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1、第七章：尿液分析仪检验,第七章 尿液分析仪检验,一：干化学尿液分析仪检验二：尿液有形成分分析仪检验三：尿液分析仪检验的质量控制(分析前、中、后),一：尿液干化学分析仪检验,（一）干化学分析仪的组成（二）干化学试带（三）干化学的检测原理（四）干化学的检测参数（五）干化学的检测结果（六）干化学检测的方法学评价(七）干化学检测的质量保证,一：干化学分析仪检验,（一）干化学分析仪的组成1：机械系统2：光学系统3：电路（子）系统,1：机械系统,主要作用：是在微电脑的控制下，将待测的试带传送到预定的检测位置，检测完成后将试带输送到废物盒中。,1：机械系统,不同厂家、不同型号的仪器可能采取不同的机械装置，如
2、齿轮传输、胶带传输、机械臂传输等。全自动的尿干化学分析仪还包括自动进样传输装置、样本混匀器、定量吸样针等。,2：光学系统,光学系统一般包括光源、单色光处理、光电转换三部分。光线照射到反应物表面产生反射光，光电转换器件将不同强度的反射光转换为电信号进行处理。,2：光学系统,光学系统通常有四（三）种：发光二极管(light emitting diode)系统卤钨灯滤光片分光系统电荷耦合器件(charge coupling device)冷光源检测系统,3：电路系统,将转换后的电信号放大，经模/数转换后送中央处理器(CPU)处理，计算出最终检测结果，可将结果输出至屏幕显示和（或）送打印机打印。电信号
3、转换为数字信号 外接电脑与有形成分整合，构成一个完整的检验（分析）报告。,3：电路系统,CPU的作用不仅是负责检测数据的处理，而且要控制整个机械系统、光学系统的运作,并通过软件实现多种功能。,一：干化学分析仪检验,（二）：干化学试带1：单项试带2：多联试带,尿液分析试纸的发展,1956年:美国人Alfred Free 葡萄糖氧化酶法 检测 尿葡萄糖人类尿液分析史上的里程碑,检测原理,肉眼 颜色变化再与标准版进行比较 得出相应的值。粗的，不准确的。,进展,80年代中期计算机技术的高度发展和广泛使用经济的发展尿液分析仪才得以迅猛发展：半自动 全自动 低端 高端 非人性化 人性化,1：单项试带,干化
4、学发展初期的一种检测试带，也是最基本的结构形式。以滤纸为载体，将各种试剂成分浸渍干燥，作为试剂层，再在表面覆盖一层纤维膜，作为反射层。尿液浸入试带后与试剂发生反应，产生颜色变化。,2：多联试带,多联试带是将多种检测项目的试剂块，按一定间隔、顺序固定在同一个试带上，可同时测定多个项目。,2：多联试带,它采用了多层膜结构：第一层是尼龙膜层，起保护作用，防止大分子物质对反应的污染。有些,2：多联试带,第二层是绒制层 试剂层含有试剂成分，主要与尿液中所测定化学物质发生反应，产生颜色变化。碘酸盐层可破坏VitC等干扰物质（有些试带无碘酸盐层，但增加了一块检测VitC的试剂块，以校正VitC对某些项目的测
5、定干扰）。还有.,2：多联试带,第三层是吸水层，可使尿液均匀快速地渗入，并能抑制尿液流到相邻反应区。第四层是支持体，由尿液不浸润的塑料片做成。,尿液试纸的发展,1956年，Lilly 和Ames公司分别生产了基于葡萄糖氧化酶原理的尿糖试带，分别命名为Testape 和Clinistix。1957年，Ames公司又生产出了半定量测定蛋白质的Albustix试带。1958年，能同时检测葡萄糖和蛋白质的复合试带Uristix也亦生产并应用于临床。1972年，Clemens 和Hurtle公司制造了Clinilab自动化分析仪，才使尿液化学分析真正实现自动化。,国内尿液分析试纸的现状,国外品牌：泰力特
6、尿分析仪系列的MULTISTIX 10 SG试带罗氏液分析仪系列的Combur 10 Test 试带京都尿液分析仪系列的Arkray试带 拜耳尿液分析仪系列的试带科宝尿液分析试带国内品牌：多,3：几点说明,1:不同型号的尿干化学分析仪使用其配套的专用试带，且测试项目试剂块的排列顺序是有可能不相同的。2:各试剂块与尿液中被测尿液成分的反应呈现不同的颜色变化。,3：几点说明,3:通常情况下，试带上的试剂块要比测试项目多一个空白块，以消除尿液本身的颜色在试剂块上所产生的测试误差。4:不同厂家的试带对同一个项目的敏感性不一样。,一：尿液干化学分析仪检查,（三）：尿液干化学法检测原理 尿液中相应的化学成
