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1、20.01.2023,1,第三讲生物安全实验室的设施和设备,各类实验室安全设备的要求,实验室安全设备主要有生物安全柜高压灭菌器离心机安全罩洗眼器个人防护装备,原理、等级和种类,生物安全柜biological safety cabinet,BSC,操作及应用,维修和监测,使用实验室生物安全柜目的,1.确保工作人员不受实验对象侵染2.保障公众健康3.保护样品,为什么使用生物安全柜,国标要求操作有害实验生物因子必须在生物安全柜内进行可以避免气溶胶扩散至室内外可使工作面达到要求的洁净环境国际通用,生物安全柜级别、种类和原理,生物安全柜 种类 BSC有三个级别，一共有六种。级为密闭袖套操作，其余为前开口
2、操作。,级、级和级BSC的差异,BSC-示意,BSC-级生物安全柜原理图 A 前开口 B 可视窗 C 排风HEPA过滤器 D 压力排风系统,BSC-II 美国,II级A1型,1、风机将房间空气经前面的开口引入 安全柜内并进入前面的进风格栅内2、空气流入速度至少应该达0.38 m/s3、供气先通过送风HEPA过滤器，再向 下流动通过工作台面 4、空气在向下流动到距工作台面大约 618 cm处分开，其中的一半通 过前面的排风格栅，而另一半则通 过后面的排风格栅排出5、所有在工作台面形成的气溶胶立刻 被向下的气流带走，并经两组排风格 栅排出，从而为实验对象提供最好的 保护,A 前开口；B 窗口；C
3、排风HEPA过滤器；D 后面的压力排风系统；E 送风HEPA过滤器；F 风机,II级A1型生物安全柜 不带排风管路,II级A1型生物安全柜,可保护:样品 操作人员环境 适用于生物安全1、2、3级的样品，要求样品没有挥发性有毒化学物质及挥发性放射核素。,BSCII,II级A2型,级A2型生物安全柜,1、空气流入速度至少 达0.38-0.51m/s2、Type A2 带排风管路,100 fpm 吸风量 70%气体循环使用.30%气体排出，既可以接管道外排，也可以不接管道直接排放在实验室,II级A2型生物安全柜,级B1型生物安全柜,适用于含有微量挥发性有毒化学物质或痕量放射性核素的微生物学研究,A
4、前开口；B 窗口；C 排风HEPA过滤器；D 供风HEPA过滤器；E 负压压力排风系统；F 风机；G 送风过滤器安全柜需要有与建筑物排风系统相连接的排风接口,美国II级B1型,II级B1型,BSC-II级B2型,II级B2型,全排 100 fpm吸气量 没有气体循环利用100%气体外排，适用于P3实验室。,II级B2 型生物安全柜,可保护 样品 操作人员 环境 II级B2型可以用于生物安全1,2,或3级的样品，如病原微生物，以及在这些微生物研究中用到的挥发性有毒化学品及放射性核素。,II级B2 型生物安全柜,III级生物安全柜,BSC-III,BSC-III,生物安全柜的选择,首先必须是通过安
5、全认证的产品。美国NSF 标准，欧洲 TUVEN12469 标准 由厂家直接销售或可信度非常高的代理商提供的产品，保证售后服务。选择时注意生物安全柜的风帘宽度，风帘越宽，安全性越高。前部两侧的乱流问题是否得以解决。更换滤膜的成本是否较低。,生物安全柜的选择,生物安全柜的放置,放置生物安全柜的实验室，电压必须稳定，电流大于14A。远离门和窗。与墙壁有30cm的间距。预留出空间连接管道，外接的排气口要比楼层高2米。A/B3型和 B2型安全柜要放置在专用房间。定好仪器后再确定施工方。,生物安全柜的使用,1.正确安装，确保安全柜与外部排风系统压力平衡，保证安全柜处于正常工作状态。2.定期维护和检测，确
