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1、文件内容：1、目的12、范围13、职责14、内容15、附录186、变更记载和原因187、相关文件和记录19发放范围：质量部 质量控制科修订人审核人审核人批准人部门质量控制科质量控制科质量保证科质量部姓名刘凤荣郝松王爱杰黄桂福签名日期1.目的：建立微生物限度检查标准操作规程，规范检验人员的操作。2.范围：适用于检品的微生物限度检查。3.职责：质量控制科全体人员。4.内容：4.1概述:微生物限度检查法系指用于判断非规定灭菌制剂及其原料、辅料受 到微生物污染程度的一种检查方法，其检查项目包括细菌数、霉菌 数、酵母菌数及控制菌数的检查。微生物限度检查应在环境洁净度C级下的局部洁净度A级下的单向 流空气
2、区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止污染， 防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区域、 工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游 菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度验证。供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂应证明其 有效性及对微生物无毒性。除另有规定外，本规程中细菌及控制菌培养温度为3035；霉菌、 酵母菌培养温度为2328。检查结果以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告，特殊品种 可以最小包装单位报告。人员资质及培训要求 从事药品微生物试验工作的人员应具备微生物学或相近专业知识的 教育背景。试验人员应依据所
3、在岗位和职责接受相应的培训，在确 认它们可以承担某一试验前，他们不能独立从事该项微生物试验。 应保证所有人员在上岗前接受胜任工作所必须的设备操作、微生物 检验技术和试验室生物安全等方面的培训，经考核合格后方可上岗。4.2设备、仪器及用具4.2.1设备微生物限度室 结构和要求：微生物限度室应采光良好、避免潮湿、远离厕所及污 染区（面积不超过10m2，高度不超过2.4m）由缓冲间（2个）、操作 间组成。操作间与缓冲间之间应有样品传递箱，出入操作间和缓冲 间的门不应直对。温度应控制在1826，相对湿度4565%。操作间 洁净度不应低于C级，局部净化度为A级，或放置同等级 净化工作台。缓冲间 缓冲间内
4、不应放置培养箱和其他杂物。操作台或净化工作台要定期检测其洁净度，应达到A级。净化工作 台中的高效及中效过滤器应根据检测情况，必要时予以更换处理。消毒处理 微生物限度室应在每次操作前、后均用0.1%苯扎溴铵（新洁尔灭）溶液或其他消毒液擦拭操作台及可能污染的死角。开动 层流净化装置，同时用紫外灯照射30min。设备 隔水式恒温培养箱、SPX-250B生化培养箱、恒温水浴锅、匀 浆仪、电热恒温干燥箱、冰箱、 空调、LDZX-50KBS型立式压力蒸汽 灭菌器。4.2.2仪器及器皿菌落计数器、显微镜、PH系列比色计、电子天平或药物天平（感量 0.1g）。玻璃器皿 锥形瓶、研钵、培养皿、量筒、试管及塞、吸
5、管。玻璃 器皿用前应洗涤干净，无残留抗菌物质。吸管口上端距0.5cm处塞 入约2cm的适宜疏松棉花，置吸管桶内或牛皮纸袋中。锥形瓶、量 筒、试管均应加棉塞或硅胶塞，再用牛皮纸包扎。玻璃器皿均于160 干热灭菌2h或高压蒸汽121灭菌30min，烘干备用。4.2.3用具大、小橡皮胶头（放于干净带盖的容器中，并应定期用70%75% 乙醇溶液浸泡）。无菌工作服、帽、口罩、手套（洗净后配套，用牛皮纸包严）灭菌， 备用。接种环、酒精灯、75%酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、灭菌称样 纸、不锈钢药匙、试管架、打火机、记号笔、不锈钢盆。4.3试液4.3.1消毒液：75%乙醇溶液、0.1%新洁尔灭溶液、3%来苏
