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1、细胞工程作业1.细胞死亡有几种形式？各有何特点？有细胞坏死、细胞凋亡。细胞坏死特点：膜通透性增加，细胞外形发生不规则变化，内质网扩张，核染色质不规则地位移，线粒体及核肿胀，溶酶体破坏，细胞膜破裂，胞浆外溢，从而诱发炎症反应。 细胞凋亡特点：细胞骨架扰乱、粘附力下降。细胞核和细胞质浓缩。180-200bp及其倍数的DNA ladder。胞质出芽，形成膜包围的凋亡小体。细胞内含物不外泄，无炎症反应。凋亡细胞可被周围细胞识别并吸收。2生物的生殖方式有几种？无性生殖、有性生殖和无融合生殖。3细胞分化的基本特征是什么？细胞质和细胞核是如何影响细胞分化的？特点:正常情况下，细胞分化是稳定、不可逆的。一旦细
2、胞受到某种刺激发生变化，开始向某一方向分化后，即使引起变化的刺激不再存在，分化仍能进行，并可通过细胞分裂不断继续下去。细胞核中的遗传物质是在分化时进行基因的选择性表达细胞质为细胞核的分化提供稳定的环境和能量具体地说 遗传和个体发育中，细胞质调节着核和基因的作用。受精卵内细胞质的分布是均一的，受精卵经过卵裂，分成许多细胞，这些细胞中含有的细胞质内容是不同的（色素、卵黄粒和线粒体等），以后基因在不同的细胞质中作用下，表现出不同的效应，这就造成细胞和组织的分化。4试述动植物两性配子发生过程，二者有何异同？植物配子形成过程：从体细胞中分化形成生殖细胞、减数分裂产生雌雄配子、雌雄配子受精结合形成合子、合
3、子经过一系列细胞分裂和分化成为种子。动物配子形成过程：增殖期、生长期、成熟期。5简述动植物胚胎发育过程。植物胚胎发育：原胚阶段、胚的分化与成熟。动物胚胎发育：桑椹胚、囊胚原肠胚(双胚层或三胚层)器官原基个体6何谓周期细胞、终端分化细胞和G0期细胞？周期细胞：有的细胞未经分化，仍保留着分裂的能力，这种细胞就是周期细胞他们存在着分裂的周期。终端分化细胞：是不分裂细胞，即细胞永久的失去了分裂能力，而分化为具有一定形态结构及生理功能的组织细胞。休眠细胞暂不分裂,但在适当的刺激下可重新进入细胞周期称G0期细胞7何谓端粒？它与细胞的寿命有何关系？端粒是线状染色体末端的DNA重复序列。细胞分裂次数越多，其端
4、粒磨损越多，寿命越短。第三章1、谈谈你对生长培养基和维持培养基中各种组成成分及其在动物细胞培养中所起作用的认识？无机营养成分无机营养元素供应不足时，组织培养材料就会出现一定的缺素症。有机营养成分提供促进培养细胞生长和分化所必需的有机碳、氮等营养物质。生长调节物质是促进培养植物生长良好的主要调控因素。2、谈谈你对血清在动物细胞培养中所起作用的认识？培养基中的血清含量是否越多越好？目前尚不充分了解。血清中含有多种细胞生长和增殖所必不可少的激素、生长因子以及贴壁和铺展因子，其作用：血清和蛋白水解产物为培养细胞提供氮源。具有促进细胞生长的能力。具有促进细胞在培养基质上附着和铺开的能力。抑制蛋白质水解酶
5、活性的能力。不是越多越好，对细胞培养存在不良影响。3、如何判断无血清培养基是否适合动物细胞的生长和增殖？a、细胞至少要在该培养基上经过连续三代测试，使细胞内原先贮存的生长因子已经用完，此后，若细胞还能生长，则说明培养基是适合细胞生长的。b、原先是异源群体（heterogeneous population）的细胞系，经过在成分明确的培养基中适应选择后，细胞类型可能会变得较为单一。c、一般来说，转化程度较高的细胞更容易在成分明确的培养基中生长4、动植物细胞培养基的组成和配制方法各是怎样的？有何异同点？母液的配制和培养基的配制1培养基母液的配制 母液的配制是按药品的种类和性质分别配制，单独保存或几种
