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1、重组人酸性成纤维细胞生长因子的生殖毒性中圄巢科夫擎JournalofChinaPharmaceuticalUniversity2005,36(5):461463重组人酸性成纤维细胞生长因子的生殖毒性姚成灿,许华,郑青,赵文,吴晓萍,黄亚东,李校垄(暨南大学药学院,广州510632)【摘要】目的:研究重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhafGF)在破损皮肤表面给药时的生殖毒性.方法:从sD大鼠怀孕第6天起对破损皮肤连续给药10d,剂量分别为36OOU/cm2,1800U/cm2,9OOU/cm2,观察rhaFGF对大鼠的生育能力,胎鼠的生长发育及骨骼发育的影响一结果:大鼠破损皮肤外用相当于有效剂量
2、60,30和15倍的rhaFGF对母体的毒性,胚胎毒性和致畸作用均无明显的影响结论:在相当于有效剂量60倍的剂量下使用rhaFGF对母体和胎儿是安全的【关键词】重组人酸性成纤维细胞生长因子;生殖毒性;皮肤用药【中图分类号】R965.3【文献标识码】A【文章编号】10005048(2005)05046103人酸性成纤维细胞生长因子(humanacidicfibroblastgrowthfactor,haFGF)是一类对中胚层和神经外胚层来源的细胞具有广泛生物学活性的细胞生长因子,该因子可促进血管生成,创伤愈合,骨胳修复,溃疡愈合,眼晶状体再生,神经组织的修复,神经突起的生长以及胚胎的发育与分化,
3、具有较大的临床应用前景_lJ.由于haFGF是人体内源性微量活性物质,难以从体液或组织中提取,而通过重组DNA技术构建重组haFGF(recombinanthaFGF,rhaFGF)基因工程菌生产,产量大且成本低,易形成规模生产能力,使之能够广泛应用于临床,具有显着的社会效益和经济效益_6J.rhaFGF经破损皮肤给药,可有少量吸收,后迅速被分解破坏,无毒性反应_7.即使在大于其有效剂量15倍的用药情况下,对破损皮肤长时间连续给药均未产生不良反应_8l.rhaFGF在外用于破损皮肤修复时是否会引起生殖毒性反应,迄今未见国内外报道.本实验应用传统致畸试验方法,研究了rhaFGF对妊娠期SD母鼠的
4、毒性(包括对母体的毒性,胚胎毒性和致畸作用).1材料和方法I.1受试药物重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF,1J.751o5U/mL,暨南大学药学院医药生物技术研究开发中心,批号:20010602),临用时用注射用生理盐水稀释,制成不同剂量的应用液.1.2实验动物SD大鼠,由广东省医学动物中心提供,合格证号为:2001A046.体重:雄性为220250g,雌性为250270g.1.3实验方法根据rhaFGF的药效学试验结果,本研究设3个剂量组,即36OOU/cm,1800U/cm,900U/cmz(分别相当于有效剂量的60,30,15倍),另设溶剂对照组(生理盐水).采用传统致畸实验方
5、法,于前一天下午5时将雌雄大鼠按1:1同笼交配,次日8时检查雌鼠有无阴道栓以确定交配与否,检出Et为孕期第0天,将已交配的雌鼠按体重随机分组,每组15只.于第0,7,9,11,13,15,16和20天称孕鼠体重.于第5天,在每只动物的背部剪毛,剪毛面积为40cm2,并用消毒过的16号注射针头在去毛的皮肤上进行划痕,划痕间距约为0.3cm,以渗出血为止,此后每5天进行一次.第615天给药,每Et各组动物均以0.06mL/cm2的剂量皮肤涂抹给药.第20天颈椎脱臼处死孕鼠,记录孕鼠体重,黄体数,着床数,活胎数,吸收胎数,死胎数,并称取活胎体重和胎盘重量,【收稿El期】20050209【通讯作者】T
6、el:02085220850Fax:02O一85224766Email.xiaokunli【基金项目】国家高技术研究发展计划(“/k.Z”汁划)资助项目(No.2002AA2Z3318,2004AA2Z3C);广州市科技计划资助项目(No.20o5J1一CO151)462中圃巢秆久擎JournalofChinaPharmaceuticalUniversity第36卷测量其身长及尾长,然后作外观,性别,内脏和骨骼等检查.共检查孕鼠6o只(15只/组),胎鼠727只.将1/3胎鼠于Bouin液固定两周后作内脏检查,其余经固定,透明和染色后,作骨骼检查.1.4数据处理实验数据用s表示,经方差分析统计
7、各组之间的差异显着性,显着性水平为P<0.05.Tab.1EffectsofrhaFGFonpregnantratsandembryos2结果与讨论2.1rhaFGF对大鼠生育能力的影响从表1可见,rhaFGF各剂量组未见母体毒性而导致其活胎率降低或死胎率增高.且各组均未检出胎鼠外观畸形和内脏畸形.各项观察指标与生理盐水对照组比较均无显着差异(P>0.05).2.2rhaFGF对胎鼠生长发育的影响从表2可见,和生理盐水对照组相比,rhaFGFTab.2EffectsofrhaFGFondevelopmentandgrowthoffeudrats各剂量组对鼠胎数,活胎体重,胎盘重,活