6、水溶液、5% 碘伏溶液或其他消毒液。4.3.2稀释剂和试液：配制所需稀释剂、试液。 pH 7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、二盐酸 二甲基对苯二胺试液、亚碲酸钠试液、无菌0.1%氯化三苯四氮唑溶 液、过氧化氢试液、靛基质试液、三氯甲烷、1mol/L盐酸试液。4.4培养基：按照培养基配制标准操作规程配制检验所需培养基。 营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培 养基（MUG）、麦康凯琼脂培养基（MacC）、胆盐乳糖培养基、曙红 亚甲蓝琼脂培养基、营养肉汤培养基、乳糖胆盐发酵培养基、四硫 磺酸钠亮绿培养基、胆盐硫乳琼脂培养基、沙门、志贺菌属琼脂培 养基、三糖
7、铁琼脂培养基、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基、卵黄 氯化钠琼脂培养基、甘露醇氯化钠琼脂培养基、PDP琼脂培养基、亚 碲酸钠（钾）肉汤（或营养肉汤）培养基、含庆大霉素的哥伦比亚 琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、1%聚山梨酯80玉米琼脂培 养基。4.5供试品抽样、保存及检验量4.5.1抽样一般采用随机抽样方法，抽样量应为检验用量（2个以上最小包装 单位）的3倍量（以备复试）。抽样时，凡发现有异常或可疑的样品，应选取有疑问的样品，但机 械损伤、明显破裂的包装不得作为样品。凡能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出长螨、发霉、 虫蛀及变质的药品，可直接判为不合格品，无需再抽样检验。4.5.2保存供
8、试品在检验之前，应保存在阴凉干燥处，勿冷藏或冷冻，以防供 试品内污染菌因保存条件不妥引起致死，损伤或繁殖。供试品在检验之前，应保持原包装状态，严禁开启。包装已开启的 样品不得作为供试品。4.5.3检验量检验量即一次试验所用的供试品量( g、ml、cm2)。除另有规定外，一般供试品检验量为10g或10 ml；膜剂为100 cm2； 贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。要求检验沙门菌的供 试品，其检验量应增加20g或20ml（其中10 g或10ml用于阳性对 照试验）。检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，大蜜丸还不得 少于4丸，膜剂还不得少于4片。一般应随机抽取不少于检验用量（两个以
9、上最小包装单位）的3倍 量供试品。4.6操作方法4.6.1试验前准备将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、匀浆杯、试管、吸管（1ml、 10ml）、量筒、稀释剂等移至微生物限度检查室内。每次试验所用 物品必须事先计划，准备足够用量，避免操作中出入操作间。编号 后将全部外包装（牛皮纸）去掉。开启微生物限度检查室紫外杀菌灯和空气过滤装置，并使其工作时 间为30min。操作人员用肥皂洗手，关闭紫外杀菌灯，进入缓冲间，换工作鞋。 再用0.1%苯扎溴铵溶液或其他消毒液洗手或用75%酒精棉球擦手， 穿戴无菌衣、帽、口罩、手套。操作前先用75%酒精棉球擦手，再用75%酒精棉球擦拭供试品瓶、 盒、袋等的开口处周
10、围，待干后用灭菌的手术镊或手术剪刀将供试 品启封。4.6.2供试液的制备液体供试品 取供试品10ml，加pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 至100ml，混匀，作为1：10的供试液。油剂可加入适量的无菌聚 山梨酯80使供试品分散均匀。水溶性液体制剂也可用混合的供试 品原液供作为试液。固体、半固体或粘稠供试品 取供试品10g，加入pH 7.0无菌氯化 钠-蛋白胨缓冲液至100ml，用匀浆仪或其他方法，混匀，作为1:10 的供试液。必要时加入适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴适当加温 使供试品分散均匀。4.6.3供试液的稀释（10倍递增稀释法）取23支灭菌试管，分别加入9ml灭菌稀释剂（此时操作一
