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1、用固相红细胞吸附法检测血小板抗体及交叉配合试验的探讨,红佣胞,血,l横疣体墨学捡验杂志筹7卷第2期992年B月In王1勺用相红细胞吸附法检测m小板抗体及交叉配合试验的探讨韩5-风张洪涛郝军刘英薛玉祥王凯南(解放军304医院血库)一,1文献报道,血小板表面有三种同的执原结构,即红细胞抗原系统ABH,白细胞抗原系统HLA及血小板所特有的几个抗原系统PIA,rlE,KO,DUZ0,Bak等.长期输血或输小板的病人,常因这些复杂抗娘l起的同种免疫而导致输入的血小板快速破坏或其它严重的输血反应.确效地检出lt/b板抗体,为患者选择输注配合的血小板,对提高输血小板疗效,避免输血反成至关重要.为此,我们选用
2、一种简单,速敏感的血小板抗体检测及交叉配台技术固相红细胞吸附法(Solidphasercdbl0Odcellauhereiice,SPRCA)并对某些技木环节进行了改良,现报道如下.1材料与方法1.1材料1.1.1仪器:囤产LD252型离心机0G孔U型塑料反应板.1.1.2试剂:兔抗人IgGEDrrAl1l醛,El制抗血小板抗体,低离子强度杵液(LISS),指示J:细胞筹.1.1.3血液标本t本院及解放军301等6家医院临床输血病人,绝大多数为m液病患开,输血次数不少于l0次1.2方法1.2.196孔塑料反应板的处j按Catt等方法进行血小板固相化.首先将血小板抗体用蒸溜水稀释到大约20ug/
3、ml,向塑料反应板孔内加入该稀释液100ul,4lc冰箱保存,使用前用生强盐水洗34次.1.2.2血小板层制备;随机抽取L270型人全血与3的EDTA抗凝剂7:1混台,L22000rlmin速度离心10min,获富含血小板血浆(PRP),将PRP分剐加入上述已处弹过的反应板孔内,每孔23滴,离心反应板900r/minSmin,使形成捌血小板1毕层.1.2.3血小板抗体测定;用生坪盐水轻沈反应板6次,加入4%甲醛2谪,温赦10min,去甲醛液,再用生理盐水洗6扶,加入经玲抗体吸收处理后的被检血清L滴,LISS3滴,混匀后置37孵化30minfij生群盐水洗板5次,加Z.0.4%的抗人IgG致敏指
4、示红细胞1滴,将板2200r/min离blIllin后判读结果.1.2.4交叉配台试验;方法同上,把与受者ABO相台的供者血小板固定于反应板孔内,与受者血清反应,选出反应阴性供背,单采血小板输注1.2.5试验系统的质控与结果判谈:本试验分别用不含抗体的AB血清和已知含隋抗血小板抗体血清作阴性和阳性对照反应结果,指示细胞均匀复盖在固定的血小板单层上为阳性,指示细胞聚集孔底巾央形成细胞扣为阴性.2结果与分析2.192名长期输血或输血小板患者,用此法分别作血小板抗体检查和交叉配合试验,结果如衷1.致作者:本刊创刊以来,受到越来越多的作者的热睹支持.使我们一直感到难以回报的魁现实条件所限,致使每年有午
5、H当一挝质量较好的文章得不到交流.为此,本刊拟从1993年起缩小字号,jIj扩大刊物容景,剐也需要请作者和我们紧密俞作,稿件力求精悍,篇幅不宜过长.表1SPRCA法血小扳抗体和交叉配台试验结果抗体筛选病例敫交叉相容次数交叉不相容次敬合计l03眦性58273(97.8)6(2.2Yo)279阳性921(3.71)544(96.29)565患者血清与12份()型血小板中部分发生阳性反应患者血清与】2份O璎血小板12份都n现阿1性反应.结果妊示,用此浊共测得机体阳性34例,其中25倒只列12份O型j6【小板部分发生阳性反应,9侧则全有反应,他们与供者的相容性分别为37.2%,3.71.这结果夜1月,
6、前者有同种免疫,但辽不Jh泛j后者已有泛的同种免疫,要为这样的患者选择配的衄小板输血十分匪l难.抗体阴性的58例,与绝大多数供者(97.8%)是槲容的.少数(2.2)不配合者可能与抗体作用可供者血小板上的低频抗原有关,而遮种低频抗原在用抗体筛选的12份0型血,板上不存在.2.2输SPRCA法配型血小板疗效评价.为37倒经术法或其它医院用别的方法证实有血小板抗体的病人做血小板交叉配合试验,分别输入配台与不配合血小板进行对比观察,疗效以输后20/b时的修正血小板计数增值(CCI)表示,结果见袭2:表2交叉相台与不相台血小板输后20小时CcI的比较组别交叉枷台交叉不相合次数58l7CCI/I(.7-