6、保安全性。3.注意保洁，每天做完实验后，清除所有废弃物，再用75%酒精消毒。4.一般滤膜有5-10年使用寿命，在仪器压力表显示压力为50%时候，需更换滤膜。,在生物安全柜上工作,在开始工作前应考虑实验中的操作步骤和 所需设备，充分做好准备工作。尽量减少房间内的走动，保证正常气流。准备好消毒剂和处理外逸事件的物品。,定制计划,在生物安全柜上工作,关掉紫外灯，前窗开至适当高度，打开安全柜的灯和风扇。先开排风机后开送风机。检查出风口是否有障碍物，等待5min。用消毒液彻底洗净手和手臂、穿长袖工作服和手套并带防护目镜.,开始,在生物安全柜上工作,用70%的乙醇溶液或适当的消毒剂擦拭工作区域的表面。,清
7、洁,在生物安全柜上工作,安全柜内只放本次实验所需的物品。出风口不要有障碍物。大物体之间要保持一定距离。把前窗降至适当高度。等2-3min以吹扫污染物。,上样,在生物安全柜上工作,所有物品离前窗至少2英寸，所有污染性的操作 尽量远离工作区域的后部。干净和被污染的物品分开放置；被污染的物品尽量不要进入干净区域，应放置在工作区域的后部。操作时物品和手臂不要穿过前窗。,在生物安全柜上工作,干净的物品,理想的工作台摆放原则 清洁污染区 在工作台面上的实验操作应该按照从清洁区到污染区的方向进行,被污染的区域,废弃物托盘,垃圾袋,在生物安全柜上工作,避免使用明火，用适当的灭菌措施。避免使用干扰安全柜内层流的
8、实验手段。如使用中有外溢，所有物品被拿走前必须经去污染处理。安全柜必须处于操作状态时，才能彻底消毒内壁。,在生物安全柜内应避免使用明火。-使用明火会对气流产生影响。-特别在处理挥发性物品和易燃物品时，也易造成危险。-在对接种环进行灭菌时，可以使用微型燃烧器或电炉，而不应使用明火。,明 火,在生物安全柜上操作,工作结束后，安全柜继续开机2-3min吹扫工作区的污染物。,在生物安全柜上工作,与污染物接触过的物品从生物安全柜中取出之前必须经表面去污处理。所有的托盘或容器从安全柜中取出前必须盖上。,下样,在生物安全柜上工作,用消毒剂清洁所有内壁，待其干燥。定期抬起工作面清洁下面的区域；洗净抹布。扔掉橡
9、胶手套；适当洗涤工作服，用杀菌液彻底清洁手和手臂。,清洁,在生物安全柜上工作,关闭灯、风机、关闭前窗，打开紫外灯。关闭时先关送风机后关排风机。,关机,维护、更换过滤器的清除微生物污染,在对安全柜进行维护、更换过滤器以及性能测试时，如果需要接触安全柜的污染部分时，则必须进行清除污染。在进行认证测试以前，以及在进行气体消毒以前，应使用适当的消毒剂清除所有内部工作表面和暴露内表面的污染。,清除微生物污染,当安全柜已经操作过为二级,三类生物安全水平的危险因子时，在进行认证或测试以前需要对整个安全柜进行气体消毒。当安全柜已经操作过为三级,二类生物安全水平的危险因子时，则应对整个安全柜进行气体消毒。,移动到另一地方之前的清除微生物污染,可能受生物因子污染的安全柜，在移动到另一地方之前应适当地清除污染在研究试剂溢漏或沷洒以后，受污染表面应适当地清除污染,测试机构进行质量认证时，要求生物安全柜按相应程序进行测试,要做到 除了在测定标称风速时以外，厂家提供的安全柜内所有备选的可卸部件在测试时也必须安装到所在位置。,性能测试概述,HEPA过滤器泄漏,HEPA过滤器、过滤器外壳以及固定框架可以采用邻苯二甲酸二辛酯,DOP或其替代品来检漏，检漏时安全柜在标称风速下工作。,小 结,熟悉各级生物安全实验室的设施和设备要求；掌握生物安全柜的原理、分类和使用。,