11、般为： 左手执试管并将塞打开，倾斜，右手执10ml吸管吸量，注意：勿 在酒精灯火焰正上方操作，以免火焰将供试液中菌细胞杀灭）。加 完稀释剂后，试管塞应立即塞上。另取1支1ml灭菌吸管吸1：10均匀供试液1ml，加入装有9ml灭 菌稀释剂的试管中混匀，即为1：100供试液。以此类推，根据供 试品污染程度，可稀释至1：102、1：103、1：104等适宜稀释级（至 少共3级）。每递增1稀释级，必须另换一支吸管。在作10倍递增稀释时，吸管插入第1级稀释液内不低于液面2.5cm， 反复吸吹约10次。吸液时，应先吸至高于吸管上部刻度少许，然 后提起吸管，贴于试管内壁调整液量至刻度，再沿第2级稀释管的 内
12、壁靠近液面（勿接触液面）缓慢地吹出全部供试液（吸管内应无 粘附或残留液体），然后将吸管放入消毒液缸内。4.6.4注平皿 在进行10倍递增稀释的同时，以该稀释级吸管，吸取 各级稀释液各1ml至每个灭菌平皿中（从高稀释级至低稀释级吸液 时可用1支吸管），每一稀释级注23个平皿（此时，一般为左手 执平皿，将盖半开，右手执吸管），注平皿时，将1ml供试液慢慢 全部注入平皿中，管内无残留液体，防止反流到吸管尖端部。同时 作阴性对照（待各级稀释液注皿完毕后，用1支1ml吸管吸取释稀 剂各1ml，分别注入4个平皿中。其中2个作细菌数阴性对照；另 2个作霉菌、酵母菌数阴性对照，如另有YPD琼脂测定酵母菌数时，
13、 则再增加2个平皿作酵母菌数阴性对照）。4.6.5倾注培养基 将预先配制好的培养基熔化,冷至约45时倾注 上述各个平皿15ml20ml，以顺时针或反时针方向快速旋转平皿混 匀。注意:混匀时切勿将培养基溅到皿边及皿盖上，置操作台上待凝。4.6.6薄膜过滤法：采用薄膜过滤法，滤膜孔径应不大于0.45um，直径一般为50mm,滤 器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。操作：取出检查用集菌培养器，检查包装是否完好无损，将培养器 逐一插放在滤液槽座上，将其塑料软管装入集菌仪的蠕动泵的管槽 内，注意定位准确，软管走势顺畅。其进液软管的双芯针头插入供 试液容器的塞上，开启集菌仪，将集菌仪倒置，使药液均匀通过滤
14、 器，待药液滤净后，关闭电源，将双芯针头取下，插至装有适宜冲 洗液容器的塞上，冲洗培养基滤膜（取相当于每张滤膜含1g或1ml 供试品的供试液，加至适量的稀释剂中，混匀，过滤。若供试品每 1g或1ml所含的菌数较多时，可取适宜稀释级的供试液1ml，过滤。 用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或其他适宜的冲洗液冲洗滤膜， 每张滤膜每次冲洗量为100ml）。按照经验证的冲洗次数及冲洗量试 验（经验证无抑菌作用的供试品，薄膜过滤后，无需冲洗）。过滤， 滤干后关闭电源。取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰 红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基平板上培养。每 种培养基至少制备一张滤膜。阴性对
15、照试验 取试验用的稀释液1ml，照上述薄膜过滤法操作，作 为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。4.6.7培养 细菌计数平板倒置于3035培养箱中培养3天；霉菌、 酵母菌计数平板于2328培养箱中培养5天。4.6.8菌落计数一般将平板置菌落计数器上或从平板的背面直接以肉眼点计，以透 射光衬以暗色背景，仔细观察，勿漏计细小的琼脂层内和平皿边缘 生长的菌落。注意:细菌菌落与霉菌菌落及酵母菌菌落以及它们与 供试品颗粒、培养基沉淀物、气泡等的鉴别。必要时用放大镜或用 低倍显微镜直接观察或挑取可疑物涂片镜检。供试品稀释液常含有不溶性原料、辅料，培养基注皿后亦可能产生 沉淀物，经过培养后有时形成数量很多且难与
16、菌落肉眼相鉴别的有 形物。为了有利于菌落计数，可在操作时将适宜稀释级的供试液多 增加注皿，注皿后不经培养而放置于冰箱（勿结冻）中，在计数菌 落数时作为对照。或用营养琼脂注皿，经培养后可将细菌菌落与其 他的有形物区别开来。若平板上有2个或2个以上菌落重叠，肉眼可辨别时仍以2个或2 个以上菌落计数；若平板生长有链状菌落，菌落间无明显界线，一 条链作为一个菌落计。但若链上出现性状与链状菌落不同的可辨菌 落时，仍应分别计数，若生长蔓延的较大的片状菌落或花斑样菌落， 一般不宜作为计数用。记录各稀释级平板的菌落数，求出各稀释级2或3个平板菌落的平 均数。当菌落数在15以上的同稀释级二平板菌落数相差1倍时,
