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1、诊断学-实验一,白细胞计数 浙江中医药大学附属二院,实验一、白细胞计数,1.原理：血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞，在血细胞计数池内计数规定区域内的白细胞总数，换算成每升血液中白细胞数。2.试剂器材 白细胞稀释液：冰乙酸 2.0ml 10g/L亚甲蓝 3滴 加蒸馏水 至100ml,器材 改良牛鲍血细胞计数板及专用盖片、微量吸管、带孔吸头、1ML刻度移液管、小试管、洁净软纱布、干棉球、光学显微镜。,毛细血管采血标准操作程序,操作步骤：1 采血部位成人以左手无名指内侧为宜，半岁以下婴幼儿通常自拇指内侧或足跟两侧采血。2 轻轻按摩采血部位。3 用棉签蘸消毒液消毒局部皮肤、待干。,4 紧捏刺血部位
2、，使其自然充血。5 用无菌刺针穿刺取血，动作应迅速，深度 23mm，稍加挤压以血液流出为宜。6 用干棉球擦去第一滴血。7 按需要依次采血。8 采血完毕，用干棉球压住伤口，止血片刻。,微量吸管的使用,1将带孔乳胶吸头轻轻套在微量吸管上，连接紧密不漏气；2拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中指轻微挤压排出适量空气；3将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血液会吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有气泡），吸管呈水平略下垂，松开示指；4用干棉球顺吸管向下拭尽管外余血（保证血量准确），轻触吸管下口吸去多余血量，使管内抗凝血正处所需刻度；5将微量吸管插入小试管底部，三指轻微
3、用力慢慢排出血液，用上清液冲洗管内余血2-3次，轻摇试管混匀；6拔出微量吸管弃入污物桶。,3.操作步骤（1）加稀释液 用移液管向小试管内加入0.38ml白细胞稀释液。（2）采血、稀释用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，释放于小试 管底部，用上部稀释液洗净吸管内余血，轻摇试管混匀，静置等其溶血。（3）清洁计数板及盖片（动作轻柔），夹持盖片缘纵向前推轻放于两侧支持堤上。（4）充计数池将小试管轻微振荡2min，立即以一次性微量吸管吸取混匀后的白细胞悬液，充入计数池内。静置2-3min，使细胞沉于计数池底面。（5）调试显微镜 将计数板放置载物台上，选择（4）低倍镜，调节聚光器使光线较暗，调节旋钮找到
4、方格线，转至低倍镜（10），调节光亮。（6）计数 低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数，压线细胞数上不数下，数左不数右。,结果计算白细胞总数=4大格白细胞数（N）/410 20 106=N 20 109/L用.109/L（小数点后一位）表示,5细胞计数原则,大方格四边压线细胞数左不数右，数上不数下，弓形移动,实验报告内容,原理试剂器材操作步骤实验结果讨论,诊断学 实验二,白细胞分类,1.分类原理：白细胞分类计数是将血液制备成涂片，瑞氏染色后显微镜下根据白细胞的形态特征进行分类计数。通常分类100个白细胞，计算得出各种白细胞所占百分比,2.瑞氏染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，离解为带正电的碱性美兰
5、（M+）和带负电的酸性伊红（E-）离子。细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。各种细胞成分的化学性质不同，对染料的亲和力也不一样，故可呈不同的着色特点。,3.器材光学显微镜推片，载玻片试剂Wright染液 Wright 1.0g 甲醇 600ml磷酸盐缓冲液（PH6.46.8）香柏油标本来源EDTA-K2抗凝全血,3白细胞分类：细胞分布均匀的体尾交界处，滴加香柏油一滴，油镜下分类计数。分类时要有秩序的连续进行，避免主观选择视野。通常分类计数100个白细胞，计算并报告各种白细胞所占比例。,结果记录方式：Ne 正 一 Ly 正Mo 正Eo 正Ba 正,中性粒细胞（Ne）：在瑞氏染色血涂
6、片上呈圆形，胞浆染粉红色，核形一叶（杆状核）至五叶不等，以三叶者多见，染成深紫红色，胞浆中有许多细小均匀紫红色颗粒。,各类成熟白细胞的形态学：,嗜酸性粒细胞（Eo）：较中性粒细胞稍大，胞核多为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红色，胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。,嗜碱性粒细胞（Ba）：胞浆中含有大小不等的嗜碱性颗粒，瑞氏染色时呈兰黑色。于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；核呈淡紫红色常看不清，呈杆状或分叶状。,淋巴细胞（Ly）：胞体呈圆形，在成人血涂片中以小淋巴细胞为多见，核大呈深紫色致密而浓染，胞浆量极少；大淋巴细胞胞浆量较多，呈清澈的淡蓝色，可见少量嗜苯胺蓝颗粒，胞核圆或椭圆，常偏向细胞一侧，染色较深。,单核细胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上为1220m，胞体圆形、椭圆形或不规则形；核形多种多样，最重要的特点是染色质较细致疏松，呈丝网状或条缕状，着色较淡胞浆较多，淡兰色，含大量细小尘土样颗粒。,正常成人外周血白细胞分类参考值：Ne 50%70%Ly 20%40%Mo 3%8%Eo 0.5%5%Ba 0%1%,实验报告,原理方法各类细胞百分比报告讨论,
