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1、学习项目二实验室检验,学习任务一血液常规检验,子任务一 动物采血技术,血液检验,血液样本的采取与抗凝,牛尾静脉采血,采样者接触牛的头部，容易引起牛发惊，难保定，牛角容易伤人，危险性大，特别是奶牛应激强烈，产奶量减少，容易引起流产，造成经济损失。牛尾静脉采血法采集，接触牛尾部，牛不惊，牛尾神经相对迟钝，疼痛轻，保定省力，只须一人将牛牵好即可，无应激。1、尾静脉采血部位 牛尾静脉位于牛尾腹侧面的中心线皮下位置，因离尾根大约10cm处，静脉较粗且较浅，所以此处为采血最佳部位。2、采血过程 助手将牛牵好，采血者左手托起牛尾巴，右手对采血部位消毒后，持带有7号针头的一次性注射器，右手食指控制针头深度，由
2、下向上垂直刺入牛尾腹侧中心线位置约0.5cm见有回血即可抽血，一般采用5ml即可，拔出采血针，用酒精棉球压一下针孔防止出血。,注意事项1.做好保定:保定后，牛不要左右活动，采血者左手托起牛尾巴，与水平线成45度角左右。2.找准部位:保定后选择最佳采血点，第4、5尾椎交界中点凹陷处垂直刺入，针头刺入约1cm深，针头触到尾骨后再后退1mm，轻轻抽动注射器内芯，直到抽出一定量的血液为止，采到的动脉血鲜红，量多，如果是静脉血颜色暗，量少。3.做好消毒卫生:采血前要清理牛舍粪便、尿液，保持圈舍、牛体干净卫生，以免污染采血部位和血样；采血部位要用75%的酒精棉球消毒，防止感染。4.注意人身安全卫生:在进行
3、尾部采血时，采血者要上身前倾，腿后移，以防被牛踢伤；要穿工作服，高筒水鞋，防止牛粪飞溅身上。,猪采血技术 猪场采血在基层兽医临床上是一项重要的工作。目前，大多数猪场都是使用耳静脉抽血的方法采血，这种方法费时费力，结合生产实际总结了几种采血方法，主要包括耳静脉采血、前腔静脉采血、尾静脉采血和乳静脉采血。,前腔静脉采血,猪的尾静脉采血,乳静脉采血,鸡翼下静脉采血法,静脉又称容量血管，其内含血量较多且流速较慢，位于翼下静脉具此特点，此静脉易找到，健康安全范围内在此可采血1020ml。而且操作方便，单人即可完成，采血量极易控制，止血彻底，对家禽影响小。,采血步骤：术者右手持注射器，左手将家禽双翼提起，
4、露出翼静脉的采血位置，把覆盖血管的羽毛拔开，即可见到明显一条较粗的静脉血管。采血时用左手大拇指夹住覆盖静脉的羽毛，食指协调大拇指夹住双翼，中指、无名指和手掌轻轻提起或轻按背部保定鸡只，待其安静方可刺针。针头在距静脉血管0.30.5cm一旁倾斜刺入皮肤，再与血管平行进针0.20.4cm后刺入血管，见有少量回血即可采集血液，采血完成后马上用手压迫伤口止血。,分离血清,采完血后，先将血清放到37度静置2小时，然后再4度过夜，这样出的血清多。实在不行，将凝固的血液用针头划几下，效果比较好。如果成胶冻样，可以高速离心，就能分离出血清了。,血液检验,血液的抗凝,草酸钠 是常用的抗凝剂，每1.52.0mg可
5、抗凝1.0ml血液，可用于血液常规检验。因对红细胞大小有影响，故不能用红细胞压积测定，如测定红细胞压积时，可用双草酸盐抗凝剂或乙二胺四乙酸二钠。,双草酸盐抗凝剂 草酸钠 0.8g草酸铵 1.2g蒸馏水 加至100ml 溶解后吸取0.5ml，加入供采血试管或小瓶中，置干燥箱内（温度不超过80）烘干备用，可供5ml全血抗凝,血液检验,乙二胺四乙酸二钠（EDTANa2）每10mg可使5ml全血抗凝；或配成10%的溶液，每2滴可使5ml全血抗凝。可适用于一般的血液学检查，特别是血小板计数，但因为影响血小板聚集和白细胞吞噬功能，不适合于血象及血小板功能检查。,3.8%枸橼酸钠溶液 每0.5ml可使5ml
