强度是不一样的，该强度与入射光的波长四次方成反比，这种现象称为瑞利散射。,散射比浊法测定遵循的原理,散射免疫比浊法,终点散射比浊分析,速率散射比浊分析,应用特点,抗原
5、抗体结合速率,抗原抗体结合量,终点散射法与速率散射法,透射比浊法与散射比浊法,特定蛋白检测的实验室影响因素及质量控制,基本等同常规的实验检测项目分析前质量控制类似了解实验室可以开展的检验项目熟悉检验项目的方法学特性，如不准确度等通知病人进行适当的准备避免药物干扰因素适当的采集时间,适当的采集量及时送检对不合格标本及时进行处理，尤其是脂血标本的影响适当的采集顺序对抗凝标本进行及时和适当的摇匀及时离心避免剧烈震荡造成溶血,分析前的质量控制,分析中的质量控制,检验结果的溯源性：仪器生产厂家沿用国际认可的标准品CRM-470,各重要厂商将其作为第一标准，提高不同参加的可比性，避免标值化不一带来的差异。,钩状效应（HOOK现象）会导致假阴性,抗原过量检测技术,保证特定蛋白分析系统的稳定性仪器、试剂、校准品、质控品,分析后的质量控制,临床反馈意见收集，相互沟通，持续改进临床应用的评估，与相关疾病的相关性检测结果的影响因素,谢谢聆听！,
