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1、第一章药物分析：研究化学结构明确的合成药物或天然药物及其制剂的质量控制方法，也研究中药制剂和生物制品及其制剂有代表性的质量控制方法。药品非临床研究质量管理规定GLP；药品临床试验质量管理规范GCP药品生产质量管理规范GMP；药品经营质量管理规范GSP；中药材生产质量管理规范GAP人用药品注册技术要求国际协调委员会ICH药品标准的内涵包括：真伪鉴别、纯度检查和品质要求。决定了药品的安全性、有效性和质量可控性。、精确度 药典规定取样量的准确度和试验精密度。药典：记载药品质量标准的法典；国家监督、管理药品的技术标准；法律约束力。各国药典现行版本：ChO2010,EP7,USP34,JP16中国药典：
2、1953,63,77,85,90,95,00,05,10。ChP2010由一部、二部、三部及其增补本组成。 （一部）药材和饮片、植物油脂和提取物、成方制剂和单味制剂（二部）化学药品、生化药品、抗生素、放射性药品、药用辅料；（三部）生物制品内容分为:凡例、正文、附录正文每一品种项含：品名（包括中文名，汉语拼音名与英文名） 有机药物的结构式；分子式与分子量； 来源或有机药物的化学名称；含量或效价规定 处方；制法；性状；鉴别；检查； 含量或效价测定；类别；规格；贮藏； 制剂质量标准术语：凡例：为正确使用中国药典进行药品质量检定的基本原则。是对中国药典正文、附录及与质量检定有关的共性问题的统一规定。正
3、文:（药品标准）根据药物自身的理化与生物学特性，按照批准的来源、处方、生产工艺、贮藏运输条件等所制定的、用于检测药品质量是否达到用药要求并衡量其质量是否均一稳定的技术规定。附录：包括制剂通则、通用检测方法和指导原则。1药品名称：列入国家药品标准的药品名称-称为药品通用名称-不得作为药品商标使用。INN-国际非专利药名。药品中文名称：须按照中国药品通用名称(China Approved Drug Names，CADN)。2.制法：对药品生产制备的重要工艺和质量管理的要求。3性状：外观性状、溶解度、物理常数：熔点、旋光度、吸收系数等可反映药品纯度。4鉴别：根据药物的某些物理、化学或生物学特性进行的
4、试验，以判定药物的真伪。区分药物类别-一般鉴别试验；证实具体药物-专属鉴别试验。5检查：是对药物的安全性、有效性、均一性和纯度四个方面的状态所进行的试验分析6含量测定：方法：化学原料药-首选容量分析法、制剂-首选色谱法7制剂规格：系指每一支、片或其他每一个制剂单位含有主药的重量（或效价）或含量（%）或装量，即制剂的标示量。8检查方法和限度：原料药的含量-按重量计，制剂的含量限度-指标示量的百分含量表示时，范围95.0%-105.0%9标准物质：标准品：用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质，按效价单位(或g)计，以国际标准品进行标定.对照品：化学药品标准物质，按干燥品计算后使
5、用。对照药材对照提取物-中药检验。参考品-生物制品10精确度（1）称重和量取：由有效位数确定：0.1g可称取0.060.14g；2g1.52.5；2.01.952.05；2.001.9952.005。精密称定-准确至所取重量的千分之一；称定-百分之一；精密量取-移液管的精度要求；量取-量筒；约-不得超过规定量的10%；恒重-连续2次重量差小于0.3mg。空白试验-不加供试品或等量溶剂替代供试液药品标准制定的原则：科学性、先进性、规范性、权威性原料药的结构确证：1样品要求：纯度99.0%，杂质1000，毛细管柱5000；R1.5；内标法连续进样5次，A待测/A内的RSD5%；外标法连续进样5次，
