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1、克氏双糖铁（KIA）复合实验,克氏双糖铁（KIA）复合实验,双糖铁培养基的原理,【原理】：该培养基用酚红作指示剂，而产酸在酸性时呈黄色，碱性时呈红色。细菌如能发酵乳糖和葡萄糖而产酸产气，则斜面与底层均呈黄色，且有气泡。如只发酵葡萄糖不发酵乳糖，因葡萄糖含量少，斜面所生的少量酸可因接触空气而氧化挥发，从而使斜面部分保持原来的红色；底层由于是在相对缺氧状态下，细菌发酵葡萄糖所生成的酸类物质不被氧化挥发而保持黄色。如细菌分解蛋白产生硫化氢，则与硫化亚铁作用生成黑色的硫化铁，使培养基变黑。,双糖铁培养基的成分,下层：蛋白胨1g；氯化钠0.5g；葡萄糖0.2g；琼脂0.3-0.5g；水100ml将上述物
2、质混匀调PH7.6后加1.2%酚红0.4ml上层：蛋白胨1g：氯化钠0.5g：乳糖1g；硫代硫酸钠0.03g；硫酸亚铁0.02g；琼脂1g；水100ml,双糖铁培养基的配置 1.将下层配好，分装中号试管（1ml），塞好包扎，高压灭菌半小时，使凝固后备用。2.制上层时，先将蛋白胨水制好，加入硫酸亚铁，硫代硫酸钠，加热溶解pH8.1，再加入酚红分瓶，（每瓶300ml，称取琼脂包扎灭菌，趁热加入乳糖隔水煮沸30min或112消毒15min）。3.取已制的下层管，每管用无菌法倒入上层液约1.5ml，边斜放置使成斜面，凝固后备用。,双糖铁培养基的用途,用途：初步鉴别肠道致病菌用，可以观察葡萄糖、乳糖的发
3、酵，并可观察有无H2S产生及细菌有无动力。,双糖铁培养基上各菌的生长特点,含有乳糖和葡萄糖：产酸产气含有硫酸亚铁：如细菌分解含硫氨基酸生成 硫化氢，可形成黑色沉淀酚红指示剂：酸 黄 碱 红,1)大肠杆菌发酵乳糖和葡萄糖产酸产气（糖发酵试验），使斜面及底层均呈黄色并有气泡。2)沙门菌和志贺菌只发酵葡萄糖，不发酵乳糖，分解葡萄糖产的酸使培养基pH下降，酚红指示剂变黄，但是培养基中的葡萄糖仅有0.1%，在斜面的酸性物质被氧化成挥发性酸，且细菌氧化氨基酸物质产生的氨的中和作用，使斜面变红，而底层则为黄色。,双糖铁培养基上各菌的生长现象,大肠杆菌黄色有气泡伤寒杆菌上红下黄中间有黑色沉淀痢疾杆菌上红下黄,thank you!,