6、混合45C保存。配制好的母液种类一般有：大量元素、微量元素、钙盐、铁盐、有机营养和单独保存的各种生长调节类物质。需加入过滤灭菌的药品，在高压灭菌后，培养基凝固前加入，并轻摇使混匀。培养基终体积定容时，可以利用台秤通过重量进行培养基终体积的确定5、植物体外培养所需要的生长调节类物质有哪些？它们的作用是什么？组织培养中生长素的作用： 促进细胞伸长生长和细胞分裂，诱导愈伤组织形成，促进生根，诱导不定芽的分化（与细胞分裂素配合），诱导侧芽的萌发与生长，胚状体的产生等细胞分裂素的作用：促进细胞分裂，诱导愈伤组织或器官分化不定芽，抑制顶端优势而促进茎的增值，抑制离体组织或器官衰老。赤霉素类：促进诱导形成的
7、不定芽正常发育成小植株。脱落酸：抑制蛋白质合成，抵消和抑制生长素、细胞分裂素和赤霉素发挥作用，诱导休眠，促进衰老和脱落，抑制气孔开放，减少蒸腾作用，对一些培养物芽的形成有促进作用。乙烯：促熟作用，促进脱落和衰老，促进胶、漆、松脂等次生物质的排泌，促进菠萝开花，增加黄瓜等雌花数量。6、何谓培养基、生长培养基、维持培养基、合成培养基、天然培养基、无血清培养基？ 培养基是离体培养组织或细胞赖以生存的营养基质，是为离体培养材料提供的近似生物体内生存的营养环境。生长培养基是指用来培养细胞使其快速生长增值的培养基。维持培养基是指只能用来维持培养细胞的存活，但不能促使细胞生长和增值的培养基。合成培养基是指按
8、照体内细胞所需营养的种类和数量配成的成分明确的培养基。天然培养基包括各种动物的体液，组织提取液，水解乳蛋白无血清培养基是指培养基中没有血清，而是各种因子来代替血清。1、试述动物细胞原代和传代培养方法。组织块培养法 消化培养法2、如果你在动物细胞原代培养中，遇到细胞不迁移或迁移生长缓慢的情况，你将采取哪些措施来解决？3、试述动物细胞固定化培养的原理和方法。4、你认为胚胎干细胞培养与其它细胞培养相比，难点在哪里？ 5、体外培养动物细胞的形状主要有哪几种类型？你如何理解细胞形状的可塑性？体外培养的动物细胞，按照其生长方式可以分为：1.贴壁生长型细胞（贴壁型细胞）2.悬浮生长型细胞（悬浮型细胞按照贴壁
9、型细胞的体外培养时的形态，主要分为四大类：成纤维细胞型细胞上皮型细胞游走型细胞多形型细胞6、体外培养动物细胞的生长曲线有何特点？细胞系的演化过程是怎样的？如何理解体外培养细胞的去分化现象？7、对体外培养细胞进行常规检查主要有哪几方面内容？如何判断和排除微生物污染、病毒污染、化学污染和交叉污染？体外培养细胞的常规性检查的目的是：考察三个问题污染与否？pH环境是否适宜？细胞的生长状态如何？1.微生物污染监测 细菌感染时，有的引起培养液混浊，镜下可见大量细菌，有的培养液明显改变如怀疑污染，必要时可向肉汤或琼脂培养基里滴少量培养物，置37温箱培养数日，观察有无菌落形成，以验证是否污染。2.培养液观察
10、在正常情况下，培养液呈桃红色，用一般恒温箱培养时，随细胞生长时间延长，二氧化碳（CO2）积累增多，在超出缓冲范围后，营养液酸化变黄，此时如不调节pH，对细胞会发生不利影响，严重时细胞脱落死亡。营养液碱化变红除因瓶口不严二氧化碳（CO2）溢出外，也可能由于培养瓶和瓶塞刷洗不洁，残留碱性物质所致。更换营养液的时间，可依营养物的消耗而定，细胞生长旺盛时2-3d换一次，生长缓慢时3-4d亦可。3.细胞形态观察 生长状态良好的细胞在一般显微镜下观察时透明度大，轮廓不清，只有用相差显微镜，才能看清细胞的细微形态。细胞机能不良时轮廓增强，胞质中常出现空泡、脂滴和其它颗粒状物，细胞之间空隙加大，细胞形态常变得
