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1、ICS点击此处添加中国标准文献分类号SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T XXXXXXXXXHIV抗体质控血清的制备和使用规程Codes of making and using for quality control serum of HIV antibody点击此处添加与国际标准一致性程度的标识XXXX - XX - XX发布XXXX - XX - XX实施中 华 人 民 共 和 国国家质量监督检验检疫总局发布前言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中华人民共和国北京
2、出入境检验检疫局。本标准主要起草人:吕洁毅、戴俊、王树祥、丁国允、陈素英、卢林、何振毅。HIV抗体质控血清的制备和使用规程1 范围本标准规定了HIV抗体质控血清的制备、使用和保存方法。本标准适用于出入境检验检疫机构对HIV抗体质控血清的制备和使用。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 19489 实验室 生物安全通用要求JJF 1005-2005 标准物质常用术语和定义（ISO GUIDE 30:1992）JJF 1006-1994 一级标准物质技术规范
3、WS 293-2008 艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准CNAS-GL03 能力验证样品均匀性和稳定性评价指南CNAS-GL29 标准物质/标准样品定值的一般原则和统计方法（ISO GUIDE 35:2006）消毒技术规范（2002年版） 全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1质控血清 quality control serum为了监控检测的重复性和稳定性以及试剂盒批间和孔间差异，而由实验室设置的一套外部对照血清，包括强阳性、弱阳性和阴性质控血清。3.2均匀性 homogeneity 与物质的一种或多种特性相关的具有相同结构或组成的状态。通过测
4、量取自不同包装单元(如:瓶,包等)或取自同一包装单元的、特定大小的样品,测量结果落在规定不确定度范围内,则可认为标准物质对指定的特性量是均匀的。JJF 1005-2005,定义3.103.3 瓶间均匀性 between-bottle homogeneity 标准物质的特性在瓶与瓶之间的变异。 注：术语“瓶间均匀性”适用于其它类型的包装（例如小瓶）和其它物理形状及试片。 CNAS-GL29,定义3.53.4 稳定性 stability 在特定的时间范围和贮存条件下,标准物质的特性量值保持在规定范围内的能力。JJF 1005-2005,定义3.123.5开瓶稳定性 bottle-unsealed
5、stability包装单元(如:瓶,包等)开封后在特定贮存条件下标准物质特性的稳定性。3.6长期稳定性long-term stability 在标准物质生产者规定贮存条件下标准物质特性的稳定性。CNAS-GL29,定义3.113.7 S/CO值 S/CO value指ELISA试验测定得到的样本的HIV抗体光密度值与试剂检测的临界值（cut off value）之比，是抗体反应强度的指标，在一定范围内S/CO值越大，说明反应强度越高。WS 293-2008,定义2.124 要求4.1 原料选择原料选择应符合下列要求： 应满足适用性、代表性、以及容易复制的原则； 原料的基体应和使用的要求相一致或
6、尽可能接近，即收集的原料（血清）应清亮，无肉眼可见的溶血、黄疸、乳糜颗粒或其他杂质； 应具有高度稳定性和适合检测和试验要求的特异性，不应含有干扰使用目的的杂质； 应有足够的数量，以满足在有效期间使用的需要。4.2 质控血清的外观、装量和质量4.2.1 质控血清应清亮、均匀，无溶血、黄疸、乳糜颗粒和凝块。4.2.2 质控血清可按1年使用量配置，每瓶装量应不少于每次实验的用量。4.2.3 质控血清的质量要求应符合全国艾滋病检测技术规范第二章中9.1.2.1的规定。5 准备5.1 器材 移液器、移液头、移液管、刻度试管、带盖样品杯、灭菌过滤器或注射器、0.2 m灭菌微孔滤膜（聚醚砜膜-PES）、镊子
7、、吸球。5.2 仪器酶标仪、洗板机、37 水浴箱、-20 以下非自动除霜低温冰箱。6 制备程序6.1 原料的采集和处理6.1.1 原料采集主要包括： 正常人血清：从日常检测样品中收集感染性疾病血清学标志物包括HIV-1/2抗体、HIV-1p24抗原、乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、丙肝病毒（HCV）抗体和梅毒螺旋体抗体均阴性的血清，或通过合法途径购买正常人血清； 阳性参考品：收集日常检测样品中确证HIV抗体阳性、其他感染性疾病血清学标志物（HBsAg、HCV抗体、梅毒螺旋体抗体）均阴性的血清（仅艾滋病检测确证实验室可收集），或购买阳性对照质控品（包括HIV抗体诊断试剂盒内提供的阳性对照、高浓度
