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1、杜泊绵羊超数排卵与胚胎移植试验王金文 张果平 李焕玲 等摘要选纯种杜泊绵羊经产母羊22只为供体，通过实施同期发情和超排处理，20只可利用供体冲出胚胎153枚，其中可用胚胎104枚，平均每只供体采得可用胚胎5.20枚。选小尾寒羊经产母羊90只为受体，经同期发情处理，对有黄体发育的母羊72只实施胚胎移植手术。结果表明，移植单胚40只受体的受胎率47.50%，移植双胚32只受体的受胎率62.50%，平均受胎率54.17%。共产羔40只，每2.60枚胚胎产1只羔羊，每只供体羊冲胚1次繁殖2只羔羊。关键词杜泊绵羊超数排卵胚胎移植杜泊绵羊（DorperSheep）原产于南非，黑头白身躯，体躯成桶形，背腰宽
2、平，后躯丰满，肌肉特别发达，具有典型的肉用体形。杜泊绵羊具有很强的适应性和抗病力，而且特别耐粗饲，对低品质牧草、秸杆等有较高的利用率。杜泊绵羊生长发育快，产肉力高，成年公羊体重100120kg，母羊90100kg。4月龄羔羊体重可达3640kg，平均日增重300g以上，胴体重1620kg。我所于2002年从国外引进杜泊羊并与小尾寒羊母羊开展杂交，杂一代公、母羊5月龄平均体重48.9kg，平均日增重306g；屠宰率50.6%，净肉率76.2%，料肉比4.25：1。杜泊绵羊被誉为“钻石级品牌”和“二十一世纪最具竞争力的肉用绵羊”。但是杜泊羊繁殖力相对较低，平均产羔率为150%左右，基本上是两年才产
3、3只羔羊。自然繁殖很难达到快速扩大种群的目的，造成杜泊羊种羊数量少，价格偏高，无法在生产中推广，影响了良种产业化进程和经济效益的提高。通过胚胎移植技术，对杜泊羊供体进行超数排卵处理，并借小尾寒羊之腹怀胎，能够提高种羊的利用率，快速扩大杜泊绵羊种羊的数量。在开展多批次试验的基础上，本课题组通过对杜泊羊进行超排处理和移植试验，取得了较好的效果。1材料1.1供体羊选23岁纯种杜泊绵羊经产母羊，繁殖机能正常。1.2受体羊选小尾寒羊经产母羊，年龄24岁，体重50kg以上，体格健壮，无传染性和生殖系统疾病，中等以上膘情。1.3试情公羊选健康无病，体重在75kg以上，性欲较好的非良种公羊为试情羊。1.4种公
4、羊选体形外貌达到该品种标准，遗传性能稳定，性欲好的健康成年公羊。1.5药品PMSG（宁波激素厂）、氯前列烯醇（上海计划生育研究所）、阴道海绵栓（新西兰）、胚胎保存液（新西兰）、O-FSH超排药（新西兰）、冲胚液（新西兰）等。1.6器械外科手术器械，手术保定架，体视显微镜、冲卵管、检卵针、移植管等。2方法2.1供体羊超排处理2004年11月2829日对供体绵进行同期发情处理，在放置阴道海棉栓的第12天开始超排，使用o-FSH总剂量10ml，采用剂量逐日递减处理4天，每天上下午肌肉注射各一次。间隔12小时，在超排处理的第4天，即埋栓的第15天取栓，同时用加双抗（80万单位青霉素+100万单位连霉素
5、）的生理盐水冲洗阴道。2.2供体羊试情、配种供体羊在取栓的第2天进行试情，发情的羊当天配种2次，第二天继续配种12次。2.3冲卵供体羊发情后67.5天采卵，采用子宫角方法。将子宫暴露于创口表面后，用套有胶管的肠钳夹在子宫角分叉处，注射器吸入预热的冲卵液2030ml（一侧用液5060ml），钝形冲卵针头从子宫角尖端插入，确认针头在管腔内，进退通畅时，将硅胶管连接于注射器上，推注冲卵液，当子宫角膨胀时，将回收卵针头从肠钳夹基部的上方迅速扎入，冲卵液经硅胶管收集于杯内，最后用两手拇指和食指将子宫角捋一遍。另一侧子宫角用同样方法冲洗。进针时避免损伤血管，推注冲卵液时用力和速度应适中。2.4检卵用玻璃棒
6、清除卵外围的粘液，杂质。将胚胎吸至第一个培养皿内，吸管先吸入少许PBS再吸入卵，在培养皿的不同位置冲洗卵35次。依次在第二个培养皿内重复冲洗，然后把全部卵移至另一个培养皿。每换一个培养皿时应换新的玻璃吸管，一个供体的卵放在同一个皿内，操作室温度保持在2025。2.5胚胎质量鉴定在2040倍体视显微镜下根据受精卵的形态、色泽、分裂球的大小、均匀度、细胞的密度、与透明带的间隙以及变性情况等，将胚胎分为A、B、C三个等级。发情后第7天回收的受精卵在正常发育时应处于致密桑椹胚至囊胚阶段。凡在16细胞以下的受精卵及变性细胞超过一半的胚胎均属等外级，凡卵子的卵黄未形成分裂球及细胞团的，均列为未受精卵。2.
