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1、 沧州分公司企业标准 水中细菌（异养菌）总数的测定 QJ/CZFGS 13.051-2008（A/0） 1概述细菌总数测定是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌密度的方法。因为细菌能以单独个体、成双成对、链状、成簇等形式存在,而且没有任何单独一种培养基能满足一个水样中所有细菌的生理要求。所以,由此所得的菌落可能要低于真正存在的活细菌的总数,实际上是指1ml水样在营养琼脂培养基中,于37培养72小时后,所生长细菌菌落的总数。此法主要作为判定饮水、水源水、地表水等污染程度的标志。2 实验室所用的器具2.1.热空气灭菌烘箱2.2.高压蒸汽消毒锅2.3.冰箱2.4.超净工作台或无菌室2.5.培养箱2.6
2、.试管、吸管、稀释瓶3步骤3.1.配制营养琼脂培养基3.1.1成分：蛋白胨10.0克、牛肉膏3.0克、氯化钠5.0克、琼脂15.0克、蒸馏水1升。培植：在不锈钢锅中，加热各成分完全溶解，补充蒸发失去的水分，调节PH在7.4-7.6之间，趁热用四层纱布加脱脂棉过滤，分装三角瓶中，蒸压灭菌12115分钟，存放在4冰箱中备用。3.1.2配制稀释水：将8.5克氯化钠溶解于1升蒸馏水中，分装大试管，每管装0.2ml，蒸压灭菌12115分钟备用。3.1.3细管粗端塞脱脂棉每根用纸包好干热灭菌160-1702小时，平皿也做同样处理。4.水样的稀释4.1.选择稀释度：稀释度要选择适宜,以期在平皿上的菌落总数介
3、于30-300之间。例如,如果认为直接水样的标准平皿计数可高达3000,就应该将水样稀释到1:100后,再进行平皿计数。多数饮用水水样,未经稀释直接接种lml,所得的菌落总数可适于计数。4.2水样的稀释方法：将水样用力震摇20-25次,使可能存在的细菌凝团得以分散。以无菌操作方法吸取10ml充分混匀的水样,注入盛有90ml灭菌水的三角烧瓶中（可放有适量的玻璃珠）混匀成1:10稀释液。4.3 吸取1:10的稀释液lml注入盛9ml灭菌水的试管中,混匀成1:100稀释液。按同法依次稀释成1:1000、1:10000稀释液。注意吸取不同浓度的稀释液时,必须更换吸管。也可按下图所示的方法进行稀释。5.
4、操作方法5.1 以无菌操作方法用1m1灭菌吸管吸取充分混匀的水样或2-3个适宜浓度的稀释水样lm1,注入灭菌平皿中,倾注约15ml已经融化并冷却到45左右的营养琼脂培养基,并立即旋摇平皿,使水样与培养基充分混匀。每个水样应倾注两个平皿,每次检验时,另用-个平皿只倾注营养琼脂培养基作空白对照。5.2. 待琼脂冷却凝固后,翻转平皿,使底面向上,置于37恒温箱内培养72h,进行菌落计数。 沧州分公司2008-12-15发布 2008-12-20实施 QJ/CZFGS 13.051-2008（A/0） 水样的稀释操作图6. 菌落计数6.1. 培养之后,立即进行平皿菌落计数。如果计数必须暂缓进行,平皿得
5、存放于5-10并且不得超过24h。6.2.作平皿菌落计数时,可用肉眼观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏,在记下各平皿的菌落数后,应求出同稀释度的平均菌落数。在求同稀释度的平均数时,如果其中一个平皿有较大片4状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的茵落数。若片状菌落不到平皿的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,则可将此半皿计数后乘以2代表全皿菌落数,然后再求该稀释度的平均菌落数。如果由于稀释等过程中有杂菌污染,或者对照平皿显示出培养基或其它材料染有杂菌,以致平皿无总计数,则应报告实验事故。6.3. 对那些看来相似,距离相近但却不相触的菌落,只要它们之间的距离不小于最小菌
6、落的直径,便应一一予以计数。那些紧密接触而外观(例如形态或颜色)相异的菌落,也应该一一予以计数。7.计算和报告计数结果7.1. 细菌总数是以每个平皿菌落的总数或平均数(例如同一稀释度两个重复平皿的平均数)乘以稀释倍数而得来的。各种不同情况的计算方徐如下：7.2. 首先选择平均菌落数在30-300之间者进行计算,当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围肘,即以该平均菌落数乘其稀释倍数报告(见例)。7.3. 若有两个稀释度,其平均菌落数均在30-300之间,则应按二者之比值来决定。若其比值小于2应报告两者的平均数,若大于2则报告其中较小的数值(见例2、例3)。7.4. 若所有稀释度的平均菌落数均大于
7、300,则应按稀释倍数最大的平均菌落数乘以稀释倍数报告。(见例4)。7.5.若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释倍数最小的平均菌落数乘以稀释倍数报告(见例5)。7.6.若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间,则以最接近300或30的平均菌落数乘稀释倍数报告(见表9-9例6)7.7.菌溶计数的报告：菌落数在100以内时按实有数报告；大于100时,采用二位有效数字,用10的指数来表示。在报告菌落数为无法计数时,应注明水样的稀择度。8安全注意事项：8.1 严格执行操作规程，熟悉本岗位的特点和火灾危险性。8.2上岗按规定着装，要求掌握消防“四懂四会”内容。8.3按规定正确使用电器设备，防止人体触电和仪器设备的损坏。8.4使用光电仪器时，严格按仪器使用说明书使用和维护，使用过程严禁离人。 待添加的隐藏文字内容18.5分析之前认真检查玻璃器皿是否有裂痕及损坏，以免液体流出伤人。QJ/CZFGS 13.051-2008（A/0） 8.6所用试剂和溶液，必须有明确的标识，对不明物质要慎重使用，以免因发生化学反应，造成事故。8.7分析过程所用试剂、样品等液体，不可倒入下水道。8.8注意使用高压灭菌炉时防止烫伤，戴好防烫手套和正确使用方法。8.9实验完毕检查水电开关是否关好。
