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1、猪圆环疫苗研究进展,刁小龙,PCV2 遍布全球养猪业,全球没有PCV阴性群，PCVD世界头号猪病.,病原分类地位,猪圆环病毒(Porcine Circovirus,PCV)为圆环病毒科圆环病毒属成员，是脊椎动物病毒中最小的一种。,PCV形态特征理化特性,二十面体对称，无囊膜，病毒粒子大小为 17nm。,PCV2对外界的抵抗力较强,pH3存活很长时间,对氯仿不敏感，在56或70处理一段时间不被灭活，在高温下可存活一段时间对一般的消毒剂抵抗力强,很难从感染猪场清除PCV2。,PCV理化特性,PCV2基因组概况,PCV-2 基因组为闭合环状单链DNA，全长有1767bp或 1768bp两种，PCV2
2、基因组含有11个可能的开放阅读框（ORFs），其中，ORF1、5、7和10位于病毒基因组的正链上；ORF2、3、4、6、8、9和11位于病毒基因组的互补链上。,PCV2基因组概况,ORF1编码Rep和Rep蛋白，ORF2编码Cap蛋白Cap蛋白可自我装配成病毒衣壳样颗粒Cap蛋白对PCV2检测和疫苗研究具有重要意义,Phylogenetic tree constructed by the neighbor-joining method based on the complete 702-nt sequence of the PCV2 ORF2.Fifty two strains whose e
3、ntire or partial sequences have been reported were included for comparison.The comparison with Chilean strains revealed an identity ranging from 97.5%to 98.7%and 92%to 95%at nucleotideAnd amino acid level.,商品化圆环病毒疫苗,全球圆环疫苗的使用情况,商品化圆环病毒疫苗的类型,2006年，梅里亚的圆环灭活疫苗（Circovac）首先开始推向市场，该疫苗开始是用于怀孕母猪，（2ml/头份）；现在
4、也用于仔猪（0.5ml/头份）。中国首例 灭活苗（株），是由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所刘长明研究员成功地研制出，并于2010年9月，哈尔滨维科生物技术开发公司，第一份国产疫苗问世在国内。,灭活苗,Circumvent跟Porcillis PCV，是相同疫苗的不同制剂除在韩国同时出售以外，不在相同的国家进行销售，Circumvent在北美进行销售，Porcillis PCV主要在欧洲。,亚单位疫苗,辉瑞/富道公司的PCV1-PCV2嵌合灭活疫苗（PCV1-PCV2）（Fostera PCV）（将PCV1基因组骨架中的ORF2用PCV2的ORF2替换）也于2004年推向市场，在2008年的时候
5、在加拿大的一个猪场里发现了嵌合疫苗的序列，辉瑞/富道回收了该疫苗，于2011年重新投放市场。,嵌合疫苗,疫苗免疫效果的评估,缺少一致、准确以及可重复的PMWS的模型是难以建立PCV2疫苗评价效果标准的主要难点。总体来说，疫苗效果评价主要基于以下几点：1、临床表现；2、可见的典型病变；3、PCV2的病变情况。另外一项评价标准是血清中的病毒载量，试验数据表明，血清中的病毒载量可以反映PCV2的感染情况。此外，在PCV2感染的猪上，病毒载量的降低与Nas以及IFN-SCs的出现是一致的。,这就是PCVD,广泛流行，猪群中血清阳性率高达60-100急性发病猪群中，病死率可达10%传播途径：消化道、呼吸
6、道途径，也能垂直感染,流行特点：,临床表现：猪只进行性消瘦，生长缓慢皮肤苍白呼吸困难皮下淋巴结肿大明显偶尔可见腹泻、黄疸,断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS）,症状可联合或单独出现！,PCV2+KLH/ICFA组猪生长迟缓,PCV2+KLH/ICFA组病死猪,临床症状,淋巴结肿大,PCV2+KLH/ICFA组猪肺间质增宽，出血,对照组 正常猪肺脏,剖检病变,皮炎与肾病综合征（PDNS）,主要发生于保育后期、生长肥育期和成年猪呈散发，发病率低于1，死亡率很低猪皮肤上形成圆形或形状不规则、呈红色到紫色的病变。病变中央呈黑色，常融合成大的斑块,病变通常出现在猪的后腿、腹部，可扩散到全身感染轻的可自行