7、6受体羊同期发情受体绵羊与供体羊同时埋植阴道海绵栓，并在埋栓的第15天提前12小时取栓，取栓同时肌肉注射PMSG400IU/只羊。第二天将试情公羊系上试情布放入受体羊群中，并记录取栓后2日内母羊发情情况。2.7胚胎移植采用手术法移植。将受体羊仰卧保定在手术架上，在羊的腹部开一5cm左右的切口，用食指和中指从腹腔取出子宫和卵巢，检查受体羊卵巢上黄体发育情况，黄体发育按突出卵巢的直径分为优、中、差三个等级，优0.61cm，中0.5cm，差小于0.5cm。将卵巢上黄体发育良好侧的子宫角取出体外，将12枚优质胚胎移入子宫角内，还纳子宫角于腹腔内并缝合创口。2.8供、受体羊术后处理供、受体羊术后在小圈内
8、观察12天。圈舍应保持干燥、清洁、防止感染。2.9移植地点济南市历城区畜牧局唐王羊场。3结果3.1供体羊冲胚共处理22只供体，其中20只发情，共冲出胚胎153枚，可用胚胎104枚，胚胎可利用率为67.97%，平均每只供体得可用胚胎5.20枚（表1）。表1供体羊超排与冲胚情况处理时间超排供体数(只)采胚供体数(只)采胚总数(枚)平均采胚数(枚)可用胚胎总数(枚)平均可用胚数(枚)04年12月910日22201537.651045.203.2受体羊同期发情效果及可利用率对90只受体绵羊进行同情发情处理，发情75只，可用作移植的72只，同期发情率和可利用率分别为88.2%和96.0%（表2）。表2受
9、体羊同期发情效果处理日期放栓受体数(只)取栓受体数(只)发情受体数(只)同期发情率(%)手术受体数(只)移植受体数(只)受体可利用率(%)04年11月2829日放栓90857588.2757296.0表3胚胎移植受胎率与产羔率（单位：枚、只、%）胚胎移植日期移胚数受体数单胚受体双胚受体单胚妊娠双胚妊娠分娩受体移单胚受胎率移双胚受胎率平均受胎率产羔数胚胎/羔羊羔羊/供体04年12月222310472403219203947.50a62.50b54.17402.602.00注：受胎率统计以产羔和流产的受体羊为准。同行字母不同表示差异显著（P0.05）。3.3胚胎移植受胎率将104枚可用胚胎移入72
10、只受体，其中40只受体移入单胚，32只受体移入双胚。从表3可以看出，移植单胚怀孕受体数为19只，受胎率47.50%；移植双胚怀孕受体数20只，受胎率62.50%；总怀孕受体数39只，平均受胎率54.17%。移植双胚的受胎率显著高于移植单胚受胎率（P0.05）。3.4产羔用104枚胚胎繁殖出40只羔羊，平均2.6枚胚胎产1只羔。每只供体获得羔羊2只。3.5经济效益分析（1）受体羊胚胎移植及使用成本500元/只，（2）供体超排药物及人工费500元/只。（3）杜泊羔羊13月龄平均每只消耗颗粒饲料50kg，单价1.5元，消耗苜蓿干草5kg；单价1元，折合人民币80元。（4）每只羔羊人工饲养费15元。目
11、前3月龄杜泊羊的市场价为3000元左右，每只供体繁殖2只羔羊获纯利润3510元。表4每只供体羊超排和胚胎移植效益单位：只、元品种羔羊市场价价羔羊数羔羊毛收入受体移植成本（72）供体超排成本（20）羔羊饲料费饲养费纯利润每只供体获利杜泊绵羊300040120000360001000032006007020035104讨论与小结4.1采用同期发情和超排技术，对经产杜泊绵羊母羊供体实施超排，平均每只采得可利用胚胎5.2枚，达到了国内报道肉用绵羊平均57枚的水平。4.2以经产小尾寒羊为受体实施同期发情处理，同期发情率为88.2%，受体羊利用率达到96%。与国内同类研究相吻合。4.3移植受体产羔率平均达到54.17%，其中双胚达到了62.5%，比移植单胚的产羔率高出15个百分单位。移植受胎率和产羔率高于国内同类研究结果。4.4以进口杜泊羊作供体，利用胚胎移植技术，可以提高种羊的繁殖力，在不影响其繁殖性能的情况下，1只母羊每年可多产2只纯种羊，比自然繁殖提高1倍以上。因此，将胚胎移植技术用于进口纯种羊扩繁，技术路线可行，经济效益显著。参考文献（略）
