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1、1,1、培养基可以分为哪两类？,2、培养基一般都含有哪些营养物质，此外还要满足哪些要求？,3、获得纯净培养物的关键是什么？,（答案在课本勾划）,2,4、避免杂菌污染的方法主要包括哪四个方面,5、什么是消毒、灭菌，常用方法有哪些？,6、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤,7、如何倒平板？,3,一般都含有水、碳源、和氮源、无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气等的要求。,2、培养基一般都含有哪些营养物质，此外还要满足哪些要求？,特殊营养物质如：细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶),4,消毒的方法：,1、煮沸消毒法:100煮沸5-
2、6min2、巴氏消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源4、紫外线或化学药物消毒,5,一、距离有近有远，朋友相互惦念，时间有长有短，再忙也要见面，季节有早有晚，牵挂天地之间，岁月有冷有暖，贴心话语交谈，情谊有深有浅，要有短信相连，只要好友相伴，万事皆能圆满，祝你幸福绕牵，生日欢乐开颜！二、我愿化作你蜡烛的火光，照亮你前程一片，我愿化作你许愿的流星，实现你梦想心愿，我愿化作一条温馨的祝愿，飘到你手机，道一句，生日快乐。三、头版头条头一句，生日快乐，绝版绝句绝对棒，幸福甜蜜，大刊小刊附加刊，你要如意，朋友今天你
3、生日，阅读一下我清晨为你送来的生日礼报吧。四、想知道我最近在忙什么吗？我转了山路十八弯，翻过珠穆朗玛，走过天路，就是为求佛，祝你生日快乐，祈求你好人一生平安。五、生日送你宝马车，成功路上乐悠悠。生日送你依波表，真情无限到永久。生日送你派克笔，温文尔雅写传奇。生日送你红牡丹，富贵吉祥没有头！六、某年某月某日的纪念，一缕春风，一个晴天，一注眺望，在远方，一条信息，一句问候，一份祝愿，在眼前，朋友，生日快乐。七、短信或长或短，总代表我最真挚的祝福；祝福或多或少，始终是我对你最贴心的关怀；今天是你生日，那么就送上我最朴实的,灭菌的方法：,1、灼烧灭菌2、干热灭菌：160-170 下加热1-2h。3、高
4、压蒸汽灭菌：100kPa、121 下维持15-30min.,6,7,纯化大肠杆菌,接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法,8,平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面.在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落.,9,10,微生物的恒温培养,11,问题讨论,1.答:(1)操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐
5、渐减少，以便得到菌落。,(2)划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。,12,2.答：以免接种环温度太高，杀死菌种。,3.答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。,13,14,15,问题讨论,涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？,应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。,16,菌种的保
6、存,1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4冰箱保存。2、长期保存：甘油冷冻管藏法,课本标注、笔记,17,课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,18,一、课题背景,1、尿素的利用,尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。,2、细菌利用尿素的原因,土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶,19,4、课题目的,从土壤中分离出能够分解尿素的细菌,统计每克土壤样品中究竟含有多少这样 的细菌,20,一.研究思路,.筛选菌株,.统计菌落数目,.设置对照,21,1、实例：,启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的 要求，到相应的环境中去
7、寻找。,原因：因为热泉温度70800C，淘汰了绝大多 数微生物只有Taq细菌被筛选出来。,DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。,.筛选菌株,22,2、实验室中微生物的筛选原理：,人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。,什么是选择性培养基？,23,3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：,从物理性质看此培养基属于哪类？,固体培养基,24,在此培养基中哪些作为碳源、氮源？,碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素,培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素
8、作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。,5、培养基选择分解尿素的微生物的原理,25,6、怎样证明此培养基具有选择性呢？,以尿素为唯一氮源的培养基,牛肉膏蛋白胨培养基,是,分离尿素细菌,判断该培养基有无选择性,只生长尿素细菌,生长多种微生物,是,26,6、怎样证明此培养基具有选择性呢？,以尿素为唯一氮源的培养基,牛肉膏蛋白胨培养基,是,分离尿素细菌,判断该培养基有无选择性,只生长尿素细菌,生长多种微生物,是,27,1、显微镜直接计数：,利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。,.统计菌落
9、数目：,不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；,缺点,28,2.间接计数法（活菌计数法）原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。常用方法：稀释涂布平板法。,每克样品中的菌落数(CV)M其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。,29,注意事项为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板上进行计数。为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。统
10、计的菌落往往比活菌的实际数目低。,30,设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。,.设置对照：,31,实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌 落数目的实验时，A同学从对应的106 倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌 落，但是其他同学在同样的稀释度下 只选择出大约50个菌落。分析其原因。,原因：土样不同，培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质),32,小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。,方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验,方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证
11、明培养基是否受到污染。,结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。,33,二.实验的具体操作.土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。.制备培养基：制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。,34,应在火焰旁称取土壤10g。在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行,三样品的稀释,35,.取样涂布,实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。,36,.取样涂布,分离不同的微生物采用不同的稀释度,原因：不
12、同微生物在土壤中含量不同,37,.微生物的培养与观察,思考：要将哪些培养皿进行培养？,38,.微生物的培养与观察,在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。,培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌：3037培养12d放线菌：2528培养57d霉菌：2528的温度下培养34d。,39,如果得到了2个或2个以上菌落数目在30300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。,40,微生物的培养与观察,41,三.结果分析与评价1.通过对照实
13、验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。2.提示：选择每个平板上长有30300个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。,42,四、操作提示,无菌操作,做好标记,规划时间,43,五.课外延伸 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。,测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红美蓝 培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。,44,大肠杆菌呈 黑色中心,有或无金属光泽,大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征,45,本课题知识小结:,46,根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。优点：标准化生产，组分和含量相对固定;成本低 缺点：缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。,合成培养基:,47,天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。优点：营养成分丰富，培养效果好缺点：来源受限;成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染;,天然培养基：,
