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1、血浆总同型半胱氨酸测定在智力低下等神经精神异常病因调查中的应用临床儿科杂志第26卷第12期2008年12月JClinPediatrVo1.26No.12Dec.2008血浆总同型半胱氨酸测定在智力低下等神经精神异常病因调查中的应用?1013?论着?SayamiSujan.张尧杨艳玲魏晓琼江剑辉宋金青刘平燕容东锦华田熠华王兰凤姜玉武秦炯吴希如1.北京大学第一医院(北京100034);2.广东省广州市妇婴医院(广东广州510180);3.北京大学生育健康研究所(北京100086)摘要:目的调查原因不明的神经精神异常及甲基丙二酸尿症患儿中同型半胱氨酸血症的发生情况,探讨荧光偏振免疫测定法进行血浆或血
2、清总同型半胱氨酸测定的应用价值.方法对2000年1月至2007年l2月因原因不明的智力低下,运动障碍,癫疝,头痛等多种神经系统异常患儿799例,甲基丙二酸尿症126例患儿,采用荧光偏振免疫测定法检测血液总同型半胱氨酸,气相色谱质谱联用分析测定尿液有机酸,液相串联质谱法进行血液氨基酸,酯酰肉碱谱分析.结果925例高危患儿中共发现同型半胱氨酸血症128例(13.84%).799例原因不明的神经系统疾病患儿中同型半胱氨酸血症27例(3-38%),血液丙酰肉碱及游离氨基酸浓度正常.126例甲基丙二酸尿症患儿中合并同型半胱氨酸血症101例(80.16%),血液丙酰肉碱浓度增高.结论甲基丙二酸尿症合并同型
3、半胱氨酸血症是甲基丙二酸尿症的主要临床表型,为鉴别诊断,正确治疗,应及早进行血液总同型半胱氨酸测定.应用荧光偏振免疫测定法检测血清/血浆总同型半胱氨酸,是同型半胱氨酸血症高危筛查的可靠方法.【幅来儿科杂志,2o08.26(12):lol31015关键词:智力低下;同型半胱氨酸血症;甲基丙二酸尿症;丙酰肉碱中图分类号:R725文献标识码:A文章编号:10003606(2008)12101303Determinationofplasmat0taIhomocysteineinpatientswithmentalretardationorotherneuropsychologicalabnormali
4、tySayami8ujan|ZHANGYaol,YANGYonlinbJ,WElXiaoqiong3,JIANGJianhui2,SONGJinqiagJLIUg.YANRong,DONGJthua1,TIANYihuaJ,WANGLan-fe,JIANGYuWlLl,QINJiong,WUXiru(.DepartmentofPediatircs,PekingUniversityFirstHospital,Bering100034,China;2.WomenandChildrenSHospitalofGuangzhou,Guangzhou510180,Guangdong,China;3.1ns
5、tituteofReproductiveandChildHealth,PekingUniversity,Beijing100086,China)Abstract:ObjectivesToinvestigatetheprevalenceofhomocysteinemiainpatientswithneurologicaldefectsofunknownoriginandpatientswithmethylmalonicaciduria,andexploretheapplicationoffluorescencepolarizationimmunoassayinscreeningpatientsw
6、ithhighriskofhomocysteinemia.MethodsNinehundredandtwentyfivepatients(586maleand339female,agedfrom3daysto18years)of29provincesofmainlandChinawerestudiedfromJan2000toDec2007.Amongthem.799werewithmentalretardation,movementdisorder,seizures,headacheorothernervoussystemsymptoms,and126werewithmethylmaloni
7、caciduria.Theurineorganicacidswereanalyzedwithgasehromatographyandmassspectrometry(GCMS).Serumorplasmatotalhomocysteineweredeterminedwithfluorescencepolarizationimmunoassaymethod.Bloodaminoacidsandacylcarnitineprofileswereanalyzedwithliquidchromatographytandemmass(LC.MSMS).ResultsOnehundredandtwenty