6、全血抗凝。常用于血沉、凝血因子和血小板功能检查。因其毒性小又可作为血液保养液。但不适用于血液化学检验。由于抗凝剂溶解缓慢，故只能配成溶液，不能用粉剂。,血液的抗凝,血液检验,肝素 肝素价格最贵，其优点是抗凝作用强，不影响血细胞的体积，不致溶血等，可用于多种血液生物化学分析和红细胞压积测定。但过量的肝素可引起白细胞聚集和血小板减少，故不适用于白细胞和血小板计数，也不适用于血涂片检查，因其在瑞氏染色时会出现蓝色背景，更不能用于凝血象的检查。,血液的抗凝,通常用肝素粉剂配成1g/L水溶液。取0.5ml置小瓶内，放于3750中烘干后贮于冰箱内保存。能使5ml血液不凝固，肝素抗凝剂应及时使用，放置过久易
7、失效。怀疑传染病时，采血应防止到处流散，检后残余血液及所用器皿应进行消毒处理。,子任务二 红细胞沉降率（ESP）测定,血液检验,红细胞沉降率测定,魏氏法,魏氏血沉管长30cm，内径2.5mm管上有0200的刻度，每一刻度的距离为1mm，其溶积为1ml。,先向10ml刻度试管中加入3.8%枸橼酸1ml，再自静脉采血4ml，颠倒混合数次，然后用魏氏血沉管吸取抗凝剂至刻度0处，擦去管外血液，在室温条件下，垂直放于血沉管架上，经15、30、45、60min，分别观察并记录细胞沉降数值。,血液检验,红细胞沉降率测定,“六五”型血沉管法,于血沉管中加入抗凝剂（草酸钠0.0150.02g，枸橼酸钠粉末0.0
8、40.05g）,自颈静脉直接采血至刻度“0”处，立即充分混合，于室温垂直立于试管架上，镜15、30、45、60min各观察一次，并记录红细胞沉降的数值。,血液检验,红细胞沉降率测定,各种动物的正常血沉值,测定血沉时必须用新配制的抗凝血；血液与抗凝剂混合要充分，柱面上不应有气泡，它可使血沉变慢；用魏氏法测定时，事先应检查血沉架是否好用，以防漏用；测定时室温以20左右为宜，温度过低可以减慢血沉。,子任务三 红细胞压积容量（PCV）测定,血液检验,红细胞压积测定,将一定量的抗凝血液注入特制的测定管中，用一定速度和时间离心沉淀，使红细胞压缩到最小容积，读取沉积红细胞占全血的百分比。,用毛细玻璃吸管或长
9、针头吸满抗凝全血，插入红细胞压积容量测定管，随后轻轻捏胶皮乳头，自下而上挤入血液至刻度 10 处，但吸管口或长针头尖在挤血过程中不要提出液面，以免液面形成气泡，影响结果。,将测定管置入电动离心机内，3000rmin，牛血及猪血离心 40min，离心后管内的血柱分为三层。上层为淡黄色或白色的血浆；中部一薄层为灰白色，完全不透明，是由白细胞及血小板所组成；下层为红细胞的叠积层。读取红细胞柱层的刻度数，即为红细胞压积容量数值，数值用百分率表示。,血液检验,生理性增高：多因家畜在兴奋、紧张或运动之后。由于脾脏收缩将贮存的红细胞释放到外周血液所致。病理性增高：见于各种性质脱水，如急性肠炎、牛瓣胃阻塞、急
10、性腹膜炎、食管梗塞、咽炎、小动物的呕吐。,压积降低：主要见于各种贫血，如营养不良性贫血、寄生虫性贫血、溶血性贫血、出血性贫血。,临床意义,子任务四 红细胞渗透脆性测定,血液检验,红细胞渗透脆性测定,抗凝全血一份，先用生理盐水将红细胞洗涤 12 次，然后做成 10%红细胞生理盐水悬液。取 10 亳升刻度试管 22 支，排列于试管架上，依次编号，按上表管号每管各加低渗氯化钠溶液 5ml。用带胶皮乳头滴管吸 10%红细胞生理盐水悬浮液，向每支试管各加 2 滴，轻轻混合，室温中放置 1015min 后，离心 5min，读取结果。溶液如被染成浅桃红色，管底有大量红细胞沉渣，则为红细胞最大抵抗力。,红细胞
