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1、第一章 植物组织培养实验室构建,组织培养实验室设计常用设备和器材配置附：器皿的选择与清洗附：组培室的卫生与灭菌,第一节：组织培养实验室设计,主要内容：实验室的设计仪器设备和器皿用具配置,（一）设计规模和原则1.设计规模：取决于工作的目的。以工厂化生产为目的；以科研为目的；2.设计原则：1）.保证无菌操作：植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件，需要一定的环境、设备、器材和用具。2）.工作方便：按组织培养程序来没计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。3）.培养条件：人工控制温度、光照、湿度等。,一、实验室设计,（二）、组培实验室组成：,标准组织培养室包括:药品区洗涤区制备区灭
2、菌区储放区无菌操作区培养区,可以根据自己的实际条件进行合并,准备室,分区：药品区、洗涤区、制备区、灭菌区、储放区主要任务：1.药品的贮备、称量、溶解、配制、培养基分装。2.器具的洗涤、干燥、保存、培养基的灭菌等。主要设备：药品柜、防尘橱（放置培养容器）、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计、水池、操作台、高压灭菌锅、干燥灭菌器（如烘箱）及常用的培养基配制用玻璃仪器.详见下图,酸度计,立式高压自动灭菌锅,主要任务：主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。主要设备：紫外光源、超净工作台、消毒器、酒精灯、接种器械（接种镊子、剪刀、解剖刀、接
3、种针）等。,无菌操作室（接种室）,无菌操作室,超净工作台,无菌操作,无菌操作,无菌操作,无菌操作,无菌操作,无菌操作,接种室宜小不宜大，一般78平米，要求地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑，易于清洁和消毒。配置拉动门，以减少开关门时的空气扰动。接种室要求干爽安静，清洁明亮。在适当位置吊装12盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。最好安装一小型空调，使室温可控，这样可使门窗紧闭，减少与外界空气对流。接种室应设有缓冲间，面积1m2为宜。进入无菌操作室前在此更衣换鞋，以减少进出时带入接种室杂菌。缓冲间最好也安一盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。,培养室：是将接种的材料进行培养生长的场所。大小：根据需要培养架的大小
4、、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。高度比培养架略高为宜，周围墙壁要求有绝热防火的性能。,培养室：,主要设备：培养架（控温控光控湿）、摇床、培养箱、紫外光源等。培养材料放在由金属制成培养架上培养。培养架一般设5层，最低一层离地高约lOcm，其他每层间隔30cm左右，培养架高17m左右。其长度根据日光灯长度而设计，如采用40W日光灯，则长I3m，30W的长lm，宽度一般为60cm。培养室最重要的因子是温度，一般保持在2027左右，具备产热装置，并安装窗式或立式空调机。,实验室培养架,实验室培养架,恒温摇床,由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度，最好不同种类有
5、不同的培养室。室内湿度也要求恒定，相对湿度以保持在70%80%为好，可安装加湿器。控制光照时间可安装定时开关钟，一般需要每天光照10-16h，也有的需要连续照明。现代组培实验室大多设计为采用天然太阳光照作为主要能源，这样不但可以节省能源，而且组培苗接受太阳光生长良好，驯化易成活。在阴雨天可用灯光作补充。,细胞学实验室 该室用于对培养物的观察分析与培养物的计数等。主要设备：双筒实体显微镜、显微镜、倒置显微镜等。小型仪器设备有：分注器、血球计数器、移液枪、过滤灭菌器、电炉等加热器具、磁力搅拌器、低速台式离心机等。,显微镜,显微镜,第二节 常用设备和器材,一高压蒸汽灭菌锅：用于进行培养基和器械用具的