7、分使尿多联试带上各种含特定试剂的试剂块发生颜色变化，颜色深浅与尿液中相应物质的浓度成正比。,（三）：尿液干化学法检测原理,当尿试带进入分析仪比色槽时，各试剂块依次受到仪器不同光源照射并产生不同的反射光，仪器接收不同强度的光信号后将其转换为相应的电讯号，经微处理器处理，由下列公式计算出各测试项目的反射率与标准曲线比较校正，最后以定性或半定量方式自动输出结果。,（三）：尿液干化学法检测原理,反射率公式R=(Tm Cs)/(Ts Cm)式中：R为反射率Tm 试剂块对测定波长的反射强度Ts 试剂块对参考波长的反射强度Cm 标准块对测定渡长的反射强度Cs 标准块对参考波长的反射强度,（三）：尿液干化学法
8、检测原理,尿干化学分析测试原理的本质是光的吸收和反射。试剂块颜色的深浅对光的吸收、反射是不一样的。颜色越深，光吸收越大，光反射越小，反射率越小；反之，颜色越浅，光吸越小，光反射越大，反射率也越大。,（三）：尿液干化学法检测原理,各种试剂块颜色的深浅与尿液中的某种待测的化学成分浓度成正比。尽管不同厂家的尿干化学分析仪对光的判读形式不一样，但不同强度的反射光都需经光电转换器件转换为电信号进行处理却是一致的。,两次比色,概念：根据反应情况的不同，将检测项目分批（两次）进行比色，而不是将同一试剂垫的呈色反应比色两次。优点，在比色波长确定的情况下，有利于反应慢的试剂垫的呈色反应，以使检测结果更接近真值。
9、缺点：检测少量的标本耗时较长。,例1,Parameter Measuring head 1 Measyring head 2SG 620nmPH 620nm/LEUCOCYTES 555nmNITRITE 555nmPROTEIN 555nmGLUCOSE 555nmKETONE 555nm UBG 555nmBILIRUBIN 555nmERYTHROCYTE 660nm/,a moving measuring head,LED Test Surce Detector Analog-Digital-ConverterResult Microprocessor,一：尿液干化学分析仪检查,（四）
10、检测参数 从最初的单一测试到多项测试，尿干化学分析仪检测参数随尿试带的发展而发展。目前常用的检测试带主要包括酸碱度、蛋白、葡萄糖、酮体、胆红素、尿胆原、红细胞或血红蛋白或隐血、亚硝酸盐、白细胞、比密、VitC等。,（四）检测参数,尿干化学分析仪的分类有时也依据检测参数的多少来分：尿八项分析试带。尿八项干化学分析仪尿十项分析试带。尿十项干化学分析仪尿十一项分析试带。尿十一项干化学分析仪尿十二项分析试带 尿十二项干化学分析仪,（四）检测参数-pH,1：酸碱度(pH)采用酸碱指示剂法。pH试剂块含有甲基红(pH4.66.2)和溴麝香草酚蓝(pH6.07.6)两种酸碱指示剂，颜色在pH4.59.0的范
11、围内，由橙红经黄绿到蓝色变化。,（四）检测参数-SG,2：比密(specific gravity，SG)采用多聚电解质离子解离法。比密试剂块含有多聚电解质甲氧乙烯顺丁烯二酸(methoxyethylene maleic acid)、酸碱指示剂(溴麝香草酚蓝)及缓冲物。,（四）检测参数-SG,2：比密(specific gravity，SG)经过处理的多聚电解质的Pka改变与尿液中离子浓度相关。在测试过程中，尿液中以盐类形式存在的电解质(M+X-)在水溶液中解离出M+阳离子，并与离子交换体中的H+置换释放出H+。,（四）检测参数-SG,溴麝香草酚蓝(pH6.27.0)以分子型和离子型两种形式共存
12、，不同的比例呈现不同的色泽变化。分子型居多时呈黄色，离子型居多时呈蓝色。,（四）检测参数-SG,偏高时，所含盐类成分较多，试剂块中电解质多聚体释放出的H+增多，试带中溴麝香草酚蓝为分子型，呈现黄色。偏低时，所含盐类成分较少，试带中电解质多聚体释放出的H+减低，溴麝香草酚蓝多为离子型，呈现蓝色。,（四）检测参数-SG,这种尿液中所含盐类成分的高低可由试剂块中的酸碱指示剂变化显现出来，颜色由蓝经绿、茶绿至黄色变化，进而换算成尿液的比密。,（四）检测参数-GLU,3:葡萄糖(glucose，GLU)采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法。GLU试剂块含有葡萄糖氧化酶(GOD)、过氧化物酶法（POD）、色素原
