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1、PCR实验室关键设计问题解答,主要设计依据有哪些？,1、医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导 则卫办医政发2010194号 2、实验室 生物安全通用要求 GB19489-2008 3、生物安全实验室建筑技术规范 GB50346-2011 4、疾病预防控制中心技术标准 建标127-2009,传统PCR 分为四个区：试剂准备区、样本制备区、核酸扩增区、产物分析区,实验室需要几个功能区？,本次新冠：使用RT-PCR 需要三个区：试剂准备区、样本制备区、扩增分析区,产物分析室,核酸扩增室,样本制备室,传统PCR,试剂准备室,4区,荧光定量室,样本制备室,试剂准备室,RT-PCR,3区,全自动定量（荧光
2、定量）RT-PCR仪,实验室各个区必须相邻布置吗？,分散布置形式-各个区不相邻,集中布置形式-各个区 相邻,不是。实验室可分为两种形式：,实验室设计的核心控制目标是什么？,控制生物危害，防止病毒污染人员、环 境,1,控制核酸污染试剂、样本、操作过程，防止影响检测结果,2,一定要设置缓冲间吗？似乎浪费面积,试剂准备室,核酸扩增室,产物分析室,样本制备室,缓冲,缓冲,缓冲,缓冲,是独立分区设置缓冲,缓冲间是阻隔空气交换的首要措施,不 首先设 缓冲间,试剂制备室,核酸扩增室,产物分析室,PCR专用走廊,样本制备室,缓冲,缓冲,缓冲,缓冲,所谓PCR走廊并无积多少极作用。面积不足时，不设走廊,集中式，
3、一定需要PCR专用走廊吗？,当工作面积足够时，可设走廊,在控制交叉污染方面，并无多少积 极作用。相反，更易导致交叉污染应优先设置缓冲间,关于“PCR专用走廊”,作用：主要是将实验室与其他区域分 开。这种分开并无实质性意义,说明：,鉴于本次新冠检测，要求人员采取三级防护，基本上比平常BSL-2实验室防护多出一道（双层防护）。因此，样本制备间（BSL-2）的缓冲间宜适当扩大，用于脱卸第二层（内层）防护服、帽子、口罩和手套等防护用品之所,可利用走廊，设计定向气流，空气从走廊试剂间端流向分析间端，减少空气倒流,若设走廊 可作前室：放置更衣柜，用以更换 清洁工作衣帽；存放物品,若设PCR专用走廊，可化不
4、利为有利,BSL-2 负压 是否更加安全？,负压的主要作用是保护环境，而非人员。室内负压，可阻止空气无组织外泄,负压实验室，设计正确，如气流组织由低风险区流向高风险区（定向气流）、避免房间气流干扰生物安全柜气流（横向干扰）等设计符合要求，才能起到保护人员的作用。反之，则更加危险,负压核心工作间气流组织,排风口,送风口,生安柜,人 员,-定向气流-避免横向干扰,排风口,生安柜,送风口,中间送风对角/四角排风,排风口,洁净室的做法,NO,常见问题 不符合定向气流原则-NO,一、试剂准备间,干净房间，重点保护对象，不得被核酸污染,压力：常压或正压。若正压，可按10Pa设计,实验室压力如何确定？,二、
5、样本制备间,样本制备间为 BSL-2既是重点防范对象，又是重点保护对象！防止病原微生物外泄和污染人员 同时，防止样本被核酸污染,压力：常压或负压,BSL-2分为二种形式：,普通BSL-2 负压BSL-2/加强型BSL-2,可以是非封闭结构，允许开窗（须加纱窗）,普通BSL-2 分 二种状况,可以是封闭结构，应设置排风扇等排风装置,符合GB19489-2008“实验室应有通风换气的条件”的规定,开 窗：常压 排风扇：“负压”，不作恒压控制。可按-10Pa选择排风扇,普通BSL-2的压力,压力：可按-10Pa（缓冲间为常压）计算 也可按-20Pa（缓冲间-10Pa）计算,负压/加强型 BSL-2的
