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1、第二节 尿液化学检查(2),授课教师:任林,医学检验教研室,四、酮体检查,酮体是机体脂肪氧化代谢产生的中间产物，当糖代谢发生障碍、脂肪分解增多、酮体产生速度超过机体组织利用速度时，可出现酮血症，酮体血浓度一旦超过肾阈值，可产生酮尿。,丙酮（CH3COCH3）乙酰乙酸（CH3COCH2COOH）-羟丁酸（CH3CH（OH）CH2COOH）,【酮体检测】,原理：膜块中主要含有亚硝基铁氰化钠，可与尿液中的乙酰乙酸、丙酮产生紫色反应。方法类别：试带法、Lange法、Rothera法、改良Rothera法、片剂法。,1.亚硝基铁氰化钠法,2.Gerhardt法：原理：高铁离子与乙酰乙酸的烯醇式基团发生螯
2、合，形成酒红色的乙酰乙酸铁复合物。,评价：本法只测定乙酰乙酸，与-羟丁酸、丙酮不起反应。,检测前:丙酮具有挥发性，乙酰乙酸在菌尿中会被细菌降解，因此应使用新鲜尿液标本并尽快检测。检测中：试带应放在阴凉、干燥处，注意使用效期，并坚持室内质控。检测后：审核报告。,【质量保证】,【参考值】定性：阴性 定量：健康人尿中酮体含量甚微，酮体（以丙酮计）170420mg/L；乙酰乙酸20mg/L。,糖尿病酮症酸中毒：早期诊断与鉴别诊断。,非糖尿病性酮症者：如应激状态、剧烈运动、饥饿、呕吐、严重腹泻等。,【临床意义】,治疗监测：糖尿病酮症酸中毒早期的主要酮体成分是-羟丁酸，很少或缺乏乙酰乙酸，此时测得结果可导
3、致对总酮体量估计不足。在糖尿病酮症酸中毒症状缓解之后，-羟丁酸转变为乙酰乙酸，反而使乙酰乙酸含量比初始急性期增高，易对病情估计过重。,其他,氯仿、磷等中毒或全身麻醉后：尿酮体可阳性。,服用双胍类降糖药：如降糖灵等，可出现尿酮体阳性。,新生儿出现尿酮体强阳性，应怀疑为遗传性疾病。,五、胆红素、尿胆原和尿胆素检查,尿中胆色素包括胆红素（bilirubin）、尿胆原(urobilinogen)及尿胆素(urobilin)，俗称尿三胆。由于送检的多为新鲜尿，尿胆原尚未氧化成尿胆素，故多查前两者，俗称尿二胆。,胆红素,未结合胆红素（UCB),结合胆红素(CB)：与葡萄糖醛酸结合,胆红素,尿胆原（UBG)
4、,排入肠腔,无色UBG 黄色的尿胆素,空气氧化,光线照射,从粪便排出,粪胆原,结合胆红素,胆红素,【检测方法】,重氮法：试带法多采用此原理。,氧化法,尿胆原检测：Ehrilich醛反应尿胆素测定：Schleisinger法,【质量保证】,检测前：标本必须新鲜，以免胆红素在阳光照射下成为胆绿素。为提高尿胆原阳性检出率，可于检测前嘱患者口服少量碳酸氢钠，以碱化尿液收集午后2-4h尿标本（正常人尿胆原排出量每天波动很大，夜间和上午量少，午后迅速增加，在午后2-4时达最高峰；同时尿胆原的消除率与尿pH相关）。,检测中：应规范化操作，作好2种水平室内质控，试带应放阴凉干燥处，密封避光保存，注意使用效期。
5、检测后：结合临床，审核报告。,尿液中含高浓度维生素C和亚硝酸盐时，抑制重氮反应使尿胆红素呈假阴性。当患者接受大剂量氯丙嗪治疗或尿中含有盐酸苯偶氮吡啶的代谢产物时，尿胆红素可呈假阳性。,【干扰因素】,尿液中一些内源物质如卟胆原、吲哚等可使尿胆原检查结果出现假阳性，一些药物（如吩噻嗪等）也可使尿胆原出现假阳性。假阴性与尿中存在大量维生素C或长期服用广谱抗生素抑制肠道菌群等有关。,【参考值】胆红素定性：阴性尿胆原定性：阴性或弱阳性（1：20稀释后阴性）尿胆素定性：阴性,【临床意义 主要用于黄疸的诊断和鉴别诊断,表1 正常人及不同类型黄疸实验室鉴别,六、血红蛋白检查,正常人血浆中游离血红蛋白与珠蛋白结
