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1、StepOnePIus型PCR仪操作规程1 .StepOnePIus上机可由两种方式来进行：由StepOneSoftwareQuickStart进行上机或由StepOnePIus机器面板直接触控上机。2 .由StepOneSoftwareQuickStart进行上机：开启StepOneSoftwarev2.0进入主画面后点选QuickStart窗口进行快速上机设定。进入ExperimentProperties后输入：ExperimentName及档案储存位置；选择ExperimentType选择使用荧光系统；选择RampSpeed选择实验样品种类；点选RunMethod确定PCR反应条件是否需
2、要修改后，按下STARTRUN0如欲使用StepOnePIus机器上VeriFIexBlock的功能，请由左方Setup功能列上点PlateStePUP窗口，在AssignTargetsandSamples,窗口下，勾选EnabIeVeriFIexBlock选项，此时Block即被分成六个区块。接着点选RunMethod,runprogram上点一下欲调整的温度步骤,选择“Setdifferenttemperaturesforoneormorezones,并设定每个区块的温度，请注意两相邻区块温度差异不可以超过5度，第一和第六区块最多可差异25度。按下StartRUnNoW进行data收集，反
3、应结束后，则会回到“MainMenu”画面,触控CollectResult将data存出。3 .由StepOnePIus机器面板直接触控上机：开启电源后，进入主画面，由触控式屏幕来进行StePonePlUS的设定。按下TaqManCDNA(Standard)iPCRThermalCycleProgram,可利用下面工具列再重新编辑反应条件，如果条件相同则直接按下Save0如欲使用St叩OnePIUS机型上VeriFIexBlock的功能，请点选OPtionS下的VeriFIexstep并设定每个区块温度，请注意两相邻区块温度差异不可以超过5度以上，第一和第六区块最多可差异25度。触控需要更改之
4、处则会跳出触控式键盘，重新给予实验名称、选择档案储存的Folder、并更改实际反应样品体积，按下Save&Exit；然后在BrowseLastAccessedExperiments下选择刚设定好的实验，按下StartRuno此时跳出警告标示，提醒之前的档案是否存出，如果已经将前一个档案存出的话，则可直接触控Overwrite进行Data收集;如未储存的话则触控Collect将Data存出。确定反应体积及实验名称无误后，触控StartRunNow,则会进入PCRProgram实时显示画面。反应结束后，则会回到“MainMenU”画面，触控CollectResults将data存出后，再回到Ste
5、POneSoftWare进行实验盘建立及分析。清洁与维护保养：1 .外壳要用柔软的布配合温和的清洁液清洗，不要用酒精或其他洗涤用品；加热孔可以用酒精棉球擦洗，但在清洗前应注意加热板的温度需降至室温。2 .注意保持热盖和Block的清洁，特别注意不能将带有荧光染料的试剂溅洒在热盖或者Block里，否则需用蘸有70%酒精（纯酒精稀释在蒸储水里）的干净棉球擦洗，直到不影响实验结果。注意事项：1 .为避免触电事故，仪器的输入电源线必须可靠接地。2 .操作人员不得擅自打开仪器，元件的更换或机内调节须由持证的专业人员进行。3 .在连接交流电源前，需保证电源电压与仪器要求电压一致220V（允许偏差土10%）
6、,并确保电源插座的额定负载不小于仪器要求。StepOne定量PCR仪简易设置指南启动电脑，打开定量PCR仪电源开关：双击桌面“StepOneSoftware”图标,出现LOgin登录界面，点击“0K”，打开软件。LoginTologintothesoftware,either:ClickLoginasGuesttologinanonymously,orSelectanexistinguserfromthedrop-downlistorenteranewusernameinthefield,thenclickm0KmUserName:GUESTLogin as Guest起始界面如图所示，点击红
7、色椭圆的三角图标，展开软件功能按钮。；NwEx(4rmert-3细n. Ii 9nd 8WnE 力 ElVnfE. R点击左侧SetUp”功能选项中的AdvancedSetup”高级设置向导。StepOiitieSofLwnrt*v2.iDM帛nstumr金曲3IMUBtfew&wcmert-3例仙.Ii立StndEgiMtiomrg_在打开的设置界面，左侧为导航树，选择不同的功能选项，右侧显现为不同的设置功能。默认条件下,显示为uExperimentProperties,实验属性。-NtwEjcceiinwrtQpvn.kJg*U1。“8rrtEpwmrttohjtnmm.Dw*olEj*r
8、rPflrt念Pnntap.右侧界面，带有红色*号位置需要输入或者通过鼠标进行选择。不带*号位置为选填，可以保持空白。在途中位置输入实验名称，该名称根据需要进行填写。FloE四 版UHKnb4 Ayb:一 ；3k H岬.MExpnmF Cpon. Q Cse J. j 8ndHmntR5ument. D*n2RbyLOrrttornInUlUnWrt 9 POrt Q1 P)t Ropon .ExpwinwntMonu 1 f)ofmont 20091210出IPtp FupMelh0R3fonM*llIitlTypeStandafd CurvoRoa90nt5IjqManflRcMqonIs
9、peafc4n一unt 选择仪器类型、实验类型、荧光标记方法以及反应速度。IGPOnCelSoftWjtro v2. INwEpfMfH*open St Li 9。“ 包 CItWrt T 5/EEDowKOWLrwMfimmmttunMrt.Export - 3 NEW左侧导航树，选择PlateSetup”设置选项。右侧“DefineTargets选项下“TargetName”处设置检测基因的名称,如FIuA,Reporter下拉菜单选择FAM”,Quencher下拉菜单选择“None”kiHsawrmecmcfil 20091210IyPOStiindiifd CmvoRoqont%1.q