7、康复，感染严重的表现出跛行，发热，体重降低皮肤继发化脓、溃烂肾脏肿胀、苍白，为斑驳状,呼吸道疾病综合征（PRDS）,PCV2是猪呼吸道疾病综合征（PRDS）的原发性病原可引起猪的肺炎表现出呼吸道症状,繁殖障碍,PCV2可致晚期流产、死胎很少发生,致病机理,Segales等发现T淋巴细胞和B淋巴细胞减少，不成熟粒细胞的密度偏低。PCV-2引起了淋巴细胞凋亡，APC递呈抗原能力的减弱，同时降低了B细胞和CD4+细胞的机能。PCV-2具有免疫抑制性，感染PCV-2的猪一般都发生免疫缺陷。,致病机理,其它病原协同感染或免疫刺激等均可能在一定程度上促进PCV-2的增殖，引起淋巴组织损伤。病猪处于免疫抑制
8、状态，导致严重的PMWS。PMWS感染猪对其他免疫原不能增进有效的免疫应答，成为本病致病机制的重要原因，使猪群中同时有多种疾病综合征发生。,二、当前猪圆环病毒病流行现状,2000年，中国首次有报道2000年今，陆续分离到PCV2病毒2002年以来，猪群PMWS增多，呈爆发性流行2009年，PCV2毒力增强,中国动物卫生与流行病学中心（青岛）检测,-李晓成研究员结果,PCV2感染状况,几乎所有的猪场都存在猪圆环病毒2型（PCV2）感染保育仔猪和生长育肥猪感染率最高，很多猪场达100%猪群带毒（血清中PCV2检测）十分普遍,猪圆环病毒病呈高感染率感染日龄早（产房哺乳仔猪）与PRRSV共感染继发副猪
9、嗜血杆菌、链球菌等感染,PCV2呈现多基因型分为两个群（Group1和Group2）不同的基因型（1A,1B,1C,2A,2B,2C,2D,2E和2F）。我国目前2B为主型，还有2D、2E。,毒力增强！,Gauger P C;Lager K M;Vincent A L;等.Veterinary microbiology,2011-Dec-15(Epub 2011 May 30)PCV2a和PCV2b分离株均可单独引起高的死亡率。PCV2b毒力更强。,Guo Longjun;Lu Yuehua;Wei Yanwu;等.Virology，2011-Oct-25(Epub 2011 Sep 03)P
10、CV2b(JF11)/2a(CL1)和 PCV2b(YJ)/2a(CL1)。两个重组突变体的复制效率显著提高，与其亲代相比。,加拿大等国出现新亚型（PCV1/2a）,PCV-1PCV-2,PCV-2aPCV-2b（毒力强）,PCV1/2a,Cai Lin;Han Xue;Ni Jianqiang;等，Virus research 卷:158 期:1-2 页:281-8 出版年:2011-Jun(Epub 2011 Mar 31)PCV2b不同株发生了自然重组。,Patterson A R;Madson D M;Opriessnig T，Journal of animal science 卷:8
11、8 期:12 页:4078-85 DOI:10.2527/jas.2009-2696 出版年:2010-Dec(Epub 2010 Jul 30)干燥喷雾血浆在实验条件下对PCV2感染的效果：干燥喷雾血浆可携带PCV2,9,164,10,77,13,3,92,68,37,11,0,20,40,60,80,100,120,140,160,180,型猪圆环病毒,PCV2+PRRSV,PCV2+PRRSV+猪流感病毒,PCV2+PRRSV+猪肺炎支原体,PCV2+猪流感病毒,PCV2+猪流感病毒+猪鼻支原体,PCV2+猪肺炎支原体,PCV2+细菌性败血症,PCV2+细菌性肺炎,PCV2+其它,Num
