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1、三、食品微生物检验室技术操作要求,（一）无菌操作要求（二）无菌室使用要求（三）消毒灭菌要求,（一）无菌操作要求：,食品微生物检验室工作人员，必须有严格的无菌观念，许多试验要求在无菌条件下进行，主要原因：,防止试验操作中人为污染样品；,保证工作人员安全，防止检出 的致病菌由于操作不当造成个人污染。,接种时必须穿工作服、戴工作帽。进行接种食品样品时，必须穿专业工作服、帽及拖鞋，它们应放在无菌室缓处间，工作前经紫外线消毒后使用。应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净。进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用9
2、5%酒精点燃烧灼3次后使用。,从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及 外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不能触及试管或平皿边。接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必须时还要烧到环和针与杆的连接处。吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。,（二）无菌室使用要求,无菌室通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有小窗，以备进入无菌间后传递物品。无菌室内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，拭擦
3、工作台面，不得存放与实验无关的物品。,无菌室使用前后应将门关紧，打开紫外线，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻拭擦，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。,处理和接种食品标本时，进入无菌室操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。在无菌室内如需要安装空调时，则应有过滤装置。,(三)消毒灭菌要求,微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。1干热和湿热高压蒸汽锅灭菌(1)灭菌前准备(2)装放干热灭菌器
4、(3)设备检查,(4)干热灭菌法(5)手提式高压锅或立式压力蒸汽灭菌器的使用步骤(6)卧式压力锅蒸汽灭菌器的使用步骤2间歇灭菌方法(1)灭菌方法(2)血清凝固器使用方法(3)煮沸消毒(4)灭菌后处理,(4)干热灭菌法,此法适应于在干热情况下，不损坏、不变质、不蒸发的物品，较常用于玻璃器皿、金属制品、陶瓷制品等的灭菌。器械、器皿应清洗后再干烤，以防附着在表面的污物碳化。灭菌时安放物品不能过挤，不要直接接触底和箱壁，物品之间留有空隙。,灭菌时将箱门关紧，接上电源，先将排气孔打开约30min，排除灭菌器中的冷空气，温度升至160调节指示灯，维持1.52h。灭菌完毕后或升温过程中，须在60以下才能打开
5、箱门。,(5)手提式高压锅或立式压力蒸汽灭菌器的使用步骤,手提式高压锅在主体内加入3L清水，立式高压锅加水16L(重复使用时应将水量补足，水变混浊需更换)。手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中(无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用)。,盖好顶盖拧紧，勿使漏气；置灭菌器于火源上加热，立式压力锅通上电源，并打开顶盖上的排气阀放出冷气(水沸腾后排气1015min)。关闭排气阀，使蒸汽压上升到规定要求，并维持规定时间(按灭菌物品性质与有关情况而定)。,达到规定时间后，对需干燥的物品，立即打开排气阀排出蒸汽，待压力恢复到零时，自然冷却至60后开盖取物，如为液体物品，不要打开排气阀，而应立即
6、将锅去除热源，待自然冷却，压力恢复至零，温度降到60以下再开盖取物，以防突然减压，液体剧烈沸腾或容器爆破。,(6)卧式压力锅蒸汽灭菌器的使用步骤,关紧锅门，打开进气阀，将蒸汽引入夹层进行预热，夹层内冷空气经阻气器自动排出。夹层达到预定温度后，打开锅室进气阀，将蒸汽引入锅室，锅室内冷空气经锅室阻气器自动排出.,待锅室达到规定的压力与温度时，调节进气阀，保持103.4kPa、1211530min灭菌。自然或人工降温至60再开门取物，不得使用快速排出蒸汽法，以防突然降压，液体剧烈沸腾或容器爆破。,使用自动程序控制式压力蒸汽灭菌器，在放好物品关紧门后，应根据物品类别按动相应开关，以便按要求程序自动进行
7、灭菌，灭菌时必须利用附设仪表记录温度与时间以备查，操作要求应严格按照厂家说明书进行。,2间歇灭菌方法,(1)灭菌方法 是利用不加压力的蒸汽灭菌，某些物质经高压蒸汽灭菌容易破坏，可用此法灭菌。(2)血清凝固器使用方法 培养基中含有血清或鸡蛋特殊成分时，因高热会破坏其营养成分，故用低温，可使用血清凝固，又可达到灭菌目的，在使用该法灭菌的血清等分装时，需严格遵守无菌操作，试管、平皿也经灭菌后使用。,(3)煮沸消毒(4)灭菌后处理 灭菌后物品，按正常情况已属无菌，从灭菌器中取出应仔细检查放置，以免再度污染。取出后的合格灭菌物品，应存放于贮藏室或防尘柜内，严禁于未灭菌物品混放。凡属合格物品，应标有灭菌日期及有效期限。每批灭菌处理完成后，记录灭菌品名、数量、温度、时间、操作者。,