6、A待测的RSD10%；测定方法：法一、毛细管柱顶空进样等温法(品种少，极性差异小的溶剂)；法二：毛细管柱顶空进样程序升温法(溶剂品种多，极性差异大)；法三：溶液直接进样法(采用填充柱或适宜极性的毛细管柱)计算法：内标法溶液颜色检查方法;溶液颜色是否正常可反映药物的纯度。溶液澄清度检查方法澄清度：是检查药品溶液的浑浊程度，可以反映药物中微量不溶性杂质的存在情况，是控制注射用原料药纯度的重要指标。第四章 药物的含量测定方法与验证定量分析方法：容量分析法，光谱分析法，色谱分析容量分析法：即滴定法，是将已知浓度滴定液由滴定管加到北侧药物溶液中直至反应完全，然后根据滴定液浓度和被消耗的体积按化学计量关系
7、计算出被测药物的含量.所用仪器简单，操作简便快速，方法耐用性高，测定结果准确(相对误差1.5重复性：连续5次进样，RSD2.0%拖尾因子T在 0.951.05.GC测定法：内、外、标准曲线法前处理的目的：满足所选用的分析方法对试样的要求。前处理方法分类：1不经有机破坏的分析方法：适用金属离子或待测元素易解离的药物.直接测定法：凡金属离子不直接与碳原子相连的含金属的有机药物或C-M键结合不牢的有机金属药物，在水溶液中客店里，因而不许有机破坏可直接测定.配位滴定法和氧化还原滴定法经水解后测定法：碱水解后测定法和酸水解后测定法经还原分解后测定法. 2经有机破坏分析方法：适用于金属原子与碳原子结合牢固
8、的药物以及大量生物基质中药物的测定：湿法：适用于含氮有机物分析的前处理.主要方法：凯氏定氮法(样品分解铵盐分解氨的固定反滴定)；硫酸-硝酸法；硫酸高氯酸法；硝酸-高锰酸钾法干法：适用于不易湿法破坏完全的有机物及不能用硫酸破坏的有机物.a高温炽灼法(5001000.分解效果好于湿法)；b氧瓶燃烧法仪器：磨口、硬质玻璃锥形瓶；铂丝吸收液：F水；氯水-NaOH；溴、碘-水-NaOHSO2饱和溶液；SH2O2；磷水原理：将分子中含有待测元素的有机药物在充满氧气的密闭燃烧瓶中充分燃烧，使有机结构部分彻底分解为CO2和水，而待测元素根据电负性的不同转化为不同价态的氧化物，被吸收于适当的吸收液中，以供待测元
9、素的检查和定量。药品分析方法的验证内容及内容表示方法：准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围、耐用性.1准确度：用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，以回收率表示1.原料药回收率=测得量/加入量*100%，测定36次，西药在98102%，中药在95105%.2.制剂的回收率=(测得量-本底量)/加入量*100%.2精密度：规定的测试条件下同一个均匀供试品经多次取样测定所得结果之间的接近程度.表示方法：偏差d，标准差SD，相对标准差RSD，至少对6次结果进行评价.验证内容：重复性(较短时间间隔内相同操作条件下由同一分析人员测定所得结果的精密度，需对9个测定结果进行评价)；中间
10、精密度(同一实验室，由于实验室内部条件的改变，所测得结果的精密度)；重现性(不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度)3专属性：在其他成分(如杂质，降解产物，辅料等)可能存在的条件下，采用的方法能准确测量出被测物的特性.4检测限(LOD)：试样中被测物能被检测出的最低浓度或量反应方法是否具备足够灵敏度，无须准确定量，只要指出高于或低于规定的浓度或量即可.一般以信噪比S/N=3时的相应浓度确定LOD值.5定量限(LOQ)：样品中被测物能被定量测定的最低量.以S/N=10时的相应浓度确定.6线性：在设计的范围内，测试结果与试样中被测物质的浓度或量有直接呈正比关系的程度.7范围：能达到一定精密度，准
