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1、大豆抗原蛋白与仔猪过敏性腹泻,谯仕彦 教授中国农业大学上海源耀生物股份有限公司2014年4月16日中国上海,内容提要,仔猪腹泻发生的原因,传染性病因 1.1 病毒性腹泻传染性胃肠炎、轮状病毒感染1.2 细菌性腹泻仔猪黄痢、仔猪白痢、仔猪副伤寒、仔猪红痢,2.免疫系统因素,1,2,3,4,周龄,6,7,5,6,8,4,2,免疫力,主动免疫,被动免疫（母乳）,3.应激因素3.1 温度骤变 皮下脂肪薄，被毛稀少：保温能力差；糖原水平低，产热能力不足，因此仔猪对冷相当敏感,1,2,3,4,周龄,6,7,5,6,8,4,2,免疫力,主动免疫,被动免疫（母乳）,断奶,3.2 断奶应激,胃酸分泌不足，消化酶
2、活性不高 母乳 饲料,饲料（营养）因素4.1 营养消化不良,日粮抗原蛋白过敏导致仔猪腹泻的一个重要因素,饲料（营养）因素4.2 日粮抗原过敏,仔猪日粮抗原蛋白的来源,植物性饲料,大 豆大豆制品,大豆中含多种抗营养因子,大豆抗原蛋白是由 Duke等（1934）首次发现 婴儿过敏 Castimapoolas和Ekenstam（1969）从大豆中分离出4种抗原 蛋白:,大豆球蛋白（glycinin）,-伴大豆球蛋白（-conglycinin）,-伴大豆球蛋白（-conglycinin）,-伴大豆球蛋白（-conglycinin）,大豆抗原蛋白,Glycinin 由6个酸性多肽和6个碱性多肽组成的 大
3、分子蛋白（360 kDa）,Glycinin晶体结构,占大豆总球蛋白的40%（李德发，2003）,-Conglycinin是大豆中的一种主要贮藏蛋白,孙鹏等，2008,仔猪对glycinin的过敏反应,Glycinin对仔猪小肠内肥大细胞数量及组胺含量的影响,日粮中添加 2%或 4%的glycinin可显著增加仔猪空肠、回肠内组胺的释放量。,孙鹏等，2008,大豆抗原蛋白与仔猪断奶腹泻,饲喂含与不含大豆抗原蛋白的仔猪腹泻情况（Miller，1994）,大豆抗原蛋白与仔猪生长性能,大豆抗原蛋白使仔猪在断奶后第一周生长速度明显下降(P0.05),Li等（1990，1991）,Glycinin对仔猪
4、（24-28日龄）生长性能影响,孙鹏等（2008）,纯样品,-conglycinin对断奶仔猪（38日龄）生长性能的影响,pigs,大豆抗原蛋白通过诱发幼龄动物的过敏反应，影响机体消化系统和免疫功能，导致腹泻，最后抑制动物生长减少豆粕用量是减轻断奶仔猪过敏反应的有效措施正确的饲喂制度 免疫耐受的产生需要一定时间（断奶后7-10d）教槽料应持续用到断奶后10天,在使用前，对大豆抗原蛋白进行消除是提升大豆及其制品质量，避免仔猪腹泻的关键。,大豆抗原蛋白的消除,微生物发酵,外源酶水解,基因工程技术,有机溶剂萃取,多种措施结合,微生物发酵,大豆抗原蛋白,寡 肽生物活性肽,抗原活性降低,微生物发酵,微生
5、物发酵工艺：,生产工艺：,稳定的好，才是真正的好！,发酵过程控制,PH值,温度,水分,酸性蛋白酶,-半乳糖苷酶,大豆抗原,不良寡糖,降解,降解,枯草芽孢,酵母菌,乳酸菌,大豆蛋白在进入动物体内之前降解为小分子蛋白，提高蛋白质的利用率；降低大豆抗原蛋白的抗原活性；降解不良寡糖（棉籽糖、水苏糖）；产生有益代谢产物（乳酸3%）；具有发酵香味，提高适口性和采食量；,豆粕生物发酵的优势,大豆基因工程改良,据报道，三亚基的抗原活性：,-conglycinin-亚基对大鼠肠道超微结构的影响,正常组：上皮细胞微绒毛结构清晰,试验组：上皮细胞微绒毛结构模糊,郭鹏飞（2007）,结果表明，-conglycinin
6、的-亚基同样有较强的致过敏活性。,RNA Gel Blot Shows Conglycinin Cosuppression,Transgenic Soybean Seeds,Kinney等，2001,基因敲除（沉默）,但研究表明，大豆-conglycinin含量的减少，将伴随着glycinin含量的增加。而glycinin同样是一种抗原蛋白,不同加工工艺大豆蛋白比较,因 此生物发酵技术是目前降低大豆抗原蛋白的最佳方法,发酵豆粕的质量差异及大豆抗原蛋白的含量检测,SDS-PAGE（定性）抗血清测定（特异性问题）高效液相色谱分析（设备、前处理问题）以抗大豆-conglycinin单克隆抗体为介质的 免疫学检测方法,Marker,豆粕对照,发酵豆粕1,发酵豆粕2,发酵豆粕3,发酵豆粕4,发酵豆粕5,发酵豆粕6,电泳图谱,以单抗为介质的ELISA（定量）,热处理是应用较为广泛的日粮抗原消除方法，但对于热稳定性高，热加工不足以有效地灭活的抗营养因子，人们必须要不断地研究新的方法加以消除。微生物发酵是目前改善大豆及其制品营养价值和饲喂价值，减少仔猪致敏性腹泻的有效途径！,结 语,谢谢！,谯仕彦教授中国农业大学,
