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1、呼吸道合胞病毒疫苗研制进展2/一2;248?综述?呼吸道合胞病毒疫苗研制进展西安医科大学第二附属医院lL(710004.11)侯伟王丽综述雷誊莲一审校A摘要枷.,.染.近年来,RSV疫苗研制取得1较太的进展.减毒活疫苗亚单位痘苗和基因重组覆苗的研制,为RSV关键词呼吸道舍胞病毒保护性抗原疫苗呼吸道合胞病毒(RSV)是婴幼儿下呼吸道感染的最常见病原体.RSV感染通常引起婴幼儿毛细支气管炎和肺炎,其感染呈世界性分布,估计垒球年发病人数和死亡人数分别为6500万和16万.RSV感染多发生于2岁以内的婴幼儿,26十月发病率最高娄对RSV感染的免痉是不完垒的,既往感染不能阻止以后疾病的再发.RSV感染后
2、可继发反复喘息,哮喘私免疫功能紊乱目前RSV已成为严重威胁婴圭f】儿健康的疾病.因此研制安全有效的痉苗预防RSV感染就显得特别重要.故WHO已将RSV痉苗研制列为优先发展项目之一口本文就近年来RSV痘苗研制进展作一简要综述.1RSV的保护性抗原RSV属副粘液病毒科肺炎病毒属,为单链负股RSV病毒.已被识别的表面蛋白有10种,其中4种对RSV感染后的免疫起主要作用这4种蛋白分别为:F椿蛋白,G糖蛋白,Mz基质蛋白和N棱蛋白.G蛋白为体液免疫的保护性抗原,而F蛋白既是诱发傩液免疫的保护性抗原也是诱发细咆免疫的抗原.M和N蛋白为细胞免疫的保护性抗原在RSV的保护性抗原中,其重要性依次为F>G&
3、gt;M>N.2RSV疫苗研制中存在的问题大量的研究表明:RSV感染的发病机理与机体异常的免疫病理有密切关系RSV的发病高峰在26个月,在这个时期患儿体内有较高滴度的母传抗体,它可干扰RSV痉苗的效果以及安垒性和反应原性在早期的研究中,使用福尔马林灭活疫苗(FIRSV)虽然可以诱导产生高滴度中和抗体,但儿童在后自然感染后发生病情加重.由于目前耐RSV感染的发病机理尚不完皂了解在研制RSV疫苗中存在许多困难,但一种*富县妇幼保鲢院儿科*安医科大学第一附届医院儿科物成功的痉苗应具备下条件:在母体抗傩存在的情况下育效;能诱导对RSV两十亚型的抵抗力;在接种后自然感染中不出现疾病增强作用.针对以
4、上问题研究员进行了大量的研究.3RSV灭活疫苗60年代.RSV疫苗研制玎期,发现FIRSV不仅无保护作用,相匣在以后的RsV自然感染中,痉苗接种组鞍对照组感染率高日病情严重(即疾病增强作用)研究发现FIRSV与自然感染诱导的免疫应答之间有明显不旧.FIRSV接种后虽可诱导产生高滴度的中和抗体,但其活性较低.棉鼠被动输入这种抗体不能抵抗RSV的感染.也不出现疾病增强作用.时此,推测FIRSV引起的疾病增强作用不是血清抗体介导的,而是由特异性T细胞介导的.Connors等研究发现,用FIRSV免疫BALB/C小鼠后,体内可出现大量的CD:淋巴细胞,而cI淋巴细胞水平较低,用特异性单克降抗体(McA
5、b)消除CD+细胞后,呱_f可完全消踪疾病增强作用;而用cDMcAb消除cD细胞后,只能溅轻疾病增强作用.并证实且有特异性抗体,若没有cD和CD/细胞存在.则无疾病增强作用所以RSV特异性CDt和CD/细胞具有清除RSV和使病加重的双重作用,cD细咆的这种作用比CD+细胞强.随后Gnham等用P标记鹊寡核苷酸探针进行枝酿杂交舒析RSV疫苗接补后棉鼠肺组织c细咆因子mRNA的表达结果显示:FIRSV疫苗和RSV亚单位痘苗可诱导机傩产生IL一4和IL10等泌,表现Th样反应,而RSV减毒活疰苗则诱导机体产生INF,II一2,表现为Th样臣应壤近的研究靛聪时淌昧II一4和IL10的作用,可消脒FIR
6、SV的痘病增强作lHj,只消除1L一4的:用nr被轻_芷气话病理般告的程度.消I袋II一2和NF一7对疾病增强捧川1】影.,总之,FIRSV时癌摘增强作用的帆耻叫f痘苗改变或目止了局部抗体辛皿航体帕碰符,fD胞,1,第卷第菩:志杂睦瞟蠹中华儿童保健杂志1996年第4卷第4期249的增多,产生了不适当的Tk细晌应答,释放细胞固于IL一4和ILlO,1】【刚炎症及改变B细咆的成熟过程.于F1一RSV接种后更易发生疾病,而不能产生像护性免痉,因此F1一RSV不能用于预防RSV感染.4RSV的减毒焉疫苗鉴于FIRsV引起的严重后果,促使人们改变痘苗的发展方向,研制减毒活疫苗.用RSV减毒活痤苗预舫RS