11、不规则和失去原有特点，如上皮细胞会变成纤维细胞等4.细胞计数 5. 细胞活性检测 可用对色素的吸附性来判断细胞的死活。用活细胞占计数细胞中的百分比表示其活力8、为什么要对细胞系进行特性鉴定？鉴定方法有哪些？ 9、为什么要对培养细胞进行冻存？试述非玻璃化冻存和玻璃化冻存细胞的原理和方法。10、体外培养细胞的细胞分裂是否同步？如何得到同步化的细胞？11、器官培养与细胞培养相比有何不同？成体器官培养和胚胎器官培养有何不同？器官培养有哪些方法？器官培养在生物学和医学上有哪些应用？ 1、何谓细胞融合、细胞杂交、同核体、异核体、种内杂交细胞、种间杂交细胞、胞质体、核体、微细胞、重组细胞？细胞融合（cell
12、 fusion）系指用人工方法把两个或两个以上细胞合并成一个细胞的技术。细胞杂交（cell hybridization）特指用人工方法把不同类型的两个或两个以上细胞合并成一个细胞的技术。同核体(homokaryon)：由同一亲本细胞融合而来。异核体(heterokaryon)：由不同亲本细胞融合而来。微细胞：外包少量胞质和胞膜的细胞。种间杂交细胞（interspecific hybrid cell）：亲本细胞来源于不同的种，即两个亲本细胞至少基因型是不同的。种内杂交细胞（intraspecific hybrid cell），亲本细胞来源于同一个种，即两个亲本细胞至少细胞类型是不同的。核体(ka
13、ryoplast)又叫小型细胞（minicell），主要由细胞核组成，外面包围着少量细胞质和细胞膜.胞质体(cytoplast)又叫无核细胞（anucleate cell），由完整细胞的绝大部分细胞质组成，外面包有细胞膜。2、试述生物体内和体外存在哪些自发的细胞融合现象？人工诱导细胞融合有哪些诱导方法？（一）受精 （二）体内细胞的自发融合肌管（myotube）形成 破骨细胞（osteoclast）形成巨细胞（giant cell）形成 胚胎着床 肿瘤细胞融合 （三）体外细胞的自发融合1、小鼠和鸡成肌细胞的融合2、肿瘤细胞的融合（一）病毒诱导细胞融合（二）化学方法诱导细胞融合（三）物理方法诱导细
14、胞融合3、试述如何采用细胞融合方法制备和鉴定黑白相间嵌合体小鼠？制备：分别将黑色和白色小鼠的8-细胞胚胎从母体内取出，除去透明带，将二者并合，再放回养母子宫内，最终产出黑白相间的嵌合体小鼠。4、试述细胞融合的原理以及杂交细胞的筛选方法。细胞在诱融剂或正弦电场作用下凝集，彼此靠近。两个相邻细胞之间的质膜相互融合，随后两个亲本细胞质膜上的受体、糖蛋白、糖脂等质膜成分也在融合后的质膜上重新分布。细胞质发生融合。细胞核融合，形成单核融合细胞。非选择性筛选和选择性筛选两种。5、试述杂交细胞染色体丢失的机制和特点。无论种内杂交细胞还是种间杂交细胞都会发生染色体丢失现象。一般来说，种内杂交细胞远比种间杂交细