11、在等渗氯化钠溶液中，形态保持不变。红细胞在不同浓度低渗氯化钠溶液中，水分进入红细胞，红细胞逐渐胀大以至破裂溶血。开始溶血（即部分红细胞破裂）为最小抵抗力；完全溶血（即全部红细胞破裂）为最大抵抗力。抵抗力小，表示渗透脆性高；抵抗力大，表示渗透脆性低。通过这项检验，可测定红细胞对于低渗溶液抵抗能力的大小。,血液检验,渗透脆性增高：即病畜的红细胞比其正常的红细胞对于低渗溶液的抵抗力下降而易脆裂。主要见于犬、猫自体免疫性溶血。由于机体自身红细胞产生球蛋白抗体，这种球蛋白抗体被覆于红细胞胞膜，使红细胞厚度增加接近球形，水分容易进入红细胞而致破裂。此外，还见于家畜溶血性毒物中毒及其它溶血性疾病。,渗透脆性
12、减低：即病畜的红细胞比其正常的红细胞对于低渗溶液的抵抗力增大。多见于仔猪等幼畜缺铁性贫血。缺铁性贫血的红细胞胞体扁而薄，其中含血红蛋白量少，进入较多水分方后即可破裂。,临床意义,一般动物 0.62%0.84%Nacl 溶液开始溶血，3.84.4g 溶液完全溶血，红细胞渗透性测定的目的主要在于了解贫血，尤其是溶血性贫血的性质。,子任务五 血液凝固时间测定,血液检验,血液凝固时间测定,玻片法：采血，见到出血后立即用秒表记录时间。取血一滴，滴在玻片一端，随即玻片稍稍倾斜，滴血一端向上。此时未凝固血液自上而下流动，形成一条血线，放在室温下的平皿内，防止血液中水分蒸发，静置 2min，以后每隔 30秒用
13、针尖挑动血线一次，待针头挑起纤维丝时，即停止秒表，记录时间，这段时间就是血凝时间。,按照血液凝固理论，当离体血液与异物表面接触后，激活了血液中有关凝血因子，形成凝血活酶，以至纤维蛋白原转变成纤维蛋白，血液凝固。,试管法：采血前准备刻度小试管 3 支，并预先放在 2537恒温水浴箱内。颈静脉采血，见到出血立即用秒表开始计时。随之将血液分别加入 3 支试管内，每支试管各加 1ml，再将试管放回水浴箱。从采血经放置 3min 后，先从第 1管做起，每隔30 秒逐次倾斜试管一次，直到翻转试管血液不能流出为止，并记录时间。3 支小试管的平均时间即为血凝时间。,血液检验,凝血时间延长：见于重度贫血、血斑病
14、、某些出血性素质高、严重肝脏疾病。炭疽病畜的血凝时间很长，甚至几乎不凝。血凝时间延长原因主要由于凝血因子明显减少或缺乏所致。,凝血时间缩短：兽医临床较少见，偶见于纤维素性肺炎。,临床意义,在兽医临床手术特别是大手术，或肝、脾等穿刺前，最好进行这项测定，旨在及早发现出血性素质高的者，以防发生大量出血。,子任务六 血红蛋白测定,血液检验,血红蛋白测定,红细胞遇酸溶解，游离出血红蛋白，并被酸化为褐色的酸性血红素，稀释后与标准色柱比色，即可求得血红蛋白的含量。,血红蛋白试纸测定法 器材应备有测定血红蛋白试纸和4g%15g%血红蛋白标准比色板。测定时，取试纸一条，吸附被检血液一小滴，待血完全浸透后，立即
15、置于所附标准色板的小孔下，肉眼与色板色泽进行比较，选择颜色相同或近似者，即得100ml血液所含血红蛋白的克数。,沙利氏血红蛋白测定法 沙利氏血红蛋白计由比色架、标准比色柱、血红蛋白测定管及血红蛋白吸管组成。测定管有两个刻度标志，一侧的224刻度表示100ml血液中含有的血红蛋白克数；另一侧有20160刻度，表示100ml血液中所含血红蛋白的百分数。,血液检验,血红蛋白测定,血红蛋白增高 见于各种原因引起的血液浓缩，如腹泻、呕吐、大汗、多尿及肠梗阻等。血红蛋白减少 见于各种贫血，如马鼻疽、牛结核、牛羊肝片吸虫病、仔猪蛔虫等。,子任务七 红细胞计数,血液检验,红细胞计数,红细胞计数是将一定量的供检
16、血液经一定倍数稀释后，计数一定容积的红细胞数，并换算为每立方毫米血液内含量。,血液检验,红细胞计数,健康动物红细胞数（万/立方毫米）,子任务八 白细胞计数,血液检验,白细胞计数,用冰醋酸将红细胞破坏后，计算每立方毫米内白细胞总数。,健康动物白细胞数（个/立方毫米）,子任务九 白细胞分类计数,血液检验,白细胞分类计数,健康动物各类白细胞分类数值（%）,血液检验,临床意义,白细胞增多嗜中性白细胞增多：见于猪、牛巴氏杆菌病、马腺疫、肺炎及化脓性感染等。嗜酸性白细胞增多：见于某些蠕虫病、过敏性疾病及湿疹等。淋巴细胞增多：见于结核、鼻疽、布氏杆菌病、猪瘟及牛梨形虫病。单核细胞增多：见于败血性疾病，某些梨
