医学标书申请格式.doc

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1、项目类别重点优秀青年所属学科：医学一般一般湖南省教育厅科学研究项目申 请 书项 目名 称：凝血检验室内质控物的研制申 请 者：赵早云所 在 学 校：湖南中医药大学电 话：0731-88458072传 真：0731-88458111电子信箱 (Email):zzy19600505申 请 日 期：2010.03.09湖南省教育厅2006年制填 报 说 明一、申请书各项内容，要实事求是，逐条认真填写。表达要明确、严谨。外来语要同时用原文和中文表达。第一次出现的缩写词，须注出全称。除签名外，项目申请书必须是打印件。二、申请书一律用A4纸，于左侧装订成册。第二页起各栏空格不够时，请自行加页。如有查新报告

2、及其它附件材料，请连同申请书一起装订成册。附件不超过20页。 三、“所属学科”按湖南高校科技网政策法规栏公布的二级学科名称填写，“项目类别”在“重点”、“优秀青年”、“一般”三类中选择。（封2，此页不装订）一、简表项目名称凝血检验室内质控物的研制研究类型基础研究（ ） 应用研究（ ） 试验发展（ ）研究年限2011.1年 至 2012.12 年申请经费（1万元）项目负责人姓名赵早云学位本科职称副高身份证号码43010419680514254x主要学习和工作经历(自大学开始)19871990年在湖南医学专科学校攻读临床检验1994，31994，9在浏阳永安医院检验科进行技术指导19901998年

3、在湖南中医药大学检验科工作，1998，11998，6月在湘雅医学院附二医院血液研究室进修血液检验及形态学19992001在湖南中医药大学学习中医学1999创立血液室，至今在湖南中医药大学血液室工作。联合申请单位其它主要研究人员姓 名职 称已获学位专业本人签名所在单位身份号码陈偶英副高硕士护理湖南中医药大学430404197207221046周欣欣初级本科检验湖南中医药大学第一附属医院430723198609215239江劲波正高本科血液内科湖南中医药大学第一附属医院430103196303241533聂甜医师研究生血液内科湖南中医药大学第一附属医院43012119830412287X李红卫中级

4、本科检验湘雅三医院430104196612272591二、立论依据 （包括项目的研究意义、国内外研究现状分析） 1凝血常规检验的临床意义 凝血酶原时间（PT）是一个基础的凝血筛选试验，常用来评价先天的和或 后天获得的外源性凝血途径（因子II，V，VII，X）。PT延长可见于下列临床情况：维生素K拮抗剂抗凝治疗;肝脏疾病（肝硬化，肝炎，黄疸）；新生儿出血性疾病；纤维蛋白溶解；内分泌失调；DIC。PT被广泛用于检测抗凝治疗，因为它的灵敏度可反映依靠维生素K的因子II，VII和X的浓度变化，所以此实验所得的结果对确定治疗药物浓度是特异的。 活化部分凝血活酶时间（APTT）是一个基础的内源性凝血途径筛

5、选试验（因子XII、XI、IX、VIII、X、V、II和I）。APTT主要用于发现先天或后天获得的这些因子缺乏，和肝素疗法的检测。APTT比其他的基础筛选试验（如复钙时间，部分凝血活酶时间）具有更高的灵敏度和更好的重复性。APTT延长可见下列情况：先天缺乏：如果凝血酶原时间（PT）正常，可能是下列因子缺乏因子VIII，因子IX ，因子XI， 因子XII。如果这些因子都是正常的，则应考虑下列物质缺乏：Fletcher因子，高分子量激肽，获得性缺乏和异常情况：肝脏疾病， 消耗性凝血病，循环中的抗凝物（抗凝血酶原酶或因子抑制物），使用肝素或口服抗凝药物。纤维蛋白原(FIB)是一种分子量为340000