8、外部阳性对照质控品）。6.1.2 原料预处理将正常人血清和阳性参考品进行56 、30 min灭活，3 000 r/min离心15 min，加入0.01硫柳汞作防腐剂。6.2 制备方法6.2.1 灭菌将实验用的移液头、移液管、刻度试管、样品杯等进行灭菌备用。6.2.2 稀释对阳性参考品进行系列的倍比稀释并以ELISA法检测，根据实验室内部质量控制要求确定质控血清最终稀释度，以正常人血清为稀释液，将阳性参考品按最终稀释度进行稀释。6.2.3 除菌用0.2 m微孔滤膜过滤除菌。6.2.4 分装按实验室1周用量等量分装，冻存于-20 以下非自动除霜低温冰箱备用。6.2.5 检验质控血清分装后应进行均匀
9、性检验（参见附录A）；在规定的贮存条件下，可根据需要设定时间间隔进行稳定性检验（参见附录B）。7 生物安全及防护措施制备质控血清的实验室生物安全及防护措施按全国艾滋病检测技术规范中第八章的规定。8 质控血清的使用 8.1 使用方法使用方法如下： 从冰箱取出质控血清后待完全融化且平衡至室温； 轻轻颠倒使其充分混匀； 加样时按待测样本对待，依试剂盒说明书进行操作； 取样完毕，及时盖上瓶盖，放置2 8 贮存，1周后应弃去，避免反复冻融。8.2 注意事项 注意事项包括: 质控血清仅用于体外诊断试剂检测时的质量控制，不得用作校准品； 每一次实验应使用质控血清； 质控血清都经过灭活处理，但仍应按有潜在生物
10、传染性样本对待； 使用时应按第7章的要求做好防护，使用后应立即盖好瓶盖，避免污染； 使用后应按GB 19489和消毒技术规范相关规定对废弃物进行处理。9 质控血清的保存 质控血清未开封在-20 以下密闭贮存稳定1年； 质控血清开瓶后在2 8 贮存稳定1周。附录A （规范性附录）质控血清均匀性检验A.1 方法A.1.1 确定抽取样品量，按JJF 1006-1994中4.1和4.2的规定。A.1.2 确定取样方式，按JJF 1006-1994中5.1和5.2的规定。A.1.3 按抽取数量抽取分装好的质控血清，按随机次序进行ELISA检测，每瓶检测1次，计算测定的S/CO值的平均值（）、标准差（S1
11、）；另用上述质控血清中的1瓶连续检测相同次数，计算S/CO值的平均值（）、标准差（S2）。A.1.4 计算瓶间均匀性CV()，应满足CV20的要求（参见4.2.3）。A.2 统计指标计算统计指标计算见式（A.1）、（A.2）、（A.3）和（A.4）。(A.1)(A.2)(A.3)(A.4)当S1S2时，令CV瓶间=0式中：平均值；n 测量次数；xi 指定参数第i 次测量值；S 标准差；CV变异系数。附录B （资料性附录）质控血清稳定性检验B.1 方法B.1.1 稳定性检验的样品应从分装成最小包装单元的样品中随机抽取，抽取的样品数对于总体样品有足够的代表性。B.1.2 按抽取数量抽取分装好的质控
12、血清，进行ELISA检测，计算测定的反应OD值（样本OD值-阴性OD值）的平均值（）作为稳定性检验中质控血清的参考值。B.1.3 稳定性检验应包括开瓶（1周）稳定性和长期（1年）稳定性检验。 B.1.3.1 开瓶稳定性：按抽取数量从-20 以下冰箱中抽取制备保存的质控血清，在1周开瓶有效期内每天进行ELISA检测直至到期后1天，测定反应OD值，求其平均值（）和标准差（S）。B.1.3.2 长期稳定性：采用倒计时方式，将检测日期定为第 0 d，假如预定在某一温度下保存时间为 N d，则在 0 d 前的第 N d 从-70 冰箱中按抽取数量抽取制备保存的质控血清，置于特定温度下，至 0 d 统一进
13、行ELISA检测，测定反应OD值，求其平均值（）和标准差（S）。具体设定条件为：-20 ，3、6、9、12、18个月。B.1.4 采用 t 检验法分析各时间点样本平均值与参考值之间是否存在显著性差异作为质控血清稳定的依据。B.2 统计指标计算平均值（）计算见式（A.1）、标准差（S）计算见式（A.2）、t 检验法按CNAS-GL03中5.2的规定。参考文献1 WS/T 124-1999 临床化学体外诊断试剂盒质量检验总则S2 国家药典委员会.中华人民共和国药典M（2010年版）.北京：中国医药科技出版社，20103 韩永志（国家标准物质研究中心）.标准物质的定值J.化学分析计量，2001,10(5):38-394 艾承锦,彭明婷,杨雁华.标准物质的均匀性评价J.中国医药导刊,2007,9(2):155-1575 刘建礼,朱红,张绍福. HIV质控血清稳定性的关键影响因素研究J. 中国国境卫生检疫杂志,2011,34(1):4-6_