8、eightpatients(13.84%)weredetectedwithhomocysteinemia.Among799patientswithneurologicaldefectsofunknownorigin,27(3.38%)werefoundtohavehomocysteinemia,whiletheirbloodacvlcarnitinesandaminoacidsprofileswerenorma1.101(80.16%)of山e126patientswithmethylmalonicaciduriaa1s0hadhomocysteinemia.andthelevelofbloo
9、dacylcarnitineswereincreased.ConclusionsThecommontypeofmethvlma1onicaeiduriawasfoundtobecombinedwithhomocvsteinemia.Bloodtotalhomocysteinedeterminationshouldbeperformedasearlyaspossiblefordifferentialdiagnosisandpropertreatmentofhomocysteinemia.Bloodtotalhomocysteinedeterminationbyfluorescencepolari
10、zationimmunoassayiSareliablemethodfordiagnosisofh0mocvsteinemia.基金项目:国家自然科学基金面上项目(No.30471832),十一五国家科技支撑计划项目(No.2006BA105A07)通信作者:张尧电子信箱:zy_tzhyahoo.con.en?1014?临床儿科杂志第26卷第l2期2008年12月.,c2PediatrVo1.26No.12Dec.2008(Jc2inPediatr,2008,26(12):1013-1015)Keywords:mentalretardation;homocysteinemia;methylma
11、lonicaeiduriacombinedwithhomocysteinemia;propionylcarnitine同型半胱氨酸血症(homocysteinemia)是一种相对常见的代谢性疾病,是导致儿童神经精神损害的一个重要原因,病因复杂,与遗传,环境,营养等多种因素有关,可导致心,脑,血管,肾脏及眼等多脏器损伤_】一1.该症于1962年首次报道31,Carson,Spaeth,Schimke分别在智力落后患者中发现了同型半胱氨酸血症l4l5】.根据新生儿筛查及临床检测同型半胱氨酸血症结果,同型半胱氨酸血症I型发病率约为1/335000.不同国家与地区发病率不同,北爱尔兰为1/65000,
12、日本为l/900000t.而一些研究机构对高危人群进行了筛查,同型半胱氨酸血症I型发生率很高,在智力低下患者中同型半胱氨酸血症I型的发生率高达1/300至1/450061.我国尚缺乏有关儿童同型半胱氨酸血症的群体研究资料,仅见少数报告I7.四十余年来很多国家和地区开展了同型半胱氨酸血症的新生儿筛查.通常采用细菌抑制法(bacterialinhibitionassay,BIA)或液相串联质谱法(1iquidchromatographytandemmassspectrometry,LC-MSMS)测定干燥滤纸血液蛋氨酸浓度,间接筛查胱硫醚合成酶缺乏症所致同型半胱氨酸血症I型.迄今尚缺乏筛查同型半胱
13、氨酸血症的理想的新生儿筛查方法.1对象与方法1.1对象2000年1月至2007年12月来我院的原因不明的智力低下,运动障碍,癫痫,头痛等多种神经系统异常患儿799例,病型不明的甲基丙二酸尿症患儿126例;年龄3d18岁;男586例,女339例,男:女1.73:1;来自大陆29个省市.调查患儿营养发育状况,血液及常规化验,肝肾功能等,排除中枢神经系统感染,脑外伤,脑出血,中毒等疾病.1.2研究方法1.2.1血浆或血清总同型半胱氨酸,氨基酸测定血浆或血清总同型半胱氨酸测定采用荧光偏振免疫测定法(美国Abbott公司IMX型自动分析仪及同型半胱氨酸测定试剂盒),血浆或血清总同型半胱氨酸浓度>1
14、5Ixmol/L(正常对照4.4512.42lxmol/L)判断为同型半胱氨酸血症I7】.对于同型半胱氨酸血症患儿,采用液相串联质谱法(美国生物应用系统公司API3200型串联质谱仪,同位素内标购自美国CambridgeIsotopeLabs)检测血液游离氨基酸,酯酰肉碱谱”.1.2.2尿液有机酸分析采用气相色谱质谱ShimadzuGCMSQP2010联用分析仪进行样本分析,应用GCMSsolution软件工作站,先天代谢异常筛查诊断软件对色谱和质谱图进行化学诊断口2.2结果2.1单纯同型半胱氨酸血症799例原因不明的智力运动障碍等神经系统异常患儿中27例(3.38%)血液总同型半胱氨酸浓度显
