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1、1,山西家族性乙肝HLA-DRB1和HBV基因型与临床关系的研究,山 西 医 科 大 学 第 一 医 院张 缭 云,2,目前，全球约有4亿人感染乙肝病毒(HBV)，我国占1/3，达1.2亿，其中7080以上具有家庭聚集性，包括家庭内水平传播和垂直感染。临床观察到生活在同一家庭中有血缘关系的家庭成员其感染HBV与否以及感染HBV后的转归也有所不同。,第一部分 研究背景和意义,宿主因素,病毒因素,HBV感染的转归,环境因素,4,一、宿主因素,研究发现人类白细胞抗原（human leukocyte antigen HLA）是目前所知的最具有高度多态性的、与疾病有明确关系的遗传系统。HLA-、和类基因
2、。研究的报道HLA-类基因（DRB1）与HBV感染感染结局有关，且不同地区、不同种族HLA-（DRB1）基因型报道不同。,5,山西地区张德梅等报道了该区汉族正常人群HLA-DRB1位点的等位基因多态性分布以HLA-DRB1*15、HLA-DRB1*09、HLA-DRB1*12、HLA-DRB1*04、HLA-DRB1*07常见，而乙肝人群的HLA-DRB1基因多态性分布以及与HBV易感性和抗性如何？尚无研究。,6,乙肝家庭成员中正常人与HBV感染者其HLA-DRB1基因型分布是否有差异？家族性乙肝患者其抗病毒治疗的疗效是否与HLA-DRB1基因型有关？目前尚未见有关报道。,7,二、病毒因素,目
3、前可将HBV分为AH共8个基因型。认为HBV基因型与临床疾病谱、疾病的进展以及抗HBV治疗反应等方面可能相关：在B、C型为主的地区，C型与严重肝病相关。山西省乙型肝炎的基因型以及占绝大多数乙肝比例的家族性乙肝基因型的分布及其与临床类型关系如何？尚不清楚。,8,三、抗病毒治疗,抗病毒是慢乙肝治疗的关键，药物有干扰素和核苷类似物。有学者报道a干扰素治疗慢乙肝无应答与HLA-DRB1*04呈正相关，与HLA-DRB1*0301，HLA-DRB1*0505呈负相关。还有研究发现，HLA-A2，HLA-CW1，HLA-DRB14，HLA-DRB4与慢性乙型肝炎患者服用拉米呋啶疗效可能有关联，同时临床观察
4、发现，同一家族中的不同患者使用相同的抗病毒药物后，其临床疗效也有不同，我们推测抗病毒疗效可能也受免疫因素的影响。,本研究以具有共同遗传背景的家族性乙肝人群为研究对象，首先进行临床流行病学调查，继之进行了HLA-DRB1基因多态性与山西地区家族性乙肝的预后和抗病毒疗效的相关性研究，从宿主方面阐述了HLA-DRB1基因位点分布与家族性乙肝的相关性；然后进行了HBV基因型与家族性乙型肝炎相关性以及家族性乙型肝炎抗病毒近期疗效关系的研究，从病毒方面阐述了HBV基因型与家族性乙型肝炎相关性，为家族性乙型肝炎预后以及抗病毒的疗效的判断提供分子生物学水平的理论依据。,10,第二部分 研究内容,11,诊断标准
5、,病毒性肝炎：病毒性肝炎防治方案家族性乙肝：指HBV感染者的母亲或（和）父亲HBV标志物阳性以及同胞中至少有一人为HBV标志物阳性者。排除标准：家族性乙肝家庭中的所有成员均排除经输血或血制品途径引起的HBV感染，排除合并有其它肝炎病毒感染。,12,抗病毒疗效判断标准:完全应答、部分应答有效 无应答 无效,13,关键技术,HLA-DRB1基因多态性检测 聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针技术（PCR-SSO）HBV基因分型 聚合酶链反应-限制片段长度多态性（PCR-RFLP）,14,聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针技术（PCR-SSO）与流式细胞技术,15,包被探针的磁珠,每个样本DNA与
6、磁珠上探针杂交情况不同，可以有不同的荧光信号值，当磁珠通过Luminex200流式仪时，磁珠表面上的荧光特征被扫描、识别，测定磁珠的荧光信号，用相应的软件进行分析，得出HLA分型结果。,聚合酶链反应-限制片段长度多态性（PCR-RFLP）,17,筛选符合家族性乙肝的家庭77个进行流行病学，其中母亲单方HBsAg阳性的家庭55个，父亲单方HBsAg阳性的家庭22个；检测的子女数共计159人，男性106人，女性53人。年龄最小者3岁，最大者62岁，平均年龄31岁。,一、山西地区家族性乙肝临床流行病学调查,第三部分 研究结果,18,P0.05,P0.05,P0.05,表1 父母不同HBsAg携带情况