11、确度和线性，测试方法适用的高低浓度或量的区间.8耐用性： 测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度.(1)定量分析法：RSD0.2%，回收率99.7100.3%.(2)UV法：RSD1%，回收率98102%，线性，A在0.20.7之间， 需5份浓度数据r 0.999，截距接近于0. (3)HPLC法： RSD2%，n为57，r 0.999，b0，回收率98102%.非定量分析方法：如鉴别、杂质的限度检查，需专属性，检测限，耐用性定量分析方法含量测定、含量均匀度、溶出释放度测定，需准确度、精密度、专属性、线性、范围、耐用性微量定量分析方法：如杂质的定量测定，需准确度、精密度、专属性、定量
12、限、线性、范围、耐用性。第五章体内药物分析血样中蛋白质的去除：加入与水混溶(1:13)的有机溶剂(乙腈、甲醇、丙酮、四氢呋喃等)加入中性盐(1:2)(饱和硫酸铵，硫酸钠，Mg2+，磷酸根，枸橼酸盐等)加入强酸(1:0.6)(10%三氯醋酸，65%高氯酸，5%偏磷酸)，可用煮沸分解或加碱中和沉淀法去除.加入含锌盐(1:2)及铜盐的沉淀剂酶解法(枯草菌溶霉素)尿样中缀合物的水解：常用酸水解，但酶水解选择性高，很少使用被测药物或共存物降解，故优先使用蛋白质分离，纯化与浓缩：液液萃取法(LLE)选择性高，乙醚，三氯甲烷选用溶剂要求a对被测组分溶解度大，沸点低，易于挥发浓缩；b与水不相混溶c无毒，化学稳
13、定，不易乳化.液固萃取法(LSE)a较少引入杂质，b消除了LLE中的乳化现象，c萃取率高d在组后洗脱中多采用水为溶剂系统，大大增强了安全性e处理样品速度快，并可在室温下操作.体内药物分析的特点:1体内样品需经分离与浓集，或经化学衍生化处理后才能进行分析，2对分析方法的灵敏度及专属性要求较高，3分析工作量大，测定数据的处理和结果的阐明比较繁杂定量分析方法的验证：(注：与药物分析方法验证的不同点)特异性：必须证明所测定的物质是原形药物或特定的活性代谢物，内源性物质和相应的代谢物及同时服用的其他药物不得干扰样品的测定.标准曲线和线性范围：必须至少6个浓度建立标准曲线，不许外延.建立标准曲线时应随行空
14、白生物样品，但标准曲线不包括零点.精密度与准确度：RSD8有机弱碱性药物及其盐类，PKb8-13用本法，PKb8-10时冰醋酸作溶剂PKb10-12冰醋酸与醋酐12醋酐。也可在冰醋酸中加入甲酸使滴定突跃增大2,溴量法（原料药：盐酸去氧肾上腺素 重酒石酸间羟胺）：分子中的苯酚结构，在酸性溶液中酚羟基的邻、对位活泼氢能与过量的溴定量的发生溴代反应，再以碘量法测定剩余的溴，根据消耗的硫代硫酸钠滴定液的量，即可算供试品含量。3紫外分光光度法及比色法 ：（制剂）利用分子结构中的酚羟基与铁离子络合呈色，测定盐酸异丙肾上腺素和盐酸多巴胺注射液；利用重氮化-偶合反应呈色，测定盐酸克伦特罗栓剂。4，亚硝酸钠法
15、5提取酸碱滴定法：游离出原药6，HPLC第八章 对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类（芳胺类）对氨基苯甲酸酯类：苯佐卡因，盐酸普鲁卡因，盐酸氯普鲁卡因胺，盐酸丁卡因等局麻药酰苯胺类：（水解后显芳伯胺特性）盐酸利多卡因，盐酸布比卡因，盐酸罗哌卡因，对乙酰氨基酚，醋氨苯砜理化性质:芳伯胺基（除盐酸丁卡因外，仲胺基）特性：显重氮化偶合反应。1.芳伯氨基：重氮化偶合反应；用NaNO2滴定可测含量，与芳醛缩合成Schiff碱；易氧化变色等。2.水解：因分子中有酯键，故易水解.水解反应速度快慢受光、热或碱性条件影响；盐酸丁卡因BABA，其余药物PABA3.弱碱性：叔胺氮原子，生物碱沉淀剂发生沉淀反应，非水溶剂滴定4.
