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1、实验一 红细胞计数一、实验目的：掌握红细胞计数原理及技术。二、实验原理：用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经过换算示得每升血液内的红细胞数。三、实验器材及试剂：显微镜、血红蛋白吸管、计数板、盖玻片、生理盐水。四、实验操作：1、取试管1支，加稀释液3.98ml或1.99ml。2、用清洁干燥的微量吸管准确吸取末梢血10微升。3、擦去管尖外部余血、轻轻注入红细胞稀释液底部，再吸取上层稀释液清洗吸管2-3次，立即摇匀。4、将计数池与盖玻片用软布料擦净，将盖玻片覆盖于计数池上。5、用吸管吸取混匀的红细胞悬液，充入计数池中。6、静止2-3分钟，待经红细胞下沉
2、后，用高倍镜或低倍镜计数中央大方格内四角和正中五个中方格内的红细胞数。五、计算N(五个中方格内RBC数)510106200=N1012个/升5：表示5个中方格内RBC数换算为1个大方格内RBC数 10：1个大方格容积、0.1ul、换算为1ul内RBC数 106：1ul换算为1升内红细胞数 200：稀释倍数六、正常参考值正常参考值： 成年男性：4.00-5.501012/升成年女性：3.50-5.001012/升新生儿： 6.00-7.001012/升实验二 血红蛋白测定一、实验目的：掌握氰化高铁血红蛋白比色法原理及技术。二、实验原理：血液在血红蛋白转化液中溶血后，除SHb外各种血红蛋白可被高铁
3、氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与CN结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋（HicN）。HicN最大吸收峰540nm，最小吸收波谷504nm，在特定的条件下，毫摩尔消光系数为44L.mmol-1 .cm-1 ，因此根据标本的吸光度，即求得血红蛋白浓度。三、实验操作：1、取指血20ul，加到5ml血红蛋白转化液中，混匀，静止5分钟。2、用分光光度计比色，波长540nm，以蒸馏水或空白转化液调零，测定吸光度。3、用血红蛋白浓度为50g/L、100g/L、150g/L、200g/L在721型分光光度计上测定吸光度分别为0.13，0.27，0.405，0.54.四、计算:血红蛋白（g/L）=测定管吸光度36
4、7.7正常参考值： 成年男性：120-160g/L成年女性：110-150g/L新生儿： 170-220g/L实验三 白细胞计数一、实验目的：掌握白细胞计数显微镜计数法原理及技术。二、实验原理：用稀醋酸液将血液稀释并破坏红细胞，混匀后充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经过换算求得每升血液内的白细胞数。三、实验器材及试剂：显微镜、微量吸管、计数板、盖玻片、白细胞稀释液。四、实验操作：1、取试管1支，加白细胞稀释液0.38ml。2、用清洁干燥的微量吸管准确吸取末梢血20微升或抗凝血20微升。3、擦去管尖外部余血、轻轻注入稀释液底部，再吸取上清液清洗3次，摇匀。4、将计数板与盖玻片用
5、软布擦净，将盖玻片覆盖于计数池上，再用微量吸管吸取悬液，充入计数池与盖玻片间的细缝隙中，静止2-3分钟，待白细胞下沉。5、用低倍镜计数四角的四个大方格内的白细胞数。五、计算(四个大方格内WBC数/4)1020 106 = WBC数/升六、正常参考值正常参考值： 成 人：（4-10）109/升新生儿：（15-20）109/升6月-2岁：（11-12）109/升实验室四 白细胞分类计数一、实验目的：掌握白细胞分类计数、原理及技术。二、实验原理：把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，经wright染色后，显微镜下观察，根据白细胞形态特点逐个分类计数。得出各种白细胞的相对比值，并注意观察其形态和质量的变化
6、。三、实验器材及试剂：显微镜、染色缸和架，载玻片、瑞氏染液、香柏油、二甲苯。四、实验操作：1、取末梢血1滴。置于载玻片的一端，以边缘平滑的推片制成血涂片，空气干燥。2、用蜡笔在血膜两端划线，以防染液溢出，然后将血片放于染色架上。3、先加瑞氏染液数滴，使其覆盖整个血膜，固定染色细胞0.5-1分钟。4、按1：1或1：2加缓冲液与染料混匀，染色10分钟左右。5、在血膜染10分钟后，用缓冲液或接近中性的水冲去洗液，待自然干燥或滤纸吸干后，用镜油观察。五、计数方法：1、先用低倍镜观察血片染色情况，白细胞多少和细胞分布情况。2、选择血涂片的体尾交界处，染色良好的区域，在油镜下计数100-200个白细胞，按