10、ManH Rou1nnHunM.etoo1)efnI argots and SamPIeS Asagn Targ and Sampg 三 _UnMM Re*cnon点击“AddNewTarget”，并按照第7步所述进行设置。根据需要添加所需基因,如SWH1、SWFIuAI和RNPoStepOneeSoftwarev2.1以eEdtrshjTwn：Ani;IOUlihcpJWw5t*EEJ2t*nJS*Vd卜”33dE*l-;一 ：r a ，-j 一，： ，祈 m ir W r:Cm FI，mr - ;! -、 ,rf,rr ：鼠标点击AssignTargetsandSamples切换设置界面。
11、鼠标滑倒图中椭圆所处位置，变化为双向箭头，通过拖动鼠标，可以改变左右两侧窗口大小。MStcpOnceSoftwarev2.1FMt6num:AnttyveTortshp.Ntw&HrvrertJQtn.UIJCkse,iSerdEpf4MWX-ExporimontMenu rxpomcnf200920Tyi)0 SIandiICdCulVORougoiit?; .MnH Ro.hciI,Dgtlrt8 argt5 and Sampfes Kpiuimrnt rrmlftm,atHr V.omoo11Rdon SetFMtotlsList.UnMl”Totfu*undtrhImInKtMmS即U
12、Ckr- 44d V (UmeM*ZlHlcrmyh ttrgel ”如Wn，”二，smptfTotvluprw0ttfo corftol: S44odwo , i；s;n tMQvKt,*nslvct(NcsW C(rtf3O mcttorhtif90( i jrmr。M5A”Wnmple.鼠标选择样品放置的位置，如B4,鼠标勾选样品名称及所要检测的基因。根据样品孔的数量，依次进行设置。“NtwEaepenmert J n. i 6* S %EWfEfntR InauEM. OweodEwtnmrifrm *t 9 E?W k PwtRport.Urm*鼠标拖动椭圆位置，向下拖动。在“Sel
13、ectthedyetouseasthepassivereference”的下拉菜单处选择“None”L*、川-： A 1-* 一二 一1 .： m.r./., ：:. ( . I - -.1点击“RunMethod设置反应条件：在“ReactionVolumePerWel,处输入反应体积,如20ul或者25Ulo点击温度或者时间，通过输入数值可以更改温度的大小及时间的长短。在“NumberofCycles可以输入循环数。C*ftdB*trMrt tm Inttuwwrt? t , 3 PVwRtMtu-NwBprrl*UQ4ndS*CUOMjS*3EtpertVMMrtWExperimentM
14、enu I Experiment: 20091210QlHcto Svtv93RUn- AnalysisTypo:Standafd CUrYOReagents:TaqMan ReagentsIpwxI 由 HlBto Setupg2根据试剂盒的说明书，改变反应条件。在软件上,Stage指温度阶段,有HOldingStage和CyClingStage两种类型。HoldingStage只有一个SteP（温度步骤），CydingStage可以有几个SteP（温度步骤），并且多次循环该温度参数。点击“AddStage”可以选择添加Stage及类型。StepOnceSof t ware v2. 1Jtt
15、jMymtyp _ .MwxpMmrt JF 5n. 。Savt 占 父。“ 古8wvi*pcnwfttoMrmoUDtMmioMi Emrwrwft from te*ft. 9)0rd e mermai ProCJ。. Se aetauR run rrtod N (,the urw me90d at eHct a run mcd tc(n f iKruyjjf HpvfimefitPlateS1U0Rur.MctlMO2JI dlCn ,.*npZknalysisGraphicalVWnv 1 Tabuter VW)在CyclingStage可以添加Step（温度步骤）选中某个温度步骤，如黄
16、色区域所指的60位置。点击“AddStep，选择Before（之前）或者After（之后），即可添加温度步骤，根据需要更改温度或者时间。CStopOnoeSoftwarev.1gt3um“&浦Ioc%r(ExperimentMenu NtwEiHrmert?OpM“*3cwtS2f,PCrVrM“工，o*nMdExpiCmIrtfWWnSeUnun电port3PfXRvponSfYnl ，Jptri H 呈* Li ?0“ *A1 Send ewrtrmrtex*4nfDtnwVoddEMpgmcnetvrQm Ejtit & PrtERQEExpefwnentMenu (rapNcalVie
17、w T曲UarMdVo(umPtfMiBlINCWV I Ro5s*C I SW7EDafa IExponfnonl20091210TypeStandard CurvoRoagontsTaqMaf毋 ReagentsRunMetodCcHdDto/ 3nRMftMhd下“DataCollection”图标采集图标，使其处于未激活状态。jjI：，pH，IEaSrl.pft.ty1PUieSetupRvnMelhoeMotenolaIHtICoiecwn 8 OitacoieciMfiov AmocxmOn AUlCog 8R*od(Mi.fitvp点击“Save”保存实验，再点击“STARTRUN”开始运行实验。StcpOnLSoftwr柒8EWuwnmwtA2m.E.；8WnBdEe.E%mmbumEQEgod邑PWt-,tiB