16、溶解性：游离碱，油状液体或低熔点固体难溶于水，易溶于有机溶剂；盐酸盐白色结晶粉末，具一点的熔点，易溶于水和乙醇，难溶于有机溶剂5，重金属离子反应酰胺基上的N可在水溶液中与铜离子或钴离子络合，形成有色配位化合物沉淀，溶于氯仿呈色6，吸收光谱特性：苯环及相应取代基于脂烃胺侧链，有UV,IR行为。鉴别反应 1、重氮化-偶合反应Ar-NH2 -Hcl、/NaNO2重氮盐OH和-萘酚橙黄-猩红色沉淀.1直接法(苯佐卡因、盐酸普鲁卡因) 橙黄-猩红色沉淀。2间接法(盐酸丁卡因无芳伯胺基酸性条件乳白色沉淀)红色.2、三氯化铁反应（对乙酰氨基酚）：具酚羟基的芳胺类药物+FeCl3蓝紫色配合物3、与重金属离子的
17、反应a盐酸利多卡因的鉴别(具有芳酰胺结构):硫酸铜/碳酸钠试液蓝紫色配合物显黄色(溶于氯仿)/氯化钴/酸性溶液亮绿色细小钴盐沉淀b.盐酸普鲁卡因胺的鉴别(具有芳酰胺结构):浓过氧化氢/加热至沸羟肟酸 三氯化铁羟肟酸铁变紫红色，随即变为暗棕色至棕黑色.c.与汞离子反应：芳酰胺类，如盐酸利多卡因 ，硝酸汞/硝酸煮沸变黄色；对氨基苯甲酸酯类，如苯佐卡因：硝酸汞/硝酸煮沸变红色或橙黄色.4、水解产物反应：a.盐酸普鲁卡因(的鉴别)10氢氧化钠溶液白色(普鲁卡因)加热变为油状物；继续加热 蒸气(二乙氨基乙醇)能使润湿的红色石蕊试纸变为蓝色；加热至油状物消失放冷、加盐酸酸化白色(对氨基苯甲酸)能溶于过量的
18、盐酸.b.苯佐卡因(鉴别)氢氧化钠试液5ml 煮沸乙醇，加入碘试液/加热 黄色并发生碘仿臭气. 5、制备衍生物测熔点：a.盐酸利多卡因/盐酸布比卡因 三硝基苯酚 (滤过，用水洗涤沉淀后105干燥)三硝基苯酚利多卡因(mp. 228232)/ (80干燥)三硝基苯酚布比卡因(mp. 194).b.盐酸丁卡因 25硫氰酸铵溶液/5醋酸溶液 白色晶体，洗涤80干燥后得丁卡因硫氰酸盐( mp. 131 )。特殊杂质1盐酸普鲁卡因(对氨基苯甲酸) ：1杂质来源：水解产生对氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇 。结果导致注射液变黄、疗效下降、毒性增加。原料药及注射用灭菌粉末中杂质限量 ：0.5%。注射液中杂质限量 ：
19、 1.2% 2检查：（1）HPLC杂质对照品法。固定相：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：0.1%庚烷磺酸钠的0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH至3.0)-甲醇(6832)；检测波长：279；系统适用性试验：理论板数按对氨基苯甲酸峰计算不低于2000；盐酸普鲁卡因峰和对氨基苯甲酸峰的分离度应大于2.0 ；外标法以峰面积计算。（2）TLC法：硅胶H板，苯-HAc二甲氨基苯甲醛显色3有关物质和光解物检查：4-氨基-2-氯苯甲酸降解2，对乙酰氨基酚：1）乙醇溶液的澄清度与颜色2）有关物质：TLC，杂质斑点颜色，个数3 ）对氨基酚 与亚硝基铁氰化钠反应显蓝色，不得更深含量测定1亚硝酸钠滴定法
20、：原理：芳伯氨基药物在酸性溶液中与亚硝酸钠定量反应，生成重氮盐，用永停法电位法或内指示剂法外指示剂法（KI-淀粉） 指示反应终点。 条件A.加入适量溴化钾加快反应速度，增加NO+浓度B.加入适量盐酸加快反应速度C.反应温度越高反应越快，但温度高时重氮盐分解加快，HNO2也会挥发D.滴定速度不宜太快，滴定管尖端插入液面下滴定。示例8-5 盐酸普鲁卡因的含量测定： 取本品约0.6g，精密称定，照永停滴定法，在1525，用亚硝酸钠滴定液滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于27.28mg的C13H20N2O2HCl。永停滴定法：铂铂电极系统。用亚硝酸钠液滴定，终点前，溶液中无亚硝酸，