17、形虫病及李氏杆菌等。,白细胞减少嗜中性白细胞减少：见于病毒性传染病、药物中毒（如长期服用抗生素）、各种疾病的垂危期。嗜酸性白细胞减少：见于败血症、某些病毒病及牛梨形虫病等。淋巴细胞减少：多为嗜中性白细胞增多而造成的相对性变化。,血液检验,在分析嗜中性白细胞增、减变化时，还应注意嗜中性白细胞的成熟情况。若未成熟的嗜中性白细胞增多，即出现嗜中性髓样细胞、幼稚型和杆状核嗜中性白细胞的比例增多，则称为核左移。若血液内分叶核嗜中性白细胞大量增多，而且核的分叶数目也增多，则称为核右移。,白细胞总数增多的同时，出现核左移，表示骨髓造血机能加强，机体处于积极防御阶段；而白细胞总数减少时见有核左移，则表示骨髓造
18、血机能减退，机体的抗病力降低。至于核右移，乃骨髓造血功能衰退的标志，多因机体高度衰竭而引起，常提示预后慎重。,临床意义,子任务十 血小板计数,血液检验,血小板计数,尿素能溶解红细胞及白细胞而保存完整形态的血小板，经稀释后在细胞计数室内直接计数，以求得每立方毫米血液内的血小板数。稀释液中的枸椽酸钠有抗凝作用，甲醛可固定血小板的形态。,吸取稀释液 0.38ml 置于小试管中。用沙利吸血管吸取末梢血液或用加有 EDTANa2 抗凝剂的新鲜静脉血液至 20 mm 3 刻度处，擦去管外沾附的血液，插入试管，吹吸数次，轻轻振摇，充分混匀。静置 20min 以上，使红细胞溶解。充分混匀后，用毛细吸管吸取1
19、小滴，充入计数室内，静置 10min，用高倍镜观察。任选计数室一个大方格，按计数法则计数。在高倍镜下，血小板呈椭圆形、圆形或不规则折光小体，注意切勿误将尘埃等异物计入。,血液检验,血小板减少：血小板生成减少，见于再生性障碍贫血、急性白血病、放化疗之时；血小板破坏增多，见于原发性血小板减少性紫癜、脾功能亢进。血小板消耗过多，见于弥散性血管内凝血、血栓性血小板减少性紫癜。,血小板增多：见于原发性血小板增多症；继发性见于急性感染、急性出血及急性溶血。,临床意义,子任务十一 血液分析仪及其在兽医临床上的应用数,目前，各类血液分析仪主要能完成两大功能：细胞计数功能。细胞分类功能。血液分析仪检测原理主要是
20、电阻抗法。,血液分析仪(HA)，是目前临床血液检验常用检测仪器。,1、血球计数仪的结构2、血球计数仪的原理3、血球计数仪的使用,血涂片的制作和血液细胞的观察,目的：掌握血涂片的制备方法（瑞氏染色法）掌握血液各种有形成分的形态特征,1、外周血涂片的制备方法,用酒精棉球擦拭消毒采血部位，用消毒针头刺破末梢血管或末梢皮肤，从采血针眼处挤出绿豆大小的血滴，用清洁玻片的一端轻轻接触血滴，使血滴附于玻片面上（注意，勿触及皮肤，否则血在玻片上就不能成滴。）以左手拿该片的一端，迅速用右手拿住另一载玻片的一端，在左手载玻片上由前向后接触血滴，使两张玻片呈45度角，轻轻移动，使血滴呈一直线，然后由前向后推为一均匀的薄片。涂片在空气中干燥后，置于染色架上，滴加瑞氏染色液，使涂片被染色液覆盖。染1分钟后，再滴加等量的缓冲液于染色液上，浸染约5-8分钟，此时涂片表面呈现一层古铜色。用蒸馏水迅速冲洗，见涂片呈粉红色后，自然晾干。,制作良好的涂片厚薄适宜，血膜分布均匀，呈粉红色。取一厚薄适宜部位置显微镜下观察。先用低倍镜观察全片，了解涂片染色，细胞分布情况，再用油镜观察。2.血细胞观察红细胞白细胞 嗜中性、嗜酸性、嗜碱性、淋巴、单核、血小板3.血液寄生虫观察,
