磁珠法核酸提取新篇章ppt课件.ppt

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1、磁珠法核酸提取的新篇章,洛阳惠尔纳米科技狄光辉13683842418Q:625006192,核酸提取方法进展,核酸抽提是下游核酸检测、研究或产品开发的起点,所分离的核酸的质量和完整性直接影响研究或诊断结果,因此核酸抽提是分子生物学最关键的方法之一。成功的核酸分离纯化需要四个重要步骤:组织或细胞的破碎和裂解,核蛋白复合体的变性,核酸酶的灭活以及污染物的去除。,传统核酸提取方法,酚-氯仿抽提法,碱抽提法,CTAB抽提法,纤维素膜层析法,核酸固相抽提法,市场上大多数商业核酸抽提试剂盒采用固相抽提法。相对于传统方法,固相抽提更快速和高效。它解决了许多液-液抽提存在的诸多问题,如分离不完全等。,固相抽提

2、方法的支持物主要有硅胶、玻璃颗粒、阴离子交换树脂、磁性颗粒。固相抽提包括细胞裂解、核酸吸附、漂洗和洗脱四个关键性的步骤。,提取原理,首先,基于碱裂解法使细胞膜破裂,以及组蛋白变性,释放核酸。,然后,将经裂解液处理的样本转移到固相支持物上,在结合液的帮助下靶核酸被吸附到支持物上。,蛋白质等其他化合物也可与支持物表面发生结合,但通过目的性洗涤过程可以被除掉。,最后,以TE缓冲液或蒸馏水将纯净的靶核酸从支持物上释放下来。,离心柱法提取DNA,磁珠法提取DNA,裂解使核酸游离出来,结合加入磁珠,使核酸与其结合,洗涤洗去残留杂质,洗脱将核酸从磁珠中分离出到溶液,纯化分离磁珠,得到高纯度核酸溶液,比较(以

3、全血为例),离心柱法产品效果图,磁珠法产品效果图,核酸自动化抽提系统,自动化抽提系统是可高通量地处理样品、有助于简化分离步骤的一种大型、复杂的仪器操作系统。自动化提取的优点有:减少人为工作时间,降低人力成本、增加工作者的安全性以及提高结果的可重复性和质量。,核酸自动提取仪,磁棒,深孔板,磁珠法核酸提取的核心是生物磁珠,是一种新型的功能化固体载体,其表面包被有活性基团,可与多种生物活性物质发生偶联,兼具有液体的流动性和固体磁性材料等特点。,生物磁珠的介绍,生物磁珠按功能集团分类及应用领域,Fe3O4磁性微球,硅基(硅羟基),氨基/羧基,生物磁珠的制备方法,植物、动物基因组DNA及细菌质粒提取试剂

4、盒,磁珠法DNA提取试剂盒的介绍,应用:,和中科院植物研究所合作,提取百年以上植物的DNA,用于后续的分型及特定位点的分析,可用于海关、畜牧检验,检测进出口肉制品或者家禽是否携带病毒,提取质粒,用作基因工程的常用载体,临床疾病诊断:人类的很多疾病和基因密切相关,白血病、地中海贫血、肾衰竭等都能用基因技术进行分型检测,再寻找合适的供体进行移植治疗;叶酸代谢能力基因检测;DNA亲子鉴定;胎儿性别检测动物疾病检测:布鲁菌病(brucellosis,布病),也称波状热,是布鲁菌引起的急性或慢性传染病,人畜共患病。科学研究:医学、农牧、生物相关分子生物学定量研究。应用行业:各级各类医疗机构、疾病预防控制

5、中心、血站、大学及研究所、兽医站等。,全血试剂盒,病毒试剂盒,能够从血清、血浆等多种病毒样品中(如HBV、HPV、HCV),高效提取和分离病毒总DNA或RNA,也可适用于组织细胞或分泌物样本中的病毒总核酸,提取产物可以直接用于下游应用,如荧光定量PCR或定量逆转录PCR等。,1.生物磁珠具有小尺寸效应和表面效应,可高效核酸提取,满足微量生物样本核酸提取的要求。2.不使用酚、氯仿、异戊醇等有毒试剂,安全无毒,绿色环保。3.生物磁珠能够通过仪器进行自动化操作,满足数据库建设对大批量样本提取的需要,减少人为因素4.用时少,操作简单,适用于大多数生物检材。5.全自动核酸提取最大限度地减少了操作人员与检测的接触,可有效保护实验操作人员。,优点,谢谢,

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