6、道尔顿的糖蛋白，正常血浆中的浓度范围是2-4gL（200400mgdl），它在肝脏（1.75g天）和巨核细胞内合成，纤维蛋白原合成手b链上遗传基因密码控制，这些基因存在多态性，血浆纤维蛋白原水平存在个体差异，半衰期是35天。纤维蛋白原由6条链组成：2Aa，2Bb和2g，凝血酶（因子IIa）将纤维蛋白原分子裂解成两个纤维蛋白肽A片段（从Aa链）和两个纤维蛋白肽B片段（从Bb链），纤维蛋白单体由此产生，然后聚合，最后被因子XIIIa稳定，首先是两个纤维蛋白单体由两条g链稳定，这个稳定源于D二聚体，降解产物是特定的纤维蛋白碎片。纤维蛋白原能被纤维蛋白溶酶降解。纤维蛋白原水平增高见于糖尿病，炎症应激反

7、应，肥胖症。纤维蛋白原水平降低见于DIC，纤维蛋白溶解。不仅如此，纤维蛋白原也被用于心血管意外的致病性研究。凝血酶时间（TT）是一个快速而简易地评价纤维蛋白形成的实验，因子XIII缺乏时，TT保持正常。当PT，APTT延长，不能解释结果时，在进行其他实验之前，应先测定TT，在做其他确诊试验。TT延长指示： 异常的纤维蛋白原：严重的纤维蛋白原不足或先天性纤维蛋白原血症，获得性纤维蛋白原血症（DIC），纤维蛋白溶解，肝脏疾病）， 存在抗凝血酶 ，体内含有肝素，水蛭素药物，异常FDP（骨髓瘤，风湿性关节炎）。2凝血检验质控物在凝血检验中的作用 凝血酶原时间（PT）、部分凝血活酶时间测定(APTT)、

8、纤维蛋白原含量测定（FIB）、凝血活酶时间测定（TT）成为血栓与止血实验室检查的常规试验，对术前肝病及心内、血液、消化等系统疾病均有极为重要的作用，然而由于凝血常规的检测易受某些因素的干扰。如试剂的来源及批号、仪器性能、测定环境等均可影响检验结果。为保证试验结果的准确性，质量控制是做好每项试验的主要措施之一，其中合格的质控物是质量控制的关键之一。【1-3】3国内外目前凝血质控物的使用状况目前国外进口的凝血质控物主要为冻干血浆，其制备方法选择健康人群的数量较多，最大限度地弥补了个体误差，因而这种冻干血浆更能代表正常人群，主要组成成分有试剂1：正常值质控，冻干正常人柠檬酸盐抗凝血浆。试剂2：异常值

9、质控，冻干异常人柠檬酸盐抗凝血浆。由于目前我国尚无自己研制开发的血凝质控物，各级医院大多使用的是国外进口血凝仪，其配套的凝血酶原时间(PT)，活化部分凝血活酶时间(APTT) ，纤维蛋白原（FIB），凝血活酶时间测定（TT）试验的质控物因为依赖进口，其价格较贵，增加了实验室的成本，导致了一些实验室不能坚持每一天做室内质控，全国绝大部分省临检中心开展的室间质评工作，检测结果的可比性也不尽人意。为了提高PT，APTT、FIB， TT检测结果的准确性和实验室间结果的可比性，开发研制血凝质控物是一项非常紧迫的重要任务。4自制凝血质控物的意义目前国外进口的凝血质控物为冻干血浆，但冻干质控物的精确性受冻干

10、前后加样准确性影响，冻干后其产品水分含量变化，以及血浆中某些成分由于冻干引起混浊等因素的影响。价格昂贵，每年质控物的成本在3万左右。如能自制质控物就能极大地降低了实验室成本，减轻了病人的负担。自制正常混合血浆为多份血浆混合在一起，其制备方法与冻干血浆相似，即选择多份健康人群的混合血浆，最大限度地弥补了个体误差，因而这种混合血浆更能代表正常人群。5 自制凝血质控物是否成功主要从质控的效果性和稳定性两方面进行评估。国内学者孔立新等在2006年曾自制凝血检验室内质控物与美国的Biopool公司产品的定值质控血浆具有相似的效果，当血凝仪报告结果发生失控时能及时反映出来。稳定期半年。 法国STAGO公司