7、、不同地域及不同性别的子女HBsAg检测结果,2=5.24,2=22.63,2=1.52,P0.05,表2 父亲HBsAg阳性与母亲HBsAg阳性其子女不同转归的比较,2=5.40，,20,二、HLA-DRB1基因多态性与家族性乙肝预后及阿德福韦酯抗乙肝病毒近期疗效相关性研究,研究对象分组：健康对照（CON）组41例慢性无症状携带（ASC）组80例慢性乙型肝炎（CHB）组107例肝硬化（LC）组65例肝癌（HCC）组2例（略去）,表1 ASC、CHB、LC和CON组HLA-DRB1基因频率比较,注：、均代表其p0.05,HLA-DRB1*07等位基因频率在CHB组及LC组(13.1%,15.4
8、%)明显高于正常对照组（4.9%），而ASC组、CHB组及LC组之间两两比较无统计学差异,22,表2 ASC、CHB及LC组间年龄比较,进一步进行两两比较，ASC组及CHB组与LC组间差异有统计学意义。（t值分别为-8.931和-6.208，P0.01）,23,表3 HLA-DRB1等位基因频率与阿德福韦酯疗效相关性分析,附：资料完整的56例患者，基因型为C,阿德福韦酯治疗半年,24,三、HBV基因型与家族性乙型肝炎相关性及抗病毒近期疗效研究,25,136例家族性乙型肝炎感染者进行HBV基因型检测，其中C型为122例，B型为10例，B+C混合型为2例,另有2例未检测出基因型。,基因型的分布情况
9、,26,对其中36对父或母与子、女基因型进行比较，有34对皆为C型，一对父为B+C型，子为B型，一对母为B型，子为B+C型。,家族中连续二代基因型的变化,表3HBV基因型在ASC、CHB、LC、HCC中的分布例（%）,注：基因型C中 ASC分别与CHB、LC、HCC比较，*x2=15.054；P0.05，x2=6.835；P0.05；x2=1.852，P0.05；CHB、LC、HCC三组比较x2=0.208，P0.05。,HBV基因型与临床转归,28,将研究对象分为四个治疗组：a-2b干扰素（安福隆），3MU，qod.im；阿德福韦酯（ADV,代丁）,10mg,qd.po；恩替卡韦（ETV,博
10、路定），0.5mg,qd.po；拉米夫定（LAM，贺普丁），100mg,qd.po.（LAM组人少，无法做统计分析，去除）。疗程为6个月。分别于治疗前、治疗六个月检测乙肝五项、HBVDNA及肝功能。,29,表4 三种抗病毒药物在基因型为C的患者中疗效比较,注：IFN-a2b与ADV比较，x2=22.105，P0.05；IFN-a2b与ETV比较，x2=13.963，P0.05；,30,结 论,1.母婴传播是家族性乙肝的主要传播途径。2.家族性乙肝家庭中子女HBV感染率农村高于城市。3.家族性乙肝家庭中子女HBV的感染率与性别无关。4.家族性乙肝家庭中母亲单方HBsAg阳性与父亲单方HBsAg阳
11、性对子女HBV感染后的转归无明显影响。,31,5.山西省家族性乙型肝炎不同结局其易感基因可能与均 HLA-DRB1*07有关，HLA-DRB1*07可能是山西省家族性乙型肝炎易感基因或连锁基因；HBV感染后在临床上出现不同的结局可能与患者的年龄(感染HBV的时间?)有关。,32,6.HLA-DRB1*04及HLA-DRB1*13与家族性乙型肝炎抗性相关，可能是山西省家族性乙型肝炎抗性基因。7.山西地区家族性乙型肝炎HBV基因型主要以C型为主，有少量B型和B+C混合型；C型感染所致的肝病预后差；亲子两代间基因型大多相同，个别有差异。,33,8.核苷类似物ADV、ETV可能更适于以C基因型为主的家族性乙型肝炎患者的抗病毒治疗。9.HLA-DRB1*04可能是阿德福韦酯抗乙肝病毒近期疗效好的预测指标，而HLA-DRB1*07的存在可能预示疗效较差。,34,展 望,限于经费我们仅进行了HLA-DRB1基因多态性与携带者、慢乙肝、肝硬化的相关性和HLA-DRB1基因位点分布与阿德福韦酯抗病毒近期疗效的相关性研究。,35,下一步将进继续扩大样本含量，对HLA基因型与肝癌及其与其它抗病毒药物的相关性进行分析，欲设立同胞对，进一步探究和验证HBV感染者的易感或抗性基因；对HBV基因型与ADV、IFNa-2b和ETV三种抗病毒药物疗效之间的关系进行深入研究。,36,谢谢,