12、ber of Cases,PCVAD 的发生多为协同或继发感染 SDSU D-lab,病例数,猪瘟？、伪狂犬、w病？,同时感染PCV2和猪霍乱菌可能会加重猪霍乱菌在临床症状。Takada-Iwao A;Nakanishi M;Souma J;等.Veterinary microbiology,2011-Dec-29(Epub 2011 Jul 05),三、预防与控制策略,世界公认！控制猪圆环病毒疫苗是控制圆环病毒病的有效方法之一。,本次会议有大量关于商业化疫苗应用的报告包括应用于母猪的和应用于仔猪的疫苗有单针疫苗也有双针疫苗美国还有三联疫苗,商品化疫苗的防控,John Harding博士，20
13、11西班牙会议,美国，三种疫苗比对,Comparative efficacy of three commercial PCV2 vaccines in conventionally reared pigs.Lyoo KwangSoo;Joo HanSoo;Caldwell Brian;等.Veterinary journal(London,England:1997)卷:189 期:1 页:58-62 出版年:2011-Jul(Epub 2010 Aug 05)三种PCV2商品苗在传统养猪场的疗效比较：接种PCV2疫苗可减轻病毒血症，增加日增重。,法国，疫苗比对,丹麦,西班牙,澳大利亚,日本学者
14、报告，圆环病毒疫苗免疫显著降低感染猪的病毒血症、死亡率和出现临床的病猪数量，并提高日增重。,南非,猪感染PCVAD分析图,Tanja opriessnig,国外公司商品化疫苗,国内商品化圆环病毒疫苗,进口：德国勃林格-殷格翰公司，基因工程疫苗国产：全病毒灭活疫苗,上海海利 哈尔滨维科公司 洛阳普莱柯 南农高科 大北农 成都天邦,不要过分关注疫苗价格，要关注投资回报！,在中国临床使用效果,海南某大型养猪场 广东惠州某大型养猪场 广东多家规模化猪场 湖北荆州桑梓湖猪场 广西某大型养猪场 湖南某大型猪场 河南牧原 河南新大牧业,效果良好！,使用后的效果,减少临床症状降低死亡率减少淘汰猪改善增重改善均
15、匀度改善饲料转化率,改善酮体品质减少抗生素使用改善猪瘟疫苗注射后的抗体整齐度,How should you measure vaccine efficacy in the field?如何评价疫苗免疫的田间效力？,Quantify changes in pig&herd health 猪群健康状况改善Mortality rate 死亡率Treatment rates 治疗率Quantify changes in growth performance 生长成绩改善 Average daily gain平均日增重Weigh variation within a group 整齐度Pre-marke
16、t culls 淘汰率,Best Practices 推荐,JohnC.S.Harding,案例,问题之一：,仔猪已免疫圆环病毒疫苗，种猪还需要免疫吗？母猪是否需要免疫？,猪病学,有报道认为产仔母猪感染PCV2或血清中存在低滴度的PCV2病毒会增加其子代全群PMWS的死亡率（Allan等，2002b;Calsamiglia等，2004b)。尽管这些结果，但增加母源抗体及降低产仔母猪血液中的病毒滴度会降低猪群子代的PMWS的死亡率。猪病学（第9版）P318,西班牙巴塞罗那世界新猪病大会,PCV-2对繁殖猪群的影响Tanja Opriessnig Dr med vet,Phd.Iowa State
17、 university.Ames,Iowa,USA,实验1：母猪免疫圆环病毒疫苗效果 产仔情况,实验设计：精液带有圆环病毒圆环疫苗免疫组（VAC)：配种前1个月免疫圆环病毒感染组（PCV-2 Exposure）：配种前3个月感染圆环病毒,实验2：母猪免疫圆环病毒疫苗后血清学检测和病毒血症,实验设计：母猪怀孕28天免疫、56天攻毒。,病毒血症：只有第4组出现（2/3）怀孕第70天第一次检测到：攻毒后14天开始，一直持续47周。,Kurmann J;Sydler T;Brugnera E;等.Clinical and vaccine immunology，2011-Oct(Epub 2011 Au