6、合，不能从尿液中排出。当血管内溶血，RBC破坏，HB释放入血，超过珠蛋白的结合能力，游离血红蛋白从尿液中排出。特点：外观呈浓茶色、红葡萄酒色或酱油色，隐血试验阳性。,【检测方法】：1.试带法：原理：血红蛋白分子中含有血红素基团，具有过氧化物酶样活性，能催化过氧化氢作为电子受体使色原氧化呈色，借以识别微量血红蛋白的存在，其呈色深浅与血红蛋白含量成正比。,评价：操作简便、快速，可作为尿Hb的筛检试验。假阳性：尿中含对热不稳定酶、尿液被氧化剂污染或尿路感染时某些细菌产生过氧化物酶。假阴性：尿中含大剂量维生素C或其他还原物质、甲醛过量、大量亚硝酸盐。,原理：与试带法反应原理一致。常用方法：邻甲苯胺法、
7、匹拉米洞法等。评价：操作简单、但试剂稳定性差，特异性低。假阳性：尿中有铁盐、硝酸、铜、锌、碘化物等或有过氧化物酶或其他对热不稳定酶。,2.化学法：,3.免疫法：原理：采用免疫胶体金法测定原理。评价：操作简便、灵敏度高、特异性强、克服以上两法缺点，可为确证试验。,【质量保证】：检测前：尿标本应新鲜。检测中：做好2种水平的室内质控。检测后：审核报告。,【参考值】阴性,RBC破坏：生物因素：动植物所致溶血：微血管性溶血性贫血：服氧化剂药物：免疫因素：,【临床意义】：有助于血管内溶血疾病的诊断。,七.亚硝酸盐检测,当尿路受大肠埃希氏菌感染时，可将硝酸盐还原成亚硝酸盐，并将膜块中的对氨基苯砷酸重氮化而成
8、重氮盐，后者再与N-萘基乙二胺偶联，使膜块呈现黄至红色的变化。,【检测原理】：,1.尿亚硝酸盐阳性检出率取决于三个条件：1)感染细菌是否含有硝酸盐还原酶 2)尿液中含适量硝酸盐 3)尿液在膀胱中停留时间4h,【方法学评价】,2.灵敏度：0.3-0.6mg/L,3.假阴性：含大量维生素C、使用利尿剂、不能正常饮食的患者，体内缺乏硝酸盐，即使有细菌感染，也可出现阴性。4.假阳性：陈旧尿、尿含非那吡啶。,检测前：宜使用晨尿标本，及时送检，尽快测定。检测中：做好2种水平室内质控，试带贮存应干燥、避光、注意有效期。检测后：审核报告，综合分析。,【质量保证】：,【参考值】：阴性。,【临床意义】,主要用于尿
9、路感染的快速筛检。泌尿道感染常为阳性。结合显微镜检查和细菌培养可提高对泌尿道感染的确诊率。,八.白细胞酯酶,粒细胞胞含有酯酶，先与试纸带吲哚酚酯反应生成吲哚酚，后者与重氮盐形成紫红色缩合物。其颜色深浅与细胞多少呈比例关系。吲哚酯酚 酯酶 吲哚酚+重氮盐氧化缩合 紫色化合物,【原理】：白细胞酯酶法,1.灵敏度与特异性：灵敏度5-15/l；特异性较强。本法主要检测粒细胞酯酶，不与淋巴细胞反应。2.假阳性：发生率较高，主要见于尿标本被阴道分泌物污染，也可见尿中含甲醛、大量胆红素、非那吡啶等。3.假阴性：高比重尿，尿中含头孢菌素、庆大霉素、维生素C等。,【方法学评价】,【质量控制】,检测前：尿液标本必
10、须新鲜，留尿后应立即测定，以免白细胞破坏，导致干化学法与镜检结果差异过大；检测中：规范操作和质控；检测后：结合临床，综合分析酯酶、亚硝酸盐结果，必要时进行显微镜镜检，以提高尿路感染诊断的可靠性。,【参考值】：阴性,【临床意义】用于诊断泌尿道感染。肾移植后发生排斥反应时，尿中以淋巴细胞为主，因此白细胞酯酶检测呈阴性。此时，因以镜检白细胞结果为准。,九、维生素C检查,【原理】：采用还原法 VitC具有1,2-烯二醇还原性基团，在酸性条件下，能将氧化态粉红色的2,6-二氯酚靛酚染料还原为无色的2,6-二氯二对酚胺。发生由绿或深蓝至粉红的变化，呈色深浅与维生素C含量成正比。,【方法学评价】,1.灵敏度