7、其形态特征进行分类计数，求出各自白细胞所占数值（百分率）。3、白细胞分类计数方法很多，常用的有，完全记录法、半记录法、分类计数器计数法。4、每个病人应分类白细胞数，视白细胞总数多少而定。5、各类细胞所占的百分率乘以白细胞总数/升，既得每升血液中各类白细胞的浓度。实验五 血小板计数一、实验目的：掌握血小板计数原理及技术。二、实验原理：尿素液能溶解红细胞及白细胞而保存完整形态的血小板，经稀释后在血细胞计数池内直接计数以求得每升容积血液内的血小板数。三、实验操作：1、取试管1支，加血小板稀释液0.38ml。2、先让手指温暖充血，皮肤消毒待干后深刺使血液流出擦去刚出现的少量血。3、用微量吸管迅速准确地
8、吸取自然流出的第一滴血液20微升，取血时避免产生气泡或多次上下吹吸，取好后立即将血轻轻注入已盛稀释液的试管底部，吸上清液漱洗吸管三次，轻轻混匀。4、擦净并放好计数板和盖玻片，将试管轻轻震荡1分钟，用吸管吸悬液一滴，注入计数池，避免产生气泡或溢出，放置10-15分钟，待血小板下沉。5、先用低倍镜找到中央大方格，换高倍镜计数中央大方格内的血小板数，各中格内的血小板差异不得超过10个，如每中格内血小板数小于1个时，应将全大格数完或另滴计数板，再数一大格作对照。四、计算五个中方格内所得的血小板数 109 /L五、参考值正常参考值： 100300109/L实验六 尿沉渣定性检查一、实验操作：1、取新鲜尿
9、液10ml于试管内1500r/min5分钟。2、待离心机停后，取出离心管，弃去上清液。留下 0.2ml，轻轻离心使尿沉渣有形成分混匀。3、取沉淀于玻片上镜检。二、结果判断：用1010倍，观察其中有形成分管型，1040倍观察细胞成分和计数，观察10个视野管型计数20个视野。参考值：1、细胞成分：最低-最高值/HPRBL 0-3/HP WBL 0-5个/HP2、管型（透明）：平均值/LP3、尿结晶和盐类数量以每一高倍镜视野（）（ 2 ）（ 3 ）报告三、注意事项：1、清晨空腹第一次尿应在1h内送检2、准备干净，干燥尿杯，留取中段尿，尿液细胞及管型的计数。Addis 1h尿沉渣计数。四、标本收集：患
10、者先排尿弃去准确收集3h尿液于清洁干燥器内（标本留取5：30-8：30）五、实验操作：准备侧量3h尿量，充分混匀取尿液10ml，1500r/min 5分钟，用吸管吸取上层尿液9ml留取1ml，吸取混匀尿液1滴注入计数盘中，cal计数10大方格，管型20个大方格。六、计算：1小时细胞=10个大方格细胞总数（1000/10）（3h尿量/3）1小时Cost计数=(20个大方格管型数/2) (1000/10)（3h尿量/3）式中1000为微升换算成毫升数，10为尿液浓缩倍数七、实验注意事项：1、尿液新鲜PH值应在6以下。2、被检尿SG在1.026以下如1.016的为低渗尿易破坏cell。3、尿中有磷酸
11、盐时应加少量冰乙酸，但勿加过多，使cell管型溶解。实验八 尿蛋白检查一、实验原理：加热可使蛋白质变性凝固，加酸可使蛋白质接近等电点，促使蛋白质沉淀。此外，加酸还可以溶解碱性盐类沉淀。二、实验试剂：冰乙酸溶液三、实验方法：1、取约10ml新鲜清晰尿于一耐热大试管内。2、将试管斜置在火焰上煮沸上部尿液。3、滴加乙酸3-4滴，再煮，沸后立即观察结果，如果浑浊或沉淀，提示尿内含pr。实验结果判断：阴性（）：不浑浊微量（）： 轻微浑浊0.1-0.15g/L弱阳性（）： 明显白雾状0.2-0.5g/L阳性（ ）： 明显浑浊有明显颗粒0.6-2.0g/L强阳性（ ）： 大量絮片状沉淀浑浊2.0-5.0g/
12、L最强阳性（ ）：出现凝块并有大量絮片状沉淀5.0g/L实验九 尿葡萄糖定性检查（班氏法）一、实验目的：掌握尿葡萄糖定性的班氏法。二、实验原理：葡萄糖或其他还原性糖的醛基在热碱性溶液中，能将班氏试剂的蓝色硫酸铜还原为黄色的氢氧化铜，进而形成红色氧化亚铜沉淀。三、实验器材：试管架、中试管、滴管、试管夹、酒精灯四、实验试剂：班氏试剂五、实验操作：1、鉴定班氏试剂质量：取试管一支，加入班氏试剂2.0ml，摇动试管徐徐加热至沸腾，观察试剂有无颜色及性状变化，若试剂仍为透明蓝色，可进行以下实验。2、加尿液：向班氏试剂中加离心后的尿液0.2ml（约4滴），混匀。3、加热沸腾：继续煮沸1-2min，或置沸水浴5min，自然冷却。4、判断结果：见下表Benidict糖定性实验结果判定反应现象 报告方式 葡萄糖含量（mmol/L）蓝色不变 5.6蓝色中略带绿色，但无沉淀 5.6-11.2绿色，伴少许黄绿色沉淀 28较多黄绿色沉淀，以黄为主 28-56土黄色浑浊，有大量沉淀 57-112大量棕红色或砖红色沉淀 112