15、胞的染色体稳定性大。亲本细胞一方或双方都是永生性细胞系的时候才会丢失。种间杂交细胞的染色体丢失是很普遍的现象。 6、试述杂交瘤技术生产单克隆抗体的原理和技术过程。原理：B淋巴细胞分泌抗体的功能。骨髓瘤细胞的永生性。(一) 融合亲本细胞的准备1、致敏B淋巴细胞的准备 2、骨髓瘤细胞的准备 (二)细胞融合将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞按比例混合(5:1)，PEG (10004000)诱导细胞融合。 (三)杂交瘤细胞的筛选 HAT培养液筛选(四) 能稳定分泌特异性单抗的杂交瘤细胞的筛选(五)杂交瘤细胞的克隆化培养(六)单克隆抗体的生产和纯化 1、胚胎移植的生理学基础是什么？（1）同种动物的供，受体的生殖器
16、官的生理变化是相同的，为供体胚胎移入受体提供相同的生理环境。（2）早期胚胎在一定时间内处于游离状态，为胚胎的收集提供了可能。（3）受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，为胚胎在受体内的存活提供了可能。（4）供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受任何影响。2、胚胎移植的原则？1胚胎移植前后所处环境的一致性 指胚胎移植后的生活环境与胚胎的发育阶段相适应，具体包括以下几个方面。(1)供体和受体种属上的一致性(2)生理上的一致性(3)胚胎收集和移植部位的一致性2胚胎发育的期限3、胚胎移植中常用生殖激素各自在胚胎移植中发挥什么作用？雌激素 能激发和
17、维持雌性正常的性周期 孕激素 促进子宫内膜和乳腺等的生长发育，为受精卵着床和泌乳准备条件 4、外源性促性腺激素为什么能引起雌性动物超数排卵？在卵泡闭锁开始之前，即排卵前的35天，给予外源性促性腺激素，可挽救那些将要闭锁退化的卵泡，使更多的卵泡和卵母细胞发育成熟，诱导超数排卵。5、胚胎移植受体同期发情的方法有哪两类，机理有何区别？6、某生产单位有纯种母羊100只，欲进行胚胎移植工作快速扩大繁殖。请你按照胚胎移植工作的基本程序及原则，作出整个胚胎移植工作计划。7、胚胎性别鉴定主要方法的原理？1.何谓试管动物？其制备方法与胚胎移植动物有何不同？定义：指利用精子和卵子体外受精、显微受精、胚胎体外培养和
18、移植获得的各种动物。与胚胎移植动物不同：卵母细胞体外成熟及精子体外获能，体外受精，体外培养发育，然后将胚胎移植到受体生殖道内。2.何谓精子体外获能？获能的主要方法及其机理是什么？哺乳动物的精子必须在子宫或输卵管内经过一定的时间，发生一定的生理变化，才能获得穿透卵子的能力，此现象称为精子获能。精子体外获能的主要途径1、高离子强度液2、钙离子载体3、氨基多糖法3、如何获得成熟的卵母细胞？其体外成熟培养的方法？ 体内成熟 超排处理，取成熟卵泡内或输卵管内刚排出的卵母细胞。 体外成熟 体外培养未成熟的卵母细胞。 获取较多卵子的有效途径。4、 获能精子有何特征，如何检测获能精子？1、获能精子的特征代谢改
19、变，呼吸代谢明显增加。运动方式改变，超活化运动。顶体形态变化，顶体帽部分的质膜和顶体外膜在多处发生融合，膜泡状化。超活化运动发生于顶体反应之前 运动方式的测定，镜下观察精子活力、运动类型和运动速度。 顶体反应的检测，有无顶体反应是判断精子获能的有效方法之一 电镜观察：头部质膜与顶体外膜泡状化，或仅残存顶体内膜。 顶体染色法(三重染色技术)光镜观察： 品红色，无顶体反应。 白色，有顶体反应。 蓝黑色，死精子 棕色，活精子5、 显微受精的方法及影响显微受精的因素。（一）显微受精操作精子显微注射培养液：同受精液。卵母细胞固定管：钝端，外径与卵母细胞相当精子显微注射针：内径5-10 mm, 斜尖头。注