6、压力,不 无论选择常压，还是负压实验室，均符合 新冠病毒核酸检测要求，合规、合理 只要实验室本身没有问题,新冠检测 BSL-2 一定要负压吗？,三、核酸扩增间,需防止核酸外溢,压力：负压，可按-20Pa（缓冲间为常压）计算，也按可按-30Pa（缓冲间-20Pa）计算,四、产物分析间按,需防止核酸外溢,压力：可安-30Pa（缓冲间常压）计算，也可 按-40Pa（缓冲间-30Pa）计算,前述的“负压、正压”,并非专指 恒定 负压、正压,特别说明：,可按照从试剂储存和准备区标本制 备区扩增区扩增产物分析区方向空气压力递减的方式进行。可通过安装排风扇、负压排风装置或其他可行的方式实现,导则,非恒定负压
7、如同厕所排风，控制臭气外溢 虽然“负压”，但非负压厕所,缓冲间设计为正压或最负压是否合理？,1、设计为正压，有名曰“防护墙”2、设计为负压，有名曰“负压陷阱”,无论是正压，还是负压，在人员进出，开启缓冲间门的时候，都会增加工作区的空气外溢的程度,不,保持定向气流,压力递减的作用（横向、纵向）,阻止空气外溢、倒流,是铁律，最可靠、有效的措施,实验室空气是否一定要净化？,不房间空气是否净化，与实验结果没有什 么关系。换句话说，不需要净化。,用户要求净化的，可按净化设计,如何设置通风空调？,可采用简单做法：普通排风装置（如排风扇）温度控制住 装置（如分体空调、暖气等），作非恒定 负压设计,向室外排风
8、即可达到减少空气外 溢的目的,可采用复杂做法：集中空调系统 作恒定负压设计。顺便达 成洁净、恒温、恒湿,采用普通排风装置,常压/正压,缓冲间,走廊,常压,-10Pa,-20Pa,缓冲间,自然态,自然态,试剂,样本,扩增,分析,BSL-2,BSL-2,排风扇,进 风,常压/正压,缓冲间,走廊,-10Pa,-20Pa,-30Pa,自然态,自然态,自然态,试剂,样本,扩增,分析,BSL-2,BSL-2,进排风,排风扇,采用普通排风装置,常压/正压,常/正,-10Pa,-20Pa,-30Pa,常压,-10Pa,-20Pa,试剂,样本,扩增,分析,BSL-2,专用走廊 自然态,集中空调系统 恒压设计,常
9、压,常压/正压,常/正,-20Pa,-30Pa,-40Pa,-10Pa,-20Pa,-30Pa,试剂,样本,扩增,分析,BSL-2,专用走廊 自然态,集中空调系统 恒压设计,负压,集中空调通风系统,原则,集送,分排,集中送风、分别排风,送风-可采用一套集中空调系统-对所有工作区 集中送风；各送风支管安装电动密闭阀，停机室自动关闭，防止因特殊情况使房间 之间通过风管产生交叉污染,排风 试剂准备间-可只送不排-若有排风，应设置独立排风 样本准备间-属于P2/X，若设排风，应设置独立排风 核酸扩增间、产物分析间-可分别独立排风-也可两间合并排风,实验室必须设置洗手池吗？,不是,样本制备间：有生物风险
10、，依GB19489-2008，可采用手消毒措施代替水洗手,其他三房间：无病原微生物污染风险,设洗手池的，应有确保下水病原灭活措施,实验室必须设冲淋洗眼装置吗？,对于冲淋装置：依据GB19489-2008，实验室检测并不需要使用腐蚀性试剂，因此，不需要设置冲淋装置,对于洗眼装置：大多数实验室为了避免上水供应和下水处理所带来的麻烦，通常选用洗眼瓶。这也是国外实验室常见的做法,实验室必须设污物走廊？洁污分流？,不是生物安全实验室不允许污染外泄，废弃物可安全打包，必要时表面消毒，确保安全运输。也可原地消毒 既无“污物”，则不需污物走廊,难道有了污物走廊就可以让走廊被污染吗？可以肆无忌惮吗？,设置污物走廊，会有占用面积、实验室复杂化（包括硬件与软件）等诸多问题,BSL-2,BSL-2,污物走廊-依然连通公共区域,污染走廊,是否一定要使用B2型生物安全柜吗？,不是,无论是A2，还是B2，均符合生物安全要求,生安柜启用前及安装、搬运、更换部件后应检测合格,由于B2 排风量大，会使实验室压力控制难度上升，需格外谨慎,是否一定要在核心工作间设置高压锅？,不是,GB19489-2008：应在实验室或其所在建筑内配备高压蒸汽灭菌器或其他适当的消毒灭菌设备,可在实验室设高压灭菌器，但会带来很多麻烦,常见的比较可行的做法是设置公共消洗室。将废弃物安全打包，送至消洗间高压消毒灭菌,