13、等。,（四）检测参数-GLU,葡萄糖氧化酶在空气中氧和水条件下作用于尿液中葡萄糖，形成葡萄糖酸内酯和过氧化氢，过氧化物酶催化，氧化色素原生成有色色素，试剂块中颜色的深浅与尿液中葡萄糖浓度成正比。,（四）检测参数-PRO,4:蛋白质(protein，PRO)采用pH指示剂蛋白质误差法。在pH3.2时，溴酚蓝产生的阴离子，与带阳离子的蛋白质结合发生颜色变化。蛋白质试剂块含有四溴酚蓝、柠檬酸、柠檬酸盐和表面活性剂等，四溴酚蓝为酸碱指示剂，同时也是灵敏的蛋白显色剂。,（四）检测参数-PRO,含有蛋白时，由于蛋白质离子对指示剂相反电荷的吸引而生成复合物，引起指示剂进一步电离，当超过缓冲范围时，指示剂发生
14、颜色改变。根据尿液中蛋白质含量高低，试剂块发生由黄经绿到蓝的颜色变化，呈色的深浅与蛋白质含量成正比。,（四）检测参数-KET,5:酮体(ketone，KET)采用亚硝基铁氰化钠法。酮体是脂肪分解代谢过程中的产物。尿酮体包括乙酰乙酸、丙酮和-羟丁酸三种形式。,（四）检测参数-KET,酮体试剂块主要含有亚硝基铁氰化钠、甘氨酸、碱缓冲剂。在碱性条件下，亚硝基铁氰化钠可与尿液中的乙酰乙酸、丙酮起反应，试剂块发生由黄色到紫色的颜色变化，呈色深浅与酮体含量成正比。,（四）检测参数-BIL,6:胆红素(bilirubin，BIL)采用重氮反应法。胆红素试剂块主要含有2,4-二氯苯胺重氮盐、缓冲剂及其它表面活
15、性物质。,（四）检测参数-BIL,6:胆红素(bilirubin，BIL)在强酸性介质中，结合胆红素与二氯苯胺重氮盐起偶联反应，生成红色化合物。试剂块发生由黄色到红色的颜色变化，呈色深浅与胆红素含量成正比。,（四）检测参数-URO,7:尿胆原(urobilinogen，URO)采用Ehrlich醛反应法或重氮反应法。尿胆原试剂块主要含有对-二甲氨基苯甲醛、缓冲剂及其它表面活性物质。,（四）检测参数-URO,7:尿胆原(urobilinogen，URO)利用尿胆原在强酸性条件下与对-二甲氨基苯甲醛发生醛化反应，生成樱红色化合物，试剂块发生由黄色到红色的颜色变化，呈色的深浅与尿胆原含量成正比。,（
16、四）检测参数-ERY,8:红细胞或隐血(erythrocyteERY或blood，BLD)采用血红蛋白类过氧化物酶活性法。含有亚铁血红素，有类过氧化物酶活性，可催化试剂块中的过氧化氢烯钴和色素原四甲基联苯胺(或邻甲联苯胺)，后者脱氢而显色。颜色深浅与血红蛋白或红细胞含量成正比。,（四）检测参数-NIT,9:亚硝酸盐(nitrite，NIT)采用亚硝酸盐还原法。亚硝酸盐试剂块主要含有对氨基苯砷酸(或氨基磺酸)、N-萘基乙二胺等。成正比。,（四）检测参数-NIT,9:亚硝酸盐(nitrite，NIT)具有硝酸盐还原酶的细菌增加时，如大肠埃希氏菌，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐，并将试剂块中的氨基苯砷酸重
17、氮化而成重氮盐，再与N-萘基乙二胺偶联，呈现由黄至红色的变化，颜色的深浅与亚硝酸盐含量成正比。,（四）检测参数-LEU,10:白细胞(1eukocyte，LEU或white blood cell，WBC)采用白细胞酯酶法。白细胞试剂块主要含有吲哚酚酯、重氮盐等。,（四）检测参数-LEU,粒细胞中存在酯酶，它能作用于试剂块中的吲哚酚酯，产生吲哚酚，吲哚酚与重氮盐发生反应形成紫色化合物，试剂块发生由黄至紫的颜色变化，颜色的深浅与白细胞含量成正比。,（四）检测参数-VitC,11:VitC 采用还原法。主要含有2,6-二氯酚靛(dian)酚钠。VitC具有1,2-烯二醇还原性基团，在酸性条件下，能将
18、氧化态粉红色的2,6-二氯酚靛酚染料还原为无色的2,6-二氯二对酚胺，试剂块发生颜色变化与尿中VitC的浓度相关。,（四）检测参数-微量清蛋白,12:微量清蛋白。目前有利用蛋白误差原理。使用对白蛋白灵敏度高的黄肽染料，可以用干化学的方法方便地检测尿微白蛋白。,一：干化学分析仪检查,（五）：检测结果随机尿：pH 4.58.0 比密（SG）1.0151.025 尿胆原(URO)阴性或弱阳性,（五）：检测结果,葡萄糖（GLU）、蛋白质（PRO）红细胞（BLD）、酮体(KET)胆红素（BIL）、白细胞（LEU）亚硝酸盐 均阴性,一：干化学分析仪检查,（六）尿液干化学检测的方化学评价1：优点检测标本用量