7、)325501l475.027647.0594372.323,<0.001结果显示;右.58次供受者相台的血小板输注中,只确1谈CCI<lO000/ul,2次20000>CCI>1O000/ul,其它均CC1>0000/ul.而17次不相会血小板输血中CCI都<:1O000ul其中有9次输前与输后血小板计数无变化或低于输前水平.前者平均CCI为325501I475.0271ul,与后者647.0594372.323相比较有极强着差异.5讨论sPRCA的试验原殚,魁借助塑科袭丽吸附扰体的作ff,将抗帆小板抗体吸附于U型塑料反应板孔碴上,利用孔壁上的抗体吸附供者
8、m小板,使形戒血小板单层,随后与受嚣的1iIL清反再用指示细胞显示出免疫复合物的存在.由亍预先,tK-K板进行了结台血小板的处理,使用于固相化的血小板:棚成PRP后无需作进一步的离心,洗涤,电无需计算血小板含量,从而简化了操作程序,节省了时间,LIsS的使用,不仅提高了试验的敏感性,同时也缩短了抗原抗体反应时间,整个试验只需要1个多小时便能完成本文测得长期输血或输血小板患者总的同种免疫发生率为37(34/92),与scbiffer报道的(3O35)结果基本一致,却JI显低于同一方法报道的59.8(52/87)结果,就其原因可能与我们进行的两点改良有关,其一,介于Llss对冷抗体敏感,2g109
9、68471ln性阳u104我们对所有被检标本在试验前进行冷抗体吸收处理,避免了因冷抗体造成的假阳性.其二,在血小板单层形成后,给孔内加甲醛,在起到固定血小板的同时,还能减少血小板非特异结合免疫球蛋白的作用,从而减少假阳性产生.血小板抗体存在是影响血小板输血效果的最大因素,HOgge等报道一,约90%有血小板抗体的患者,输随机供者血小板增值率差.本文报道的SPRCA法能为此类患者提供有效的血小板输注.在经本法测试提供的58提供受者相合血小板输血,20小时ccl为3255011475/Ul明显高于17次不相台的血小板输血(6474372),其差异极显着(P<0.001).这一结果表明本法对供
10、者的选择有较大实用价值.要使试验达到预期效果,-有几点值得注意.(1)指示细胞黼备是试验成功的关键,应严格注意抗人IgG致敏强度和指示细胞使医学捡验杂志第7卷第2期1992年6月用浓度.就我们的经验,用10uB/mI浓度的抗体包被指示细胞其敏感性较好.(2)严格L1SS的质控,如果离子强度不恰当或长菌均l可造成反应失误.(3)被检标本不得长菌.参考文献lKleinCA.BlajehmanMA?Semi1lThiOnabHelnost,1982,8l105.2RacheIJMeta1.AMJClinPatn,1988.9O(1)l63.3SchifrerCAetal?NEnglJMd,1982,
11、207l245.4DavlesP.MedLabSei,1982,39(1):39.5ShibataYeta1.VoxSong,1981,4125.6HoggeDEeta1.AMjHematol,1983,14l363.自制PC一6O3自动血细胞计数器微孔管的性能评价贺衍苊胡子平悼金瑞t李毅(空军天津医院桅验科器械科)PC-一603自动血细胞计数器系日本ERMA株式会社原件,北京生化仪器厂组装.该仪器的傲孔管为玻璃制品,容易损坏.购买进口微孔管,价格昂贵.我们自制微孔管代替进口微孔管,应用于PC-一603自动血细胞计数器.根据1984年国际血液学标准化委员会公布的关于自动血细胞计数仪评价的文件要
12、求,对自制微孔管的技术性能进行测试,获得满意结果.现介绍如下:1材料1.1PC一603自动血细胞计数器北京生化仪器厂1.2BS941溶血剂北京生化仪器厂1.3自制微孔管宝石孔径i00微米1.4标本住院患者耳垂血液2评价指标及结果2.1精密度每份标本连续$12o次作为批内精密度.自细胞总数不同值的标本测4份.值22.2110/L,CV1.35Il5.951oVL,C1.63,9.7710/L,CV1.94%|2.7410./L,CV2.45%.红细胞总数不同值的标本测3份,cv分别是:高值为1.13%,中值为0.80%,低值为.o9%,符合要求.与该仪器原装微孔管的批内精密度相比,自制微孔管所测红,白细胞内批内精密度均较好.2.2携带污染率为了解不同高植与低值标本之间的污染率,分别测4份白细胞,2份红细胞,其污染率均<2%,符台要求.2.3总重复性随机取标本10份,每份标