7、V感染具有许多优点,如:活疫苗可同时诱导呼吸道局部和血清抗体产生,接种后不会发生疾病墙强作用母传抗悼存在不影响其免疫效果但要解决硅苗减毒性和免疫原性之间的平衡以及遗传稳定性也并非易事.最初研究活疫苗是通过低温连续传代得到RSV玲适应(c8)突变抹Friedewad等在26经16欢传代得到ca减毒疫苗,但由于这种疫苗仍保留有低度剩余毒力,可在易感个体中引起鼻溢,低热,轻度中耳炎,固而被放弃.睫后又有人研制温度敏感(ts)性突变株.Pringle等在实验中把RSV经过3次连续诱变产生ts突变株tsIC,其阻断(shuto)温度为37C,但因麒仍保留部分毒力,不能用于血清阴性的儿童为获得完全减毒,基
8、固稳定和免疫原性良好的疫苗,有人在鬻培养液中加入5一氟脲嘧啶(5一Fu),使ts诱变,获得进步减毒痘苗.Growe等在血清阴性黑猩撂中对RSVA野毒抹豹3个ts突变铼ts1,ts一1一NG一1和ts一4进行研究Rsv.A经5一Fu诱变产生ts1和ts一4,而ts1再经亚硝基脏(N6)诱变产生ts一1一NG-1这种突变抹具有高度构免疫原性,能有效地抑制RSV的复制但_仍可引起严重的鼻滥.为获得完垒减毒的活瘴苗,研究人员又研制了Cpes一248和Cpes一530等突变辣,这些疰苗在动物实验中表现出了良好的特性|_.睫他们可萜成为膏希望的候选疫苗.5RSV亚单位疫苗随着生物拉术的发展,毋f究人员开始
9、尝试RSV亚单位琏前.研究表明:在RSV的抗原组成巾F牺蛋白钝诱导产生保护性免疫反应,且稿型RSVF虽自较岱定,在动物试验中F疆臼能诱导两型病罐韵交叉保户作用,相反6蛋白对予瞬型RSV其产生较弱的保护作用,不能提供完全亚型交叉保护作用心此,RSV?F白和不同亚型的G盘自是,单位硅苗鹋主要或衔.Tristram等用纯亿F蛋白啦单位疫l盲在13名RSV抗体阳性=f1儿印进行的【期临床观察显示.F蛋白对人具有良好的免癌原性Wathen等给棉鼠皮r往时RSVA柏F蛋白,可性褓鼠蕺埘RSVA,B盟攻击产生抵抗力,而RSVA的G蛋白!对RSV?A型的攻击产生较弱的抵抗力.除纯化F蛋白亚单位疫苗外,还有人用
10、化学方法直接获得FG嵌合亚单位疫苗.Kakuk等在非洲绿弦进行帕实验表明:FG亚单位疫苗不会引起瘴病增强作用,其免疫效果与F纯化蛋白相似.为增强RSV亚单位疫苗的免疫效果,WMsh等m用霍乱毒紊B链(CTB)作为佐剂观察F蛋白的免疫效果,小鼠鼻内接种cTBF瘦苗后可诱导局部IgA和血清IgG升高,对上下呼吸道均有明显的保护作用.虽然用佐剂可增强亚单位硅苗的免疫效果,但这种亚苹位痘苗不能完全保护RSV的攻击研究人员对RSV亚单位疫苗所诱导的保护性免疫机制进行的研究表明,呼吸道局部免疫,体液免瘦和细胞免醺均参与保护性免疫研究发现,RSVF蛋白踪可诱导产生局音lj抗体IgA和血清中午【抗体lgG,还
11、可匮导产:生C州种cDT细咆,而G蛋白仅诱导CDtT细胞.此外,F蛋白还可诱导RSV特异性细胞毒性T细1地(CTL)的活性.F和G蛋白诱导产生的细胞因子种类也不阿,F蛋白可诱导产生tL2,IL一3表现Th厦应,而G蛋白则诱导产生IL一3,IL一4表现Thz反应.接种亚单位疫苗可诱导机体局部和血清产生保护性抗体,及诱导细晌介导的免疫应答(CM1).这对保护RSV感染有一定的作用,但这种保护作用不完全,不持久Hat1等研究发现,即使体内有高水平的F和G蛋臼抗体,仍有25重复感染的可能性.局部特异性IgA抗f#与保护作用无明显联系.亚单位痘苗虽可诱导全面免疫,但其免疫原性有待提高.这种疫苗仍处于早期
12、研究阶段6RSV基因重组疫苗基重组痤茁是应用基因工程技术把天然和人工合成的遗传物磋插入适当的载体,然后选择所需要基删的载俸蓖隆获得斑苗.RSV重组疫苗纳载体有杆状稍毒(baculovirus,BAC),痘苗病毒(VaeciniaVirusVAC)椰雌病毒(adenovlrus,ADV).已知VAc商一大拈纽,其中有许多可供外来病毒插入的直点VACRSV重纰痉苗是将RSV基因插VAC胸苷激酶(TK)位.Wanthen等m用BAC戴悼在昆虫细施q1表述FG嵌台蛋白,其免蛙原性极强,两剂2gFG蛋白免疫怖呵获得对RSV攻击的保护.若用200rig免痤棉鼠,1个月后其【J科l抗体效价高选3264研究发