19、较少；速度快、项目多；重复性好、准确性较高；适用于大批量标本筛检；易于标准化、易于质量控制。,（六）干化学的方化学评价,2：缺点不能替代病理性尿标本的显微镜检查，对白细胞、管型和结晶类型的检测，都是属于间接检测，而且专一性都比较差，甚至无能为力。难判断红细胞的形态特征，在肾性与非肾性疾病的鉴别诊断中意义下降。,（六）干化学的方化学评价,2：缺点尿蛋白以检测清蛋白为主，对球蛋白不敏感，故不适用于肾病患者。易受多种药物或其它外源性物质或人为等因素的干扰，引起检测结果的错误，出现假阳性或假阴性。,（六）干化学的方化学评价,2：缺点亚硝酸盐试验只对肠杆菌科有硝酸盐还原酶的细菌有效，因而有一定的局限性。
20、多联试带保存和使用要求高。,（六）干化学的方化学评价,2：缺点 由于干化学是呈色反应，因此受食物、药物、饮水量等的影响。由于检测红细胞用的是血红蛋白的弱的过氧化物酶活性，因此对于破坏、溶解的红细胞无法证实。,（六）干化学的方化学评价,鉴于此：尿干化学分析法不能完全取代传统的湿化学检验和尿有形成分的检查。只能起初筛作用,1、不同仪器的检测波长,德国Bayer公司Clinitek100：557nm、610nm、660nm。日本京都AE-4020:430nm、565nm、635nm、760nm AX-4280:565nm、635nm，430nm、500nm、760nm,Roche公司,Miditro
21、n Junior 2型:551nm、620nm、656nmMiditron M:555nm、620nm、660nm Urisys 1800:470nm、555nm、620nmUrisys 2400:470nm、555nm、620nm,2、半定量级差,不同检测体系其半定量能级不完全一致AUTION Sticks：+-+2+3+4+0.15 0.3 1.0 3.0 10.0Combur-10 Test：+2+3+4+0.25 0.75 1.5 5.0,NCCLS早期规定：,1：干化学半定量检测不能把阳性检测为阴性（假阴性/漏检），不能把阴性检测为阳性（假阳性/误诊）。2：对于阳性的尿液标本，可在靶
22、值上下间波动一个能量级。,3、试剂垫的顺序,Combur-10 Test：空白、HB、BIL、URO、KET、GLU、PRO、NIT、LEU、PH、SG=。AUTION Sticks：=空白、LEU、NIT、KET、BLD、SG、PH、URO、BIL、PRO、GLU。,4、检测项目英文差异,AUTION Sticks：URO BLOOD Combur-10 Test：UBG ERY,一：干化学分析仪检查,（七）尿液干化学检测的质量保证 任何外源性物质、人为因素、仪器故障等都可以导致检测结果的假阳性或假阴性。,（七）干化学检测的质量保证,不同试带的质量高低、不同试带的试剂垫成分不完全相同、不同项
23、目的检测时间点不一样，不同项目的入射光不一样，因此，呈色的程度、灵敏度、特异性也不完全相同。导致检测结果的不一致。,（七）干化学检测的质量保证,1：分析前的质量保证2：分析中的质量保证3：分析后的质量保证,1：分析前的质量保证,正确的尿液标本收集方法与时间有效的标本标记与识别规定的时间内完成检测等应了解患者的进食及用药情况（如VitC对 尿糖，青霉素对蛋白的测定有影响）,2：分析中的质量保证,严格、规范、正确的实验操作应用尿液质控物来监控、判断尿干化学分 析仪是否处于最佳或正常的工作状态。质控尿液可以购买商品化产品，也可人工 配制。,2：分析中的质量保证,全面维护和定期校正、按规范化质控程序进
24、行，每次使用“正常”和“异常”两种浓度的质控尿液。任意一个质控结果与质控尿液“靶值”允许有1个定性等级的差异，超过此范围或结果认为失控。在“正常与异常”之间跳跃均应视为失控。,3：分析后的质量保证,参考值范围的认可报告单书写是否规范(统一的模板)报告单回报时间是否及时(TAT)与临床的沟通等等,总结,尿液干化学分析仪组成分三个部分。尿液干化学试带。检测原理。检测参数。方法学评价。质量保证。,思考题,如何评价一个完整的干化学结果？如何保证我们所检测的结果的准确性？有了干化学，还需做有形成分的检测吗？肉眼血尿的标本，其结果怎么解释？何为尿液常规检测的体系？,THANK YOU FOU YOUR ATTENTION,