21、线路无电流，电流计指针零。终点时溶液中有微量亚硝酸存在，电极即起氧化还原反应，线路中有电流通过，此时电流计指针突然偏转，不再回复，即为终点。2非水滴定法(盐酸丁卡因、盐酸利多卡因、盐酸妥卡因：三者结晶紫显色蓝绿 盐酸布比卡因：萘酚苯甲醇显色绿色)滴定前滴加醋酸汞溶液，以除去氢卤酸的干扰非水滴定法中常见酸根的影响及其消除方法氢卤酸根：算性强，无法完全滴定，消除方法：加入氯化汞的冰醋酸溶液。硝酸根：滴定产生硝酸，会氧化显色剂影响显色剂显色，消除方法：改用电位法滴定。比较直接滴定法和两部滴定法测定阿司匹林含量优缺点：直接滴定法：阿司匹林中性乙醇溶解后其中的羧基和氢氧化钠反应，酚酞指示终点。快速简便，
22、不能排除水杨酸干扰。两部滴定法：先中和酸性杂质和羧酸，然后定量加入过量的氢氧化钠，定量与酯键反应，剩余的用酸滴定至终点即可，可消除水杨酸干扰，但操作较麻烦。举例说明芳香胺类药物的含量测定方法芳香第一胺的重氮化偶合，硝酸银沉淀反应，生物碱沉淀剂的沉淀反应。亚硝酸钠滴定：酸性条件生成重氮盐，电位法指示终点，亚硝酸钠为滴定液。非水滴定：与高氯酸滴定液中的中和反应（先加氯化汞）高氯酸滴定液，电位法或结晶紫指示终点。第九章 二氢吡啶类药物二氢吡啶类理化性质：1二氢吡啶环的还原性，2硝基的氧化性，3二氢吡啶环氨基质子解离性，4稳定性，光化学反应5旋光性，6吸收光谱特性鉴别反应：1亚铁盐反应：硝基氧化性红棕
23、色氢氧化铁沉淀2氢氧化钠试液：药物丙酮溶液橙红色 （鉴别硝苯地平、尼群地平、尼索地平）3沉淀反应;与金属盐形成沉淀HgCl白色 碘化铋甲 橙红色4重氮化偶合反应：苯环硝基在酸性下被锌粉还原为芳伯氨基，可用重氮化偶合反应鉴别5分光光度法：紫外红外有关物质检查：分子内部因发生光化学歧化作用，降解为硝苯吡啶衍生物及亚硝苯吡啶衍生物，大多采用HPLC法，亦分为对照品法和自身对照法.含量测定;铈量法：利用还原性，以Ce(SO4)2为标准溶液的滴定法，Ce4+变为Ce3+。邻二氮菲为指示液，强酸条件，橙红色消失第十章 巴比妥及苯并二氮杂坐类镇静催眠巴比妥类药物分析主要性质：环状酰胺类镇静催眠药基本母核：丙
24、二酰脲基团决定共性.取代基决定个性.性质：酮式烯醇式互变.弱酸性，可用于该类药物的分离，鉴别，检查和含量测定与金属离子反应：专属性不强，用于鉴别和含量测定.A与银盐反应：在Na2CO3溶液中，最初生成白色沉淀，振摇后可溶解，之后生成白色沉淀，不再溶解.B与铜盐反应：在吡啶溶液中生成烯醇式异构体，并与铜形成稳定的配合物，巴比妥类呈紫色，含硫巴比妥呈绿色.C与汞盐呈白色沉淀(氨试液中溶解)D、与钴盐反应：无水条件下与钴盐在碱性溶液中生成紫堇色配合物.E与香草醛反应：丙二酰脲中的氨与香草醛在弄硫酸存在下缩合，生成棕红色产物.显微结晶：巴比妥为长方形结晶，苯巴比妥在开始结晶时呈现球形，后变为花瓣形.用
25、于同类或不同类药物鉴别，或生物样品中微量药物的检验.水解反应：有酰亚胺结构，与碱液共沸即水解，释放出氨气（鉴别戊巴比妥和巴比妥）紫外吸收特征（巴比妥240nm、硫巴比妥287、238nm）薄层色谱 鉴别试验:一、丙二酰脲类鉴别试验：银盐反应（白色沉淀），铜盐反应（紫色或紫色沉淀）.二、测定熔点.三、特征基团反应.1、利用不饱和取代基的鉴别试验：a与碘试液反应：棕黄色应在5min内消失.b与高锰酸钾反应：生成棕色的二氧化锰.2、利用芳环取代基的鉴别试验：a硝化反应，生成黄色硝基化合物.b与硫酸亚硝酸钠反应，生成橙黄色产物并随即变为橙红色c、与甲醛硫酸反应生成玫瑰红色产物.3、硫元素反应：在NaOH中与铅离子反应生成白色沉淀，加热后生成黑色硫化铅.四、IR特殊杂质检查苯巴比妥.酸度检查，甲基橙不得显红色（控制苯基丙二酰脲）.乙醇溶液澄清.中性或碱性物质检查（2-苯基丁酰脲、2-苯基丁酰胺不溶于氢氧化钠但溶于乙醚），提取重量法测杂质含量.苯巴比妥含量测定：银量法、溴量法、酸碱滴定法、UV