8、胎身长,活胎尾长均无明显影响(P>0.05).2.3rhaFGF对胎鼠骨骼发育的影响与对照组比较均无显着差异(P>0.05).从表3可见,rhaFGF各剂量组的骨骼发育水平Tab.3EffectsofrhaFGFontheskeletondevelopmentoffetalrats第5期姚成灿等:重组人酸性成纤维细胞生长因子的生殖毒性463本实验结果表明,大鼠破损皮肤外用相当于有效剂量6o,30和l5倍的aFGF与生理盐水对照组相比,对母体的毒性,胚胎毒性和致畸作用均无明显差异,rhaFGF在MTD剂量时对妊娠期SD母鼠无毒性,对大鼠胚胎无致畸作用,也无胚胎毒性.这表明在相当于有效
9、剂量60倍下使用aFGF对母体和胎儿是安全的.【参考文献】l1jMellinTN,MennieRJ,CashenDE.ela1.AcidicfibroblastgrowthfactoracceleratesdermalwoundhealingJ.GrowthFactor.1992,7(1):114.2ChengH,15aoKK,15aoSF,ela1.SpinalcordrepairwithacidicfibroblastgrowthfactorasatreatmentforapatientwithchronicparaplegiaJ.ine,2004,29(14):E284一E288.3jH
10、eeyJC.CoreoranHA,BaskinEP,ela1.Enhancedhindlimbcollateralizationinducedbyacidicfibroblastgrowthfactorisdependentuponfemoralarteryextraction【Jj.CardiotcRes,2003,59(41:9971005.4李校垫(LiXK),许华(XuH),付小兵(FuXB),等.重组人酸性成纤维细胞生长因子促进创伤愈合的研究J.中国药科大学(JChinaUniv),2002,33(4):312315.5许华(XuH),郑青(ZhengQ),姚成灿(YaoCC),等.
11、重组人酸性成纤维细胞生长因子促进大鼠烫伤愈合的研究J.暨南大学(JJi,Univ),2003,24(2):711.6李校垫(LixK),吴晓萍(WuxP),郑青(ZhengQ),等.人酸性成纤维细胞生长因子的高效表达J.华南理工大学(自然科学版)JSouthChinaUnivTechnol(NaturalScienceEdition),2001,29(12):6164.7李校垫(LiXK),许华(XuH),赵文(ZhaoW),等.重组人酸性成纤维细胞生长因子皮肤用药的药代动力学J.药学(ActaPharmS/n),2002,37(6):424427.8许华(XuH),李校堑(15XK),郑青(
12、ZhengQ),等.重组人酸性成纤维细胞生长因子皮肤用药的长期毒性研究J.中国药科大学(JcinaPharmUn/v),2003,34(1):4650.ToxicityofRecombinantHumanAcidicFibroblastGrowthFactoronReproductionSystemYAOCheng-Can,XUHua,ZHENGQing,ZHAOWen,WUXiao-Ping,HUANGYa-Dong,LIXiao-Kun(SchoolofPharmacy,Ji船nUniversity,Guangzhou510632,China)【ABSTRACT】AIM:Toinvesti
13、gatethetoxicityofrecombinanthumanacidicfibroblastgrowthfactor(rhaFGF)onreproductionsysteminrats.ME三_ODS:ThedamagedskinonratswastreatedwithrhaFGFatthedoseof3600U/cm2.1800U/cm2and900U/cm2respectively,onceadayforl0dayssuccessively.111efertileactivityofmotherratsandgrowingdevelopmentofembryoWasobserved.
14、RESULTS:Nosignificantdifferencesinthetoxicityofmotherrats,orembryoteratogenesiswerefoundbetweeneachofgroupevenwhentmatedwithrhaFGFat60-foldeffectivedoses.CONCLUSION:ThesdetyonpregnantratsandthefetusupontreatmentontopicaldamageskinwithrhaFGFofdosesupto60-foldeffectivedoseWasconfirmed.【KEYWORDS】Recombinanthumanacidicfibmblastgrowthfactor;Toxicityonreproductionsystem;TransdermalThisstudywassupportedbytheNationalHighTechnologyResearchandDevelopmentProgramofChina(863Program)(No.2002AA2Z3318,2004AA2Z3C();GuangzhouTechnologyProjt(No.2005J1一C0151)
