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1、病原生物与免疫学实验,实验室规则,一.进入实验室必须穿护士服,不必需的物品不要 携带入室，严禁在实验室进食、饮水。二.保持实验室的安静和秩序,实验要严肃认真。三.如有传染性材料的污染,及时报告老师。四.实验过程中有仪器和器材的损坏要报告老师 并登记。五.实验后的材料要放到指定的位置。六.离开实验室前,要用肥皂洗手,接触过传染性强 的实验材料要用0.1%的新洁尔灭泡手1-2分钟七.值日生要作好值日工作,关好水,电,门窗,作好 实验记录本的登记方可离开实验室。,抗原抗体反应,Ab-Ag reactions,实验目的,掌握血型鉴定实验、免疫胶体金技术实验的操作及结果的正确观察、判断；熟悉血型鉴定实验
2、、免疫胶体金技术实验的原理；了解血型鉴定实验、免疫胶体金技术实验的用途。,抗原抗体反应的基础 basis of Ab-Ag reaction,抗原抗体反应的特点characters of Ab-Ag reaction,特异性 Specificity,抗原抗体反应的特点 characters of Ab-Ag reactions,可逆性 reversibility,凝集反应Agglutination reactions,在一定浓度的电解质环境中，颗粒性抗原（红细胞、细菌、乳胶颗粒等）和相应抗体反应能够产生肉眼可见的凝集块。直接凝集(direct agglutination)间接凝集（indire
3、ct agglutination）间接凝集抑制试验(inhibition of indirect agglutination),直接凝集 direct agglutination,-ABO血型的鉴定 identification of ABO blood type,概述 overview,血型系统 Blood group system,1901年发现的人类第一个血型系统-ABO血型系统发现者-奥地利细菌学家 Karl Landsteiner,ABO血型系统的发现Discovery of ABO blood type,【实验原理】Experiments mechanism,血型是指红细胞的血型，
4、是根据红细胞膜外表面存在的特异性抗原（镶嵌于红细胞膜上的糖蛋白和糖脂）来确定的，这种抗原或凝集原是由遗传决定的,Y,+,【实验器材】Experiments equipments,1：载玻片、采血针、牙签,2：抗A和抗B单克隆抗体、碘伏、棉签。,【操作步骤】Experiments Methods,1.在洁净的玻片两端用记号笔分别标上A、B，然后在A端滴一滴抗A单克隆抗体，B端滴一滴抗B单克隆抗体；2.用碘伏消毒手指；3.取无菌采血针，采血；4.用牙签一端蘸取少量血液，置于抗A单克隆抗体搅匀，换取另一根牙签蘸取少量血液，置于抗B单克隆抗体搅匀；5.轻轻转动玻片，使其充分混匀，静置数分钟后，观察结果
5、。,注意：两次取血的牙签一定不能混用。,A,【实验结果】Experiments results,B,AB,O,【实验结果】Experiments results,免疫标记技术immunolabeling techniques,简 介,免疫标记技术是指用荧光素、酶、放射性同位素等对抗体或抗原进行标记，然后再通过检测标记物来观察抗原抗体反应的实验技术。,分类 classification,免疫胶体金技术,胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析技术研制而成，该技术是90年代初在免疫渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性腺激素（HCG）的测定和乙型肝炎病毒表面抗原（HB
6、sAg）等检测。,胶体金（Colloidal gold）是氯金酸（HAuCl4）的水溶胶，氯金酸在还原剂的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态。,胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电吸引而形成牢固结合。胶体金标记技术（Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示踪标记物应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。,胶体金试纸条诊断技术的原理,以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/抗体
7、。最常用的是双抗夹心法检测抗原,胶体金试纸条示意图,【实验原理】Experiments mechanism,原理图,胶体金标记的鼠抗人hCG抗体,抗人hCG抗体,抗鼠IgG抗体,hCG,【操作步骤】Experiments Methods,1.待测样品、检测试纸和其它检测材料等在室温后检测,2.将测试纸有箭头的一端插入尿液标本容器中，5秒钟后取出平放，5分钟内观察结果,注意：测试纸插入尿液深度不可超过MAX标志线,【实验结果】Experiments results,阳性：,阴性：,无效：,实验报告test report,实验原理实验材料实验步骤实验结果及分析,注意：实验报告封面上各项一定填写完整。,
