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1、唾液淀粉酶最适ph值的测定论文丁珂201140181 广西医科大学药学院2011级17班3组摘要：了解唾液淀粉酶的最适ph，把酶学知识应用于临床诊断与应用治疗。本实验目的掌握精测唾液淀粉酶最适pH值的方法，熟悉缓冲溶液的配置，722分光光度计的使用。首先配置缓冲溶液，然后获取唾液，稀释唾液，唾液稀释倍数的选取，淀粉的分解，吸光度的测量，最后记录数据，作图。结果测得pH值在6.08.0范围内并且随着pH的增大先减小后增大，pH6.8左右，吸光度值最低。分析pH6.8左右，酶的活性最大，淀粉被分解的最多，剩余底物的量最少，A值最小，过酸或过碱均会抑制酶的活性，使之分解的底物减少，A值增大。关键词：
2、淀粉酶 ph 吸光度 前言：酶无论在生活中还是在医学领域都有很大的研究意义，研究酶可以很好应用酶的各种特性，在各种领域广泛应用。影响酶反应活力的因素很多，影响胞外酶的因素主要包括PH值、温度和金属离子、抑制剂及其他小分子，以及酶浓度等因素。PH值对酶反应活力的影响： 1、 酸或碱可以使酶的空间结构破坏，引起酶的活力丧失，这种丧失活力可以是可逆的或者是不可逆的，对可逆的来说，改变PH值后可使活力恢复。2、 酸或碱影响酶的活性部位催化基团的离解状态，使得底物不能分解成产物。3、 酸或碱影响酶的活性部位结合基团的离解状态，使得底物不能和它结合。4、 酸或碱影响底物的离解状态，或使底物不能和酶结合。由
3、于上述种种原因，各种酶的作用都有一个最适合的PH值范围。实验原理：ph的改变对酶的催化影响很大，酶催化活性最高时，反应体系的PH值称为最适PH值。本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受ph影响的情况。淀粉被分解越多，剩余底物越少，A值最小，过酸或过碱会抑制酶的活性，使底物分解减少，A值增大。碘液与淀粉的不同程度水解的产物反应呈不同颜色，即：淀粉（蓝色）、紫色糊精（紫色）、红色糊精（红色）、麦芽糖及葡萄糖（黄色）。利用朗伯比尔定律，用分光光度计测量出各溶液在600nm处地吸光度A，从而间接测出唾液淀粉酶的最适PH值。A在ph值6.08.0内范围变化，并且随着ph的增大而先减少后增大，ph=6.8
4、左右，吸光值最低，所以唾液淀粉酶最适ph值约为6.8。37恒温水箱、分光光度计、吸量管（1ml 5ml）试剂药品： 2.5%淀粉溶液、碘液、0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、蒸馏水仪器材料和试剂药品：仪器材料：1. 试管、试管架、洗耳球、小烧杯、坐标纸；2. 37恒温水浴箱、分光光度计；3. 0.1ml、0.5 ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml刻度吸管、胶头滴管；试剂药品：1. 0.02淀粉溶液 ；2. 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、碘液、蒸馏水；实验步骤：（1）配置缓冲液：配置各个PH的缓冲液10ml， 选
5、择ph值从6.0到8.0，间隔0.2. 用量（10ml）试剂ph值 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0磷酸氢二钠 1.23 1.85 2.65 3.75 4.90 6.10 7.20 8.10 8.70 9.15 9.47 磷酸二氢钠 8.77 8.15 7.35 6.25 5.10 3.90 2.80 1.90 1.30 0.85 0.53（2）唾液的获取：蒸馏水漱口,然后用舌尖抵住上额或下额齿根后,微低头.轻启双唇，将下嘴唇搁在烧杯边缘，让唾液自然流入试管中.（3）唾液的稀释：取10支试管，分别编上号0009试管编号 00 01 02 0
6、3 04 05 06 07 08 09唾液(ml) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 蒸馏水(ml) 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 14.0 16 .0 18.0 20.0（4）唾液稀释倍数的选取：另取10支试管，分别编上0009号，各取上述稀释的唾液各1ml，分别加入相应编号的试管里，然后向10支试管内同时加入0.2ml的2.5的淀粉溶液，振荡混匀后放入37 恒温水浴箱中， 5分钟后取出，滴加23滴碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数。结果选取03号管的唾液浓度 （5)测量pH： 取11支试管，分别
7、标上号111，按下表操作 用量（10ml）试管编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 0.0 2.5淀粉溶液(ml) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 2ml缓冲溶液pH 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 (保温10min) 37 稀释唾液(ml) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 混匀后继续保温A 0.087 0.036 0.030 0.029 0.027 0.115 0.259 0.289 0.395 0.427 0.590以蒸馏水调零，用分光光度计测出各试管
8、中溶液的吸光度A值，做好记录。以pH值为横坐标，吸光度A为纵坐标，在坐标纸上作出平滑曲线，取曲线最低点对应的pH值，即为唾液淀粉酶的最适pH值。实验结果:A在ph值6.08.0内范围变化，并且随着ph的增大而先减少后增大，ph=6.8左右，吸光值最低，所以唾液淀粉酶最适ph值约为6.8。分析讨论：在本实验中，最佳保温时间是关键。此外，碘液的浓度也直接关系着实验结果的准确观察，若本实验中配制的碘液浓度相对而言比较高，碘液的颜色将实际反应的颜色遮蔽，导致实验结果不能准确观察，为解决该问题，可将碘液稀释后使用，从而得到清晰的颜色梯度。本实验中可能导致结果误差的原因有：1. 在确定保温时间时未将滴管一
9、起保温，导致实验误差；2. 在配制不同PH缓冲液和测定唾液淀粉酶最适PH中加入试剂时若未混匀，将对实验结果造成一定影响；3. 碘液过早的滴加会导致碘液的挥发，可能会影响实验结果。 参考文献：1 2 3 4 5查锡良,周春燕 . 生物化学 . 第7版北京：人民卫生出版社2008.1:756许冰,原媛,赵文献.pH值对酶活性影响的实验观察J.临床合理用药杂志,2010,3(10):35-35.7张杰、李淑艳 . 医学化学实验技术 . 第1版北京：北京大学医学出版社2006.12：276、235、345.8姚文兵.生物化学. 第七版北京：人民卫生出版社 2012.5:7.9吴耀生.医学生物化学与分子生物学实验指南. 北京.人民卫生出版社.2009.10杨玉萍.新乡学院学报（自然科学版）,2009,26（4）.11临床口腔杂志.唾液提取方法ab.2008.3:224