17、该 稀释级菌落数不得作为计数依据；当2个平板菌落数均在15（含 15）以下时，两个平板菌落数的差值允许范围为04，17，2 9，310，412，514，615。超出以上范围即视为操作误差， 不得作为计数依据。在下列情况下、点计菌落时间需提前或延长培养时间： 菌落生长呈蔓延趋势者，细菌点计需在24h，霉菌点计需在48h作 初步点计（点计霉菌菌落时，动作宜轻，勿反复翻转平板或造成震 动，使早期形成的孢子散落在平板的其他部位，又萌生新的霉菌菌 落，导致计数误差）。在48h点计细菌，72h点计霉菌时，菌落极小不易辨认，需延长培 养时间47天，再点计菌落数。对有异议的供试品以YPD培养基作酵母菌计数时，
18、可培养至1周再 点计菌落数。供试品按营养琼脂平板点计细菌菌落数；固体供试品按玫瑰红钠琼 脂平板点计霉菌数，一般液体供试品按玫瑰红钠琼脂平板点计霉菌 及酵母菌总数。4.6.9菌数报告规则细菌、酵母菌宜选取平均菌落数小于300cfu，霉菌宜选取平均菌落 数小于100cfu的稀释级,作为菌数报告的依据。最高的平均菌落数 乘以稀释倍数的值报告1g、1ml或10cm2 供试品中所含的菌数。每 片滤膜上的菌落数应不超过100cfu。如各稀释级的平板(滤膜上)均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板 有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以1报告菌数（每张滤膜过 滤1g或1ml供试品），或1乘以稀释倍数的值报告菌数。
19、含蜂蜜、王浆的液体制剂，用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌数， 用酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基测定酵母菌数，合并计数。4.6.10结果报告菌落数在100cfu以内时，按实有数据报告；菌落数大于100cfu时， 取两位有效数字报告，第三位按数字修约规则处理。复试 供试品细菌数、霉菌及酵母菌数其中任一项一次检验不合 格，应重新取2倍包装量供试品，依法作单项复试两份，以三次 检验结果的均值报告。4.6.11培养基稀释法测定培养基稀释法： 取低稀释级供试液（原液1：10供试液）3份，每 份各1ml，分别注入5个或5个以上平皿中（每皿中0.2ml或103102N10310N10210表3 可能的大肠菌群数注：
20、+代表检出大肠菌群；代表未检出大肠菌群。4.8.3乙型副伤寒沙门菌 取供试品10g或10ml,直接或处理后接种至适量（不少于200ml）的营养肉汤培养基中，用匀浆仪或其他适宜方法混匀，培养1824小时。取上述培养物1ml，接种于10ml四硫磺酸钠亮绿培养基中，培养18 24小时后，分别划线接种于胆盐硫乳琼脂（或沙门、志贺菌属琼脂） 培养基和麦康凯琼脂（或曙红亚甲蓝琼脂）培养基的平板上，培养 1824小时（必要时延长至4048小时）。若平板上无菌落生长或 生长的菌落不同于表6所列的特征，判供试品未检出沙门菌。若平板上生长的菌落与表4所列的菌落形态特征相符或疑似，用接 种针挑选23个菌落分别于三糖
21、铁琼脂培养基高层斜面上进行穿接 种，培养1824小时，如斜面 未见红色、底层未见黄色；或斜面黄 色、底层无黑色，判供试品未检出沙门菌。否则，应取三糖铁琼脂培 养基斜面的培养物进行适宜的鉴定试验，确认是否为沙门菌。表4 沙门菌菌落形态特征培养基 菌落形态胆盐硫乳琼脂无色至浅橙色，半透明，菌落中心带黑色或全部黑色或无黑色。沙门、志贺菌属琼脂无色至淡红色，半透明或不透明，菌落中心有时带黑褐色。曙红亚甲蓝琼脂无色至浅橙色，透明或半透明，光滑湿润的圆形菌落。麦康凯琼脂无色至浅橙色，透明或半透明，菌落中心有时为暗色。4.8.4金黄色葡萄球菌 取供试品10ml（相当于供试品1g、1 ml、10 cm2） ，