6、灭菌。1种类：小型手提式高压灭菌锅、大型立式的或卧式的高压灭菌锅 2使用方法和原理：小型手提式高压灭菌锅：把分装好的培养基及所需灭菌的各种用具、蒸馏水等，放入高压灭菌锅的消毒桶内，将外层锅内加水至水位线。盖好锅盖，上好螺丝，接通电源升温。待锅内温度达100。C（0.05kgf/cm2或0.005MPa）左右时，打开排气阀排净锅内冷空气，然后关闭排气阀，继续加热至温度达到121。C（1.05kgf/cm2或0.103MPa）时，维持2030min即可切断电源，让锅内气压自然下降，当压力降到零点后，打开排气阀，排出剩余蒸汽，再打开锅盖取出培养基及灭菌物品。3注意事项：1）灭菌时，锅内冷气必须排尽，
7、否则会影响灭菌效果。当压力达到1.05kgf/cm2或0.103MPa时，应注意维持时间，时间过长会破坏培养基的化学成分，时间短则达不到灭菌效果。2）锅内灭菌物品不能装得太满，要留有30%的空间。大型立式的高压灭菌锅：,卧式灭菌锅,立式高压自动灭菌锅,二、净化工作台,工作原理：净化工作台一般由鼓风机、滤板、操作台、紫外光灯和照明灯等部分组成。根据风幕形成的方式，可分为垂直式和水平式两种。超净工作台的工作原理是：鼓风机送入的空气经过细菌过滤板除去微生物后，再流过工作台面，并在操作人员和操作台之间形成风障，使杂菌不能进入，形成一个无菌的工作面。优点：是操作方便自如，比较舒适，工作效率高，准备时间短
8、。开机10分钟即可操作，可进行长时间使用。,超净工作台,三接种工具：常用的有双筒实体显微镜、镊子、剪刀、解剖刀、酒精灯等。四培养设备：常用的有空调机、定时器、温度控制器、增湿和去湿机、培养瓶、培养架、摇床或旋转床、日光灯、光照培养箱等。五化学实验及分析设备：天平、酸度计、蒸馏水器、烘箱、电炉、药品柜、冰箱、废污物桶等。六培养物细胞学观察设备：主要包括显微观察设备、组织切片染色用设备、照相冲洗设备。七.微孔过滤器（细胞过滤器）：激素用于灭菌。,附1：玻璃器皿的选择与清洗,一玻璃器皿的选择：培养用的玻璃器皿：试管、三角瓶、培养皿、果酱瓶等等；显微镜下观察用的：细胞微室、载玻片、培养皿等。,二玻璃器
9、皿的清洗：1洗涤剂：肥皂、洗洁精、洗衣粉和铬酸洗涤剂。一般用洗衣粉即可。2新购置的玻璃器皿由于它们或多或少含有游离碱性物质，使用前先用1%稀盐酸内浸泡一夜，然后用肥皂水洗净，清水冲洗，最后用蒸馏水冲淋一便，干后备用。3对已被霉菌等杂菌污染的玻璃器皿则必须现在121高压蒸汽灭菌30分钟后再清洗。4洗净的玻璃器皿应透明发亮、内外壁水膜均匀，不挂水珠。,附2、组培室的卫生与灭菌,一、灭菌用品、用具：2%新洁尔灭、高锰酸钾、甲醛、70%酒精、喷雾器、水桶、工作服、口罩和手套二、灭菌方法1、打扫卫生。2、地面、墙壁和工作台的灭菌：(1)配方:取新洁尔灭原液20ml，加水980m1，配成2%新洁尔灭溶液。
10、(2)方法:将配好的2%新洁尔灭溶液倒入塑料桶内。把喷雾器的主体插入溶液中，并加压，握着喷雾器的喷杆进行均匀地喷雾。在喷房顶时，要特别小心，防止药液雾滴掉入眼晴。,3、无菌室和培养室的灭菌（用甲醛和高锰酸钾熏蒸）（1）配方:每立方米空间用甲醛l0ml加高锰酸钾5g的配比液进行熏蒸。（2）方法:首先房子要密封。然后在房子中间放一玻璃器皿，将称好的高锰酸钾放入玻璃器皿内，再把已称量的甲醛溶液慢慢倒入，完毕，人迅速离开，并关上门，密封3天（3）3天后，开启房间，搬走玻璃器皿废液，搞好地面卫生（4）在己经熏蒸的房间里，用70%酒精纱布擦洗培养架、玻璃台面及工作台,实验安排：07生物（1）：双周星期二、14-21：00 班长：电话：学习委员：电话：第一组：1-20 组长：电话：第二组：21-40 组长：电话：第三组：41-59 组长：电话：07生物（2）：单周星期二、14-21：00 班长：电话：学习委员：电话：第一组：1-20 组长：电话：第二组：21-40 组长：电话：第三组：41-57 组长：电话：实验准备：每次实验第一个小组，依次循环，每次安排4-5人，具体人员由小组长安排。准备时间：星期二上午：约定卫生安排：每次实验最后一个小组，依次循环，具体人员由小组长安排。,作业：实验室的卫生与灭菌 方法,