11、的全自动血凝仪STACOMPACT是目前国际上最为先进的全自动血凝仪，能很好的抗溶血，脂血，黄疸，乳糜，而受各大医院的青睐，然而其配套的室内质控物却极其昂贵。注：Stago公司2009112月的凝血质控物报价是241ml的室内质控物为2881元。一年下来就要花费 21607.5 元。如能自制质控物就能极大地降低了实验室成本，减轻了病人的负担。根据NCCLS制订的“用患者标本进行方法比对和偏差评估”指南的要求 对自配质控品的主要性能指标进行评价，内容包括批内及日间精密度，稳定性观察及与进口质控物的相关性比较。15 统计学方法采用Excel软件作质控图和SPSS 115参考文献黄文芳 刘华 钟亚玲

12、血凝质控物的研制国外医学临床生物化学与检验学分册20O4年11月第z5卷第6期Sect ClinloehemLabMedFignMedSd，November 2OO4，vbl 25，No6 485从玉隆，血栓与止血试验诊断的现状及发展J中华检验医学杂志，2000，24(1)：57稳定剂4 郑文亮患者血浆“内对照”用于凝血酶原时间的监测J，郑州大学学报：医学版，2004，39(4)：688稳定剂Westgard JO，Burnett RWPrecision requirements for cost efectiveoperation of analytical processesJClin c

13、hem，1990，36(9)：l62916325自制凝血质控物的前期工作.自制凝血质控物是否成功主要从质控的效果性和稳定性两方面进行评估。【4-6】根据NCCLS【7】制订的“用患者标本进行方法比对和偏差评估”指南的要求 对自配质控品的主要性能指标进行评价，内容包括批内及日间精密度，稳定性观察及与进口质控物的相关性比较。国内学者孔立新【8】等在2006年曾自制凝血检验室内质控物与美国的Biopool公司产品的定值质控血浆具有相似的效果，当血凝仪报告结果发生失控时能及时反映出来。稳定期半年。法国STAGO公司的全自动血凝仪STACOMPACT是目前国际上较为先进的全自动血凝仪，能很好的抗溶血，脂

14、血，黄疸，乳糜，而受各大医院的青睐，然而其配套的室内质控物却极其昂贵且封闭。参考文献：1 朱忠勇.凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间测定标准化J.中华医学检验杂志，1998，21(5)：3083122 郑文亮患者血浆“内对照”用于凝血酶原时间的监测J，郑州大学学报：医学版，2004，39(4)：6883王小林,徐融.对全自动凝血分析仪检测结果的质量控制J.微循环学杂志,2005,15（4）:6567.4 毛和香，李良琼.PT、TT、APTT自制质控血浆稳定性的探讨J.现代检验医学杂志2005，20(5)84.5 刘芳 刘华 钟亚玲血凝质控物的研制国外医学临床生物化学与检验学分册20O4，25（6

15、）：4856从玉隆，血栓与止血试验诊断的现状及发展J中华检验医学杂志，2000，24(1)：577NCCLSStatistical Quality Control for Quantytative Measurements：Principles and Definions；Apporoved GuidelineSecond EditionJNCCLS Document C24A2(ISBN 1-56238-371X)，19998 孔立新，张道杰.凝血检验室内质控血浆的制备与评估J.临床检验杂志，2006，24(2)：146147. 三、研究方案1、研究目标、研究内容和拟解决的关键问题研究目标：

16、通过对自制凝血质控物的制备，比较其与法国STAGO公司的定值凝血质控物是否有相似的效果性和稳定性，为取代昂贵的进口试剂提供实验依据。从实用出发，经过不断探索和比较分析，最终研究配制出了配方合理、成本低廉、效果好、结果稳定的液体凝血质控物。研究内容： 1自制凝血质控血浆标本的选择，所有的血浆均经过FDA认可的检测方法检测HIV抗体、HCV抗体和HBV表面抗原，且结果都为阴性。使用者相当的小心，完全依照安全防范规程进行操作。2 自制凝血质控血浆的制备3 自制凝血质控血浆的定值4 自制凝血质控血浆的分类与保存5 自制凝血质控血浆的使用方法6 自制凝血质控血浆的效果7 自制凝血质控血浆的稳定性，推荐使