13、现小缸接补VACF或ADVF一可匮导产生高水f们F抗悼,与纯化F墨白谯前不懈,选种抗体具有高蛙的性,可l虬止肺内RSV的复制,也不会出删疫病中华儿童保健杂志1996年第4卷第4辫增强作用.但用VAC免疫小鼠后.在支气管肺泡灌洗演中嗜酸性粒细胞增加(从3增加到1425,6).Olmsted等0耵厢VACF免疫仓鼠后.可诱生高水平的中和抗体.其效价甚至超过RSV感染所产生的抗体效价.并毖使仓鼠下呼吸遭获得保护.而用VACG该生的中和抗体仅为VACF的1/6.HSU等也证实,表达F,G以及FG嵌合蛋白的重组ADV疫茁,对拘具有良好的免疫原性,脆保护狗的上下呼吸道免于RSV感染.但甩ADV一4.ADV
14、-5和ADV-7sVF重组疫苗接种黑提理后,不脆使其获得保护,ADV一7初免后仅产生低水平中和抗体.RSV基因重组疫苗虽然处于早期研兜阶段.但它已表理出了良好的特性.重组疫苗免疫原性强,可诱导机体全面免疫.在母传抗体存在时有效.因此.这种疫苗最可能成为预防RSV感染的理想疫苗.7结语近几年来,RSV疫苗的研制取得了较大的进展,但仍存在许多问题.由于RsV的发病机理十分复杂,酴了体赦免疫参与发翥外,细胞介导的免疫和局部牯膜的防耳也起十分重要的作用.目前尚无法两测要儿对RSV疫苗免疫应答的准确方法,疫苗的那些成分与保护性免疫应答有关.这种免疫力的持久性,以及与有害免疫之间的关系尚不清楚.RSV减毒
15、活疫苗可诱导机体全面免疫,坦要获得完全减毒且基因稳定的疫苗仍有一定困难.亚单位疫苗安全,有效,但其免疫原性有待提高.基因重组疫苗不但安全,而且可诱导全面免疫应答,能在体内中和抗体存在时接种,是理想的RSV疫苗.参考文献lAlwanWH.kolowskaWJ,OpenshawPJM.DistincttypesoflungdiseasecausedbyunctionalsubsetsafantivitalTcel1.JExpMed,1994179(1)t8l2HlCB,WalshEE.LongCEteta1.Immunitytoanyfrequencyofreinfectionwithrespir
16、atorysyncyrLalvirus.JInfectDis.1991636933HallCB.ProspectsIorarespiratorysyncytialvirusvaccine.Science,1994265(5177):l3934ConnorsM,GieseNA-kulharniAB,eta1.Enham-cedpulmonaryhistopathologyinducedbyrespiratorysyneytialviruschallengeoIormalin-inactivat?edRSVimmunlzedBALB/CmiceisabrogatedbydepletionoIIL-
17、4andIL-10,JVirolt1994.68(8),532l5ComorsM.CollinsPL,FirestoneCY,eta1.CottonratspreviouslyimmunizedwithachimericresplrtorysyncytlalvirusFGglycoproCeindevelopen?hancedpulmonarypathologywheninfectedwithRSV.aphenomenonnotenCounteredfollowingim?munlzationwithvaccinlaRSVrecomblnanesorRSV.Vaccine,l99210(7):
18、4756ConnorsM.kufkainiAB-FirestoneCY.eta1.Pui.monaryhistopathologyinducedbyrespiratorysyncytialvirtschallengeoIormalin?inactivatedRSVtmmurizedBALB/Cmiceisahorogatedbydeple.tionofCD+TCel1.Jvlrol,199266(12):74447GrahamBS,HendersonGS,T日ngYW,etat.Prim-lagimmunimtiondeterminesThelpercytokinemR-NAexperessi