15、着增高(15.93172.0mol/L),尿液甲基丙二酸,血液酯酰肉碱浓度正常,为单纯同型半胱氨酸血症.2.2甲基丙二酸尿症合并同型半胱氨酸血症126例甲基丙二酸尿症患儿中101例(80.16%)血液总同型半胱氨酸浓度显着增高(20.92328.55pmol/L),符合甲基丙二酸尿症合并同型半胱氨酸血症.78例患儿接受了外周血淋巴细胞MMACHC基因分析,存在MMACHC基因突变74例(94.87%),符合cblC型甲基丙二酸尿症.2.3免疫荧光偏振法,液相色谱法测定同型半胱氨酸浓度比较选取10个采用荧光偏振免疫法测得的不同总同型半胱氨酸浓度的患儿血清,应用高效液相色谱法检测总同型半胱氨酸浓度
16、,结果显示2种方法测得的结果有高度相关性(r=0.968,P<0.05).3讨论同型半胱氨酸是蛋氨酸代谢过程中的重要中间产物,于1932年由DeVgneaud发现l31.机体内同型半胱氨酸主要通过甲基化及转硫化两条途径转化I】.在引起同型半胱氨酸血症的病因中,蛋氨酸合成酶,亚甲基四氢叶酸还原酶,维生素B叶酸代谢障碍导致同型半胱氨酸至蛋氨酸转化障碍,患儿血液蛋氨酸浓度正常或降低,必须通过血液总同型半胱氨酸测定才能作出诊断.临床儿科杂志第26卷第12期2008年12月JClinPediatrVo1.26No.12Dec.2008总同型半胱氨酸测定是同型半胱氨酸血症诊断的重要手段,随着化学分析
17、技术的发展,血液同型半胱氨酸检测的灵敏度,精确性与效率不断改良,同型半胱氨酸血症的检出率逐渐提高.迄今,薄层色谱法,高效液相色谱分析,氨基酸分析,液相串联质谱,放射免疫,免疫荧光偏振分析,循环酶法等多种检测技术被用于同型半胱氨酸血症的诊断与筛查,各种方法有不同的优缺点f4l.免疫荧光偏振法是常用的临床检验技术,操作简单,成本低,精确度高,采用免疫荧光偏振测定法可以检测血清或血浆总同型半胱氨酸浓度,检测结果与高效液相法,循环酶法具有良好的相关性,适用于临床诊断l1t.关于同型半胱氨酸血症对心脑血管的影响,国内外已进行了大量研究,证实心脑血管疾病患者中同型半胱氨酸血症发病率很高,但是,对于儿童神经
18、系统疾病患者中同型半胱氨酸血症发生情况及临床表现,仍缺乏经验.1987年Abbott研究了63例同型半胱氨酸血症患者的智力,运动等中枢神经系统表现及维生素B敏感性,发现51%的患者有明显精神症状,平均智商(IQ)为80,应用维生素B无效的患者智商低于维生素B有效者【】5】.同型半胱氨酸血症不仅是动脉硬化的一个独立的危险因素,也是导致痴呆,抑郁症和精神分裂症的一个危险因素.本研究中,对799例原因不明的神经系统疾病患儿进行了临床与实验室研究,发现了27例(3_38%)同型半胱氨酸血症.提示血液总同型半胱氨酸应作为原因不明的神经系统疾病患儿病因分析的重要生化指标.27例患儿中除少数患儿维生素B,叶
19、酸缺乏外,多数病因不明,考虑为遗传性同型半胱氨酸血症,尚待进行基因分析等,以作进一步病因调查.同型半胱氨酸血症所致精神分裂症患者有显着性别差异,男性多于女性l18l.本研究发现的27例同型半胱氨酸血症患儿中男童l8例(66.67%),应高度注意远期精神分裂症的可能性.同型半胱氨酸血症是导致出生缺陷的一个危险因子,曾有研究证实孕妇同型半胱氨酸血症导致胎儿先天性心脏病,神经管畸形发生率增高【l91.因此,测定育龄期成人血浆总同型半胱氨酸,对于胎儿心血管病和出生缺陷的预防具有重要意义.甲基丙二酸尿症是我国先天性有机酸代谢异常中最常见的疾病,病因包括甲基丙二酰辅酶A?1015?变位酶缺陷及其辅酶(维生
20、素B)代谢缺陷.迄今已发现7种亚型,其中CblC,CblD,CblF3型为先天性维生素B代谢缺陷病,导致甲基丙二酸尿症合并同型半胱氨酸血症,CblC型为是最常见的类型.甲基丙二酸尿症合并同型半胱氨酸血症是甲基丙二酸尿症的主要临床表型,治疗方法及预后不同于单独甲基丙二酸尿症20,211,应及早进行鉴别诊断.本研究中,采用免疫荧光偏振测定法检测血清总同型半胱氨酸浓度,126例儿童甲基丙二酸尿症患儿中101例(80.16%)合并同型半胱氨酸血症,证明了血液总同型半胱氨酸检测的重要性.致谢:感谢上海交通大学附属新华医院,上海市儿科医学研究所,华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科,广州市妇婴医院,中国
21、生命关怀协会北京摩尔美康检测实验室,日本岛根大学医学部小儿科,日本札幌市卫生研究所等国内外同道的合作与帮助.参考文献:1王慕逖.氨基酸代谢障碍病M/左启华.小儿神经系统疾病.北京:人民卫生出版社,2003:444458.2顾学范.新生儿疾病筛查M.上海:上海科学技术文献出版社,2003:174180.3GerritsenT,VaughnJG,WaismanHA.TheidentificationofhomocystineintheurineJ.BiochemBiophysResCommun,1962,9:493496.4SpaethGL,BarberGW.Prevelanceofhomocys
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