11、和特异性：试带法只能检测还原型抗坏血酸，灵敏度一般为50-100mg/L。2.假阳性：见于龙胆酸、L-多巴或尿pH大于4.0时的内源性酚及巯基化合物、半胱氨酸和硫代硫酸钠等。3.假阴性：碱性尿液（因维生素C易分解）。,【质量保证】检测前：无需特殊处理。检测中：作好质控。检测后：仔细审核、综合分析维生素C是否对隐血/血红蛋白、葡萄糖、亚硝酸盐等结果产生影响。,【参考值】：阴性,(,干化学法检测Vit C采用还原法，尿液中Vit C的含量的高低对隐血/血红蛋白、胆红素、葡萄糖、亚硝酸盐等可产生负干扰，检测Vit C在于提示其他检测项目的准确性，防止假阴性出现。,【临床意义】,尿液化学检查教学视频,
12、尿试带化学检查内容,人绒毛膜促性腺激素检查,十一、其他化学成分检查,人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin,hCG）:是由胎盘合体滋养层细胞分泌的一种具有促进性腺发育的糖蛋白激素，其对促性腺激素受体具有高度的亲和性。,妊娠1周时，HCG即可迅速升高；受孕7天后，可用ELISA法检出尿液中的HCG；第8-10孕周达到高峰；至孕期第4个月始降至中等水平，并一直维持到妊娠末期。（图1）,正常孕妇HCG的变化：,图1 正常妊娠妇女血清中HCG平均值,HCG结构：,由亚基和亚基组成的糖蛋白激素；,单个亚基不具有生物活性，当连接成完整化合物时始具活性，分子量约为4.7
13、万；,亚基不具特异性，其氨基酸数量及其排列顺序与FSH、LH、TSH的亚基几乎相同。亚基具有特异性。,其主要功能就是刺激黄体，有利于雌激素和黄体酮持续分泌，以促进子宫蜕膜的形成，使胎盘生长成熟。,HCG功能：,1.酶联免疫吸附试验（ELISA）原理：双抗体夹心法。评价：操作简便，灵敏度高，可半定量，特异性高，为HCG检查的筛检试验。,【检测方法】,2.单克隆抗体胶体金试验原理：,胶体金标记鼠抗人-hCG单抗,羊抗人hCG抗体,羊抗鼠IgG抗体,免疫胶体金法,阴性,对照阳性,判读结果：阳性：试带可显示上、下两条紫红色线条；阴性：标本只显出上边一条紫红色线。评价：操作简便快速、结果可靠、特异性强、
14、灵敏度高、是当前公认最理想的早早孕诊断法。,3.胶乳凝集抑制试验原理:(略)评价：操作简便，灵敏度低，适合大批标本检查，但因特异性差，不能定量，目前已少用。,4.检孕卡法：原理：同胶乳凝集抑制试验评价：一般早孕诊断，灵敏度低。,5.放射免疫试验（RIA）原理：竞争抑制。评价：灵敏度高、可半定量，检测血清hCG准确稳定，但操作繁琐，且存在放射性污染，不适用于临床常规检查。,6.电化学发光免疫法：（ECLIA)原理：(略)评价：操作简便、快速、灵敏度高，可定量检测。,【质量保证】：检测前：宜采集首次晨尿检测，否则尿液稀释可呈假阴性；严重血尿、菌尿标本不宜测定hCG；育龄期妇女应避开排卵期LH增高引起的干扰。检测中：每次测定应设置阴、阳性对照。检测后：认真审核报告。,【参考值】：非孕妇健康人：阴性。半定量：2ng/L。正常妊娠妇女：阳性,【临床意义】,诊断早期妊娠 流产诊断和监测 先兆流产 不全流产异位妊娠的诊断滋养细胞肿瘤诊断与治疗监测肿瘤标志物,