19、onpatternsinLungoImicecha1.1engedwithrespiratorysyncytialvirus,JImmunol,l993ll5l(4):20328PringleCRtFilipiukAH,RobinsonBS.etaI_Ira-monogen/cityandpathogenicityoftripletempera-turesensitvemodifiedrespiratorysyneytialvirusinadultvolunteers.Vaccine,1994;1l(4):4739CroweJEJr-collinsPL.LondonWT,etaI_AC0Il1
20、.pafitsoninchimpazeesoItheimmunogenicityandefficacyofHattenuatrdrespJratonysyncydalvirustemperature?sensitivemutantvaccinesandvacdniavirusrecombinantsthatexpressthesur|aceglycoproteinsoIRSV.Vaccinet1993II(4):139510CroweJEJr.BuiPT,LondonWT.eta1.Satlsac.tohlyattenuatedandprtectivemutantderivedroraapar
21、tiallyattenuationcold?pessagedresplra?torysyncytlalvirus/nutantbyintroduedonofadditionalattenuatingmutationsduringchemicalmutagensis.Vaccine,1994l2(8):6911lTristramDA,WelliverBC,MohareK.eta1.Im.munogenicityandsaetyofrespiratiorysyncytmlvirussuhunltvaccineinseropositlvechildrenl836monthsold.JInjectD/
22、s,1993;167(1):19112hakukTJtsoikeK,BrideauRJ,eta1.Ahumanrespiratorysyncytalvirusprimatemodel0fen-hancedpulmonarypathologyinducodwithafor-maljnnactivatedRSVvaccinebutnotarecomhi.攀.J7u中华儿童保健杂志1996年第4卷第4期251吉林市46988名人托儿童传染性疾病调查分析吉林市妇女儿童保健所(132001)王馨王吉平侯春华马虹君一.7我所对199o年1994年吉林市入托儿童患各种趋势.(P<o.009).-yjf
23、J传染扁的情况进行调查分折,现将结果报告如下.3讨论1资料与方法-3.1从滑壹中可以看出.在散居儿童中各樊传染病检1.1资料来源对吉林市区o7岁入托儿童46988出率较高,虽然每年传染扁发扁率逐年下降,但仍不断名.其中男23499名,女23489名,拄要求进行体检和发生,所以儿童入托前的体检是至关重要的,这样可蘸调查.免在园所中发生传染病的施行与暴发.1.2方法(1)认真填写统一调查表.(2)全面体检3.2乙肝疫苗全程免疫接种对防止乙肝是有效果的,(内科,外科,五官,皮肤科).(3)肝功能检查及乙肝表因此从新生儿开始进行己肝疫苗的接神,从前降I睡乙面抗原检验.(4)对有性痛症状及性病接触史者进
24、行检肝的发病率是非常必要的.查.(5)x光检查中发现异常者均摄一片.3.3枉入托儿童体柱中.我们发现儿童患传染性软疣2结果较多,发病率有运年上升趋势,尤其是1994年度.传染2.1各种传染病盅病情况在1990年1994年的5性软疣的发病率高达0.49,因此.提示我们对传染性年中,共体检07岁儿童46988名.患各种传染病1皮肤病应引起高度重枧.406名,总发病率2.99,每年传染病的发病率逐年下3.4随着经济改革的开放,性痛传播步及到儿童,严降.重地危害了儿童的身心健康,应引起我们保健部门及2.2各种传染病的分布情况经过5年观察八托儿童全社台高度重视.各种传染病达10种.水痘,腮腺炎乙肝表抗阳性发病(1995-0712收稿1996?06.17修回)率遥年下降f传染性软疣,滴虫性阴道炎及淋病有上升通知作者同志请注意,投稿时请在论文首页左下角注明课题经费的资助单位及课题号,获奖课题请寄获奖证书复印件.谤谢各作!本刊编辑部