22、直接或处理 后接种至适量（不少于100ml ）的亚碲酸钠（钾）肉汤（或营养肉 汤）培养基中，培养1824小时，必要时可延长至48小时。取上述培养物，接种于卵黄氯化钠琼脂培养基或甘露醇氯化钠琼脂 培养基的平板上，培养2472小时。若平板上无菌落生长或生长的 菌落不同于表5所列的特征，判供试品未检出金黄色葡萄球菌。表5 金黄色葡萄球菌菌落形态特征 培养基菌落形态 甘露醇氯化钠琼脂金黄色，园形凸起，边缘整齐，外缘有黄色环，菌落直径0.71mm。 卵黄氯化钠琼脂金黄色，园形凸起，边缘整齐，外缘有卵磷脂分解的乳浊圈，菌落直径12mm。若平板上生长的菌落与上表所列的菌落特征相符或疑似，应挑选 23个菌落，
23、分别接种于营养琼脂培养基斜面上，培养1824小 时。取营养琼脂培养基的培养物进行革兰染色，并接种于营养肉汤 培养基中，培养1824小时，作血浆凝固酶试验.血浆凝固酶试验 取灭菌小试管3支，各加入血浆和无菌混合液 (1:1)0.5ml，再加入可疑菌株的营养肉汤培养物（或由营养琼脂培 养基斜面培养物制备的浓菌悬液）0.5ml、金黄色葡萄球菌营养肉汤 培养物（或由营养琼脂培养基斜面培养物制备的浓菌悬液）0.5ml、 营养肉汤或0.9%无菌氯化钠溶液0.5ml，即为试验管、阳性对照管 和阴性对照管。将3管同时培养，3小时候观察直至24小时。阴性 对照管的血浆应流动自如，阳性对照管血浆应凝固，若试验管血
24、浆 凝固为血浆凝固酶试验阳性，否则为阴性。如阳性对照管或阴性对 照管不符合规定时，应另制备血浆，重新试验。若上述疑似菌为非革兰阳性球菌、血浆凝固酶试验阴性，判供试品 未检出金黄色葡萄球菌。4.8.5白色念珠菌 取供试液10ml（相当于供试品1g、1ml、10cm2）直接或处理后接 种至适量（不少于100ml）的沙氏葡萄糖液体培养基中，培养48 72小时。取上述培养物划线接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上， 培养2448小时（必要时延长至72小时）。白色念珠菌在沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的菌落呈乳白色，偶见 淡黄色，表面光滑有浓酵母气味，培养时间稍久则菌落增大，颜色 变深，质地变硬或有皱褶。若平板
25、上无菌落生长或生长的菌落与上 述菌落形态特征不符，判供试品未检出白色念珠菌。如平板上生长 的菌落与上述菌落形态特征相符或疑似，应挑选23个菌落分别接 种至念珠菌显色培养基平板上，培养2448小时（必要时延长至 72小时）。若平板上无绿色或翠绿色的菌落生长，判供试品未检出 白色念珠菌。若平板上生长的菌落为绿色或翠绿色，挑取相符或疑似的菌落接种 于1%聚山梨酯80玉米琼脂培养基上，培养2448小时。取培养物 进行染色，镜检及芽管试验。芽管试验 挑取1%聚山梨酯80玉米琼脂培养基上的培养物，接种 于加有一滴血清的载玻片上，盖上盖玻片，置湿润的平皿内，于35 37培养13小时，置显微镜下观察孢子上有否
26、长出短小芽管。若上述疑似菌为非革兰阳性菌，显微镜下未见厚膜孢子、假菌丝和 芽管，判供试品未检出白色念珠菌。 4.9结果判断：4.9.1供试品检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出结果为准，不 再抽样复试，即判供试品不合格。4.9.2供试品的细菌数、霉菌数和酵母菌数其中任何一项不符合该品 种项下规定，应从同一批号样品中随机抽样，独立复试两次，以3 次结果的平均值报告。4.9.3若供试品的细菌数、霉菌数和酵母菌数、控制菌三项检验均符 合该品种项下规定，判供试品符合规定；其中任何一项不符合该品 种项下规定，判供试品不符合规定。4.10微生物限度标准4.10.1.口服给药制剂不含药材原粉的制剂 细菌数
27、每1g不得过800cfu。每1ml不得过80cfu。 霉菌和酵母菌数 每1g或1ml不得过80cfu。 大肠埃希菌 每1g或1ml不得检出。含药材原粉的制剂 细菌数 每1g不得过8000 cfu（丸剂每1g不得过25000cfu）。 霉菌和酵母菌数 每1g或1ml不得过80cfu。 大肠埃希菌 每1g或1ml不得检出。 大肠菌群 每1g应小于100个；每1ml应小于10个。含动物组织（包括脏器提取物）及动物类原药粉（蜂蜜、王浆、动 物角、阿胶除外）的口服给药制剂 每10g或10ml还不得检出沙 门菌。含豆豉、神曲等发酵原粉的制剂 细菌数 每1g不得过100 000cfu；每1ml不得过1000