18、g 18)母猪免疫接种可以提高亚临床感染PCV2育肥猪抗体水平和生长速度,圆环病毒对繁育猪群有重要影响。免疫圆环病毒疫苗可以减少甚至防止圆环病毒引起的繁殖障碍。要准确判断是否由圆环相关疾病引起的繁殖障碍。,问题之二：,母猪已免，仔猪免疫圆环苗是否有母源抗体干扰？,母源抗体对仔猪免疫有干扰吗？,Madson D M;Opriessnig T,Animal health research reviews/Conference of Research Workers in Animal Diseases 卷:12 期:1 页:47-65,2011-Jun在较长时间内，从公猪精液中排出少量感染性PCV
19、2,公猪用免疫吗？,Alberti K A;Estienne M J;Meng X J，Journal of animal science 卷:89 期:5 页:1581-7 DOI:10.2527/jas.2010-3388 出版年:2011-May(Epub 2010 Dec 17)公猪免疫接种PCV2疫苗对精子质量、血清抗体滴度、病毒血症和精液散播病毒均具有一定作用。,Effects of an inactivated porcine circovirus type 2(PCV2)vaccine on PCV2 virus shedding in semen from experimen
20、tally infected boars.Seo Hwi Won;Han Kiwon;Kim Duyeol;等.Clinical and vaccine immunology:CVI 卷:18 期:7 页:1091-6 出版年:2011-Jul(Epub 2011 May 25)免疫接种PCV2灭活苗显著降低了免疫猪感染PCV2b后精液中PCV2b DNA排出量。,ONeill K C;Shen H G;Lin K;等.Clinical and vaccine immunology，2011-Nov(Epub 2011 Sep 21)试验条件下，5日龄或21日龄免疫接种PCV2仔猪均可检测的体
21、液免疫应答，减轻PCV2、PPV、和PRRSV感染。攻毒后PCV2相关损伤。,最早免疫时间,Efficacy of different protocols of vaccination against porcine circovirus type 2(PCV2)in a farm affected by postweaning multisystemic wasting syndrome(PMWS).Pejsak Zygmunt;Podgorska Katarzyna;Truszczynski Marian;等.Comparative immunology,microbiology and
22、infectious diseases 卷:33 期:6 页:e1-5，2010-Dec(Epub 2009 Nov 12)三种免疫方法（免疫仔猪，免疫母猪，免疫仔猪和母猪）都被证明是有效的,PCV2与其它病原混合感染,PCV2和细小病毒联手,不仅造成繁殖障碍(R.Sharma,G.Saikumar,2009)，也使得渗出性皮炎更难治愈。（J.Kim,et.2006)猪流行性腹泻因为PCV2的垂直传播而变得易发和更加严重。(Jung和Ha 2006),病毒感染与其它疫苗免疫的关系,PCV2感染降低猪蓝耳弱毒苗的效果(Tanja Oprissnig等2006)PCV2感染降低猪瘟苗的免疫效果（司
23、兴奎、郭鑫、杨汉春2009）影响伪狂犬免疫效果,不要忘记良好的饲养管理和其它疾病的防控!,免疫预防是最佳方法，但是,实验室条件下可净化！但是,Dietary aluminosilicate supplement enhances immune activity in mice and reinforces clearance of porcine circovirus type 2 in experimentally infected pigs.Jung Bock-Gie;Toan Nguyen Tat;Cho Sun-Ju;等.Veterinary microbiology 卷:143 期:2-4 页:117-25，2010-Jul-14(Epub 2009 Dec 22)硅酸铝+PCV2疫苗能提高小鼠的免疫活性。使实验感染的PCV2清除。,谢谢！,展 望,