17、用缓冲抗凝剂并一70保存 ，可以增加质控物的稳定性。 8 自制凝血质控血浆的安全性的建立 9 自制凝血质控物效果性与稳定性与进口试剂相比较方法的确定。10 自制凝血质控物与进口试剂的价格的比较。拟解决的关键问题：自制凝血质控物效果性和稳定性。2、拟采取的研究方法及可行性分析221稳定剂的筛选：将稳定剂分别加入新鲜血浆中，经冷冻干燥制备成血凝质控物，置于20 ，经12个月观察各血凝质控物的稳定性。2.2.2质控物制备及保存：50例正常体检静脉血与抗凝剂按9：1比例混匀，分离血浆，制备时加入小牛血浆、稳定剂叠化钠等。调整至预定的浓度含量水平，按1Y所需量，将血浆以每份05 ml的量分装塑料带盖离心

18、管内。将分装的新鲜血浆迅速置于一20冰冻保存。223 定值检测：分别取10支质控血浆，测定凝血四项，每份重复测定2次，每项共20个值，计算四项均值(x)、标准差(s)、变异系数(CV)值，确定质控范围( 2SD)。同时将法国stago凝血质控物,各取5瓶，每瓶做4次凝血四项测定，共20个数据，同上计算均值及确定质控范围。224 精密度和稳定性观察：每日从一20冰箱各取1支和日常标本同时测定PT，APTT， Fib，TT连续测定四周，每月统计，计算各项目自制新鲜混合血浆均值(x)、标准差(s)和变异系数(CV)值，作为当月质控靶值，其余置一20冰箱速冻备用。每天取一份正常速冻混合血浆迅速复溶，检

19、测两次取均值，记录之，每月统计计算出均值(x)、标准羞(s)和 CV值，并作质控图，第2个月依此类推，连续观察12个月，并将新鲜混合血浆4项检测结果与速冻混合血浆检测结果进行比较。225仪器与试剂：STA-COMPACT型全自动血凝分析仪出产与法国STAGO公司，测定所用试剂和质控物均为其配套试剂。(3)器材：一次性真空定量采血器，包括采血针和采血管(109 mmolL)枸橼酸钠抗凝剂02mL，定量采血18 mL。226操作方法 所有试剂现配现用，严格按照仪器操作规程及试剂盒的操作方法，(1)每次工作前采用以下2种正常质控物同时做PT,APTT, Fib ,TT室内质控，连续测定40 天（d）

20、，记录各组质控结果。质控物A 即STAGO公司PT、APTT ,Fib TT、正常质控物(冻干品)每次工作前取一瓶按说明书要求复溶；质控物B即自制正常混合血浆，制备方法：取健康人血浆50份混匀，男女各半，龄2060岁，当日平均做10次PT, APTT, Fib ,TT、得出正常混合血浆均值(x)，将余下部分按每管05 ml，分装在带盖塑料管中，置于一18一20冰箱冷冻室中保存。(2)每天从冰箱冷冻室取出正常混合血浆1管置于37水浴中溶化后，随当日凝血象标本检测，分别得出PT,APTT, Fib ,TT值，并计算10、20、30、40 d的均值，再分别与正常混合血浆均值作比较 每天PT、APTT

21、, Fib ,TT，连续观察12个月。227统计学方法：使用SPSS11.0软件进行统计学处理，行方差分析及回归分析。可行性分析：我院是湖南中医药大学附属第一医院，三级甲等医院，有较好的临床和科研能力。血液室自1998年成立起来，一有承担着临床，科研等凝血常规检查。一名副主任技师、一名检验师专门负责血凝仪日常操作维护，拥有目前世界上较为先进的法国Stago公司出产的STA-Compact全自动血凝仪。完全避免溶血、黄疸、浑浊、乳糜等影响。极大地减少了客观因素的干扰。3、本项目的创新之处目前自制凝血质控物取得了一定成效，有多篇论文报道，但意见不一，由于各个实验室仪器，试剂，人员等各因素的影响，自