28、cfu。霉菌和酵母菌数 每1g不得过500cfu；每1ml不得过100cfu。大肠埃希菌 每1g或1ml不得检出。大肠菌群 每1g应小于100个；每1ml应小于10个。口服液 细菌数：每1ml不得过80 cfu。 霉菌、酵母菌：每1ml不得过80cfu。 大肠埃希菌：每1ml不得检出。 沙门菌：每10ml不得检出；活螨：不得检出。不得有霉变.5.附录 附录1、微生物限度检查原始记录附录2、微生物限度检查原始台帐6.变更记载和原因：修订号执行日期变更原因、依据及详细变更内容002004.03.01新文件。012005.10.01因执行中国药典2005年版一部。022008.06.01对文件内容进
29、行细化。032010.10.01因执行中国药典2010年版一部。042013.10.01 定期修订及公司名称变更。7.相关文件和记录：文件名称文件编号隔水式恒温培养箱的标准操作规程ZSD-QA-386SPX-250B生化培养箱标准操作规程ZSD-QA-406LDZX-50KBS型立式压力蒸汽灭菌器标准操作规程ZSD-QA-384电热恒温干燥箱的标准操作规程ZSD-QA-387冰箱标准操作规程ZSD-QA-407恒温水浴锅标准操作规程ZSD-QA-429电动匀浆器标准操作规程ZSD-QA-410培养基配制操作规程ZSD-QA-362附录1 微生物限度检查原始记录 编号：ZSD-QA-354-R-
30、01 品 名 检验证号批 号规 格类 别取样日期 年 月 日检品来源报告日期 年 月 日检验依据 内控标准微生物限度检查标准操作规程ZSD-QA-354仪器： 电热恒温干燥箱 型号： 编号：电子天平 型号： 编号：全自动立式压力蒸汽灭菌器 型号： 编号： 环境条件： 室温： 湿度： %。稀释剂：PH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液。供试液的制备：称取供试品10g置研钵中研磨成细粉，加稀释剂至100ml，研匀制成1：10浓度的供试品溶液。检查法：取均匀供试液，进一步稀释成110-2、110-3、110-4的稀释级，分别取连续三级10倍稀释的供试液各1ml，置直径约90mm的平皿中，再注入温度不超过4
31、5的培养基1520ml，混匀，待凝固后，倒置培养。每个稀释级两个平皿。同时取4个无菌平皿分别作细菌和霉菌阴性对照（各2个）。 附录1 微生物限度检查原始记录品名： 批号： 编号：ZSD-QA-354-R-01细 菌：仪器： 生化培养箱 型号： 编号： 生化培养箱 型号： 编号： 培养基：细菌培养基：营养琼脂培养基 配制批号：放入时间： 取出时间:稀释级10-110-210-310-4阴性对照观察温度、时间24h平皿1248h平皿1272h平皿1272h平均数总 数结 果cfu/g结论：检验者/日期： 复核者/日期： 附录1 微生物限度检查原始记录 品名： 批号： 编号：ZSD-QA-354-R
32、-01 霉菌、酵母菌： 仪器：隔水式电热恒温培养箱 型号： 编号： 隔水式电热恒温培养箱 型号： 编号： 霉菌、酵母菌培养基：玫瑰红钠琼脂培养基 配制批号： 放入时间： 取出时间：稀释级10-110-210-310-4阴性对照观察温度、时间24h平皿1248h平皿1272h平皿1296h平皿12120h平皿12120h平均数总 数结 果cfu/g 结论： 检验者/日期： 复核者/日期：附录1 微生物限度检查原始记录 品名： 批号： 编号：ZSD-QA-354-R-01大肠埃希菌：仪器：三用紫外分析仪 型号： 编号 生化培养箱 型号： 编号：大肠埃希菌培养基：胆盐乳糖增菌培养基（BL) 配制批号： 署红亚甲蓝琼脂培养基（EMB) 配制批号： 4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸(MUG)培养基 配制批号： 试液： 靛基质 配制批号：大肠埃希菌对照菌：大肠埃希菌CMCC（B）44 102：编号 第 代 。检验项目供试品阴性对照阳性对照BL增菌MUG366nm靛基质EMB平板G氏染色乳糖发酵培养基IMV