22、制凝血质控物效果不一。法国STAGO公司出产的STA-Compact血凝仪目前是世界上较为先进的全自动血凝仪，因能较好地抗黄疸，脂血，溶血，乳糜，尽量避免了客观因素的干扰，然而其配套的凝血质控物长久以来处于封闭式状态，自制凝血质控物完全取代法国公司的配套质控物尚无报道。4. 预期研究进展（2011.12012.12）2011.12011.6，正常人血浆的制备、定值、分装 2011.72011.12，正常人血浆PT、APTT、FIB、TT的检测，制月表2012.12012.6，正常人血浆PT、APTT、FIB、TT的检测，制月表2012.72012.11，对相对资料，进行整理、统计、分析2012

23、年12月，发表论文5预期成果通过对自制凝血质控物的制备，判断其与法国STAGO公司的定值凝血质控物有相似的效果性和稳定性，为取代昂贵的进口试剂提供实验依据。从实用出发，经过不断探索和比较分析，最终研究配制出了配方合理、成本低廉、效果好、结果稳定的液体凝血质控物。发表论文，提交结题报告技术路线图凝血质控物的制备定值分装准确性测定精密度测定资料汇总，效果性观察分别四、研究基础 与本项目有关的研究工作积累和已取得的研究工作成绩及目前承担项目的情况（项目负责人和其它成员情况分开填写并且项目、成果及奖励等须注明承担或完成人姓名等相关信息）申请者自1990年参加工作，一直从事凝血，血液学检查，积累凝血项目

24、的检查达二十多万人次，熟知半自动、全自动血凝仪的日常维护，年年参加省内卫生部室间质量评比，系湖南省临床研究检验专业委员会委员，参加了省厅课题1项，排名第二。与专业相关研究如下：原发性高血压患者血栓形成标志物检测的临床意义。赵早云.原发性高血压患者血栓形成相关分子标志物检测的意义J.中国医师，2004，6（6）：243两种全自动血凝仪的抗干扰能力评价。赵早云，两种全自动血凝仪的抗干扰性能评价J。血栓与止血学2009，15（6）：276急性白血病凝血指标检测的分析。赵早云，急性白血病凝血指标检测的分析J。血栓与止血学2010第二期我院是湖南中医药大学附属医院，三级甲等医院，有较好的临床和科研能力。

25、血液室自1998年成立起来，一有承担着临床，科研等凝血常规检查。一名副主任技师、一名检验师专门负责血凝仪日常操作维护，拥有目前世界上较为先进的法国Stago公司出产的STA-Compact全自动血凝仪。完全避免溶血、黄疸、浑浊、乳糜等影响。极大地减少了客观因素的干扰。 五、经费预算支 出 科 目金 额（万元）计 算 根 据 及 理 由1. 合 计1万元研究经费0.9万元科研业务费0万元实验材料费0.9万元仪器设备费0万元实验改装费0万元劳务费0万元其他0.1万元注: 预算支出科目按下列顺序填写: 1. 科研业务费 2. 实验材料费 3. 仪器设备费 4.相关经费。开支范围详见湖南省教育厅科学研究项目管理办法（2006年第1次修订）。学校科研管理部门审查以及经费配套意见申请书所填写内容属实；该课题负责人和参加者的政治业务素质适合承担本课题的研究工作；本单位能提供完成本课题所需的时间和条件，承担本项目的管理任务和信誉保证。同意按湖南省教育厅科学研究管理办法的精神进行经费配套；同意申报。 （公章） 负责人： 2010 年 3 月 29 日合作单位意见 （公章） 负责人： 年 月 日省教育厅审定意见 负责人： 年 月 日