20、射精子：获能精子、未获能精子和精子细胞影响显微受精的因素1、注射部位、2、精子状态、3、精子发生、4、卵子状态、5、显微受精卵的激活、6、多精子注入7、显徽操作技术6、 何谓动物早期胚胎体外发育阻滞？产生的原因是什么？体外受精胚胎从受精卵到囊胚的发育率很低，称为早期胚胎培养的体外发育阻滞阻断发生的细胞阶段与胚胎基因组活化时间有关，即卵源性基因控制向胚源性基因控制转换的阶段7、早期胚胎培养系统有哪几类？各培养系统如何解决早期胚胎体外发育阻滞的问题？ 简单化学限定培养液； 共同培养系统 共同培养系统是将胚胎与其它组织细胞(体细胞)共同培养，组织细胞产生的物质供胚胎发育所需，从而有利于胚胎克服体外发
21、育阻断，改善胚胎发育 含有肽类生长因子的培养系统1、如何准确理解克隆的概念？是指通过无性繁殖的手段，从一个细胞获得遗传背景相同的细胞群或个体群的过程2、克隆动物的来源有哪些？1. 胚胎分割法发育早期，未着床的2-8细胞期的早期胚胎2. 核移植法胚胎干细胞、胚胎细胞、体细胞3. 雌核发育3、试述鱼类核移植方法，哺乳动物核移植与鱼类相比主要差别在哪里？1、受体的准备挤压雌鱼腹部，挤出的卵子入水后激动，举膜。供体核准备：取囊胚，去卵膜，切去卵黄，取囊胚细胞，于无钙培养液中分散成单个细胞。用毛细玻璃针吸取单个囊胚细胞移核、移核鱼的体外培养、核质杂交鱼差别：哺乳动物核移植有卵母细胞激活，重组胚的体内培养
22、，4、克隆羊多利是如何培育出来的？j供体核的准备。取6岁怀孕母绵羊（白面）的乳腺上皮细胞作核供体。取乳腺实质组织，建立乳腺上皮细胞系，体外培养数月后，血清浓度10% 0.5%, 饥饿法使其进入休眠状态G0。k受体卵子的准备。给黑面母绵羊注射促性腺激素28-33h后，取未受精卵，快速去核，10%1%0.5%FCS连续5天,使其饥饿而进入G0期。l核供体乳腺上皮细胞与无核卵放入同一培养皿中，电融合。m电融合细胞植入羊的结扎输卵管中，6天后发育至桑椹期胚胎或囊胚期。（277重构胚-29桑椹胚-13头受体-5头妊娠-多利）n再植入假孕养母子宫中，产下白色多利羊。5、从哺乳动物早期胚胎发育调整能力变化及
23、胚胎各发育阶段特点分析胚胎分割的原理。把两个早期胚胎融合在一起，不发育为两个连在一起的胚胎，而是发育为一个胚胎。随着发育的向前迈进，细胞分化的调整能力逐渐减弱，直至完全丧失桑椹胚分割：单个卵裂球的调整发育能力减弱。囊胚分割：必须准确地一分为二, 半胚才能正常发育。早期囊胚、扩张囊胚及孵化囊胚。着床前胚泡分割：沿对称轴分割，半胚在体内仍能发育成完整胎儿，获得同卵双生。6、叙述胚胎分割的方法。1.固定吸管固定胚胎，显微玻璃针切开透明带，微吸管自开口处深入透明带吸住半数卵球，吸出半胚，装入空透明带。2.置入血清，使血清充满透明带，外包双层琼脂后，移入同期发情的中间受体输卵管中，培养3-5天。3. 待
24、发育至桑椹胚或囊胚时，回收琼脂筒，去掉琼脂层，将发育良好的胚胎移入同期发情的受体子宫角。4. 人工同卵双生动物桑椹胚及其以后阶段的直接分割法：囊胚之前的胚胎，需要用链霉蛋白酶处理，使透明带软化。囊胚之后的胚胎，透明带变薄变软，不需软化处理7、 叙述细胞核移植的原理。1个体的每一个细胞的核具有相同的完整的遗传物质。2发生早期分化的胚胎细胞核可恢复“全能性” 。3已分化细胞具有潜在的发育全能性，经过去分化培养,可以恢复其全能性。4胚胎干细胞具有全能性及调整能力8、成年体细胞克隆区别于其它细胞克隆的关键是什么？体细胞的分离、克隆、传代培养 细胞归零技术（即细胞饥饿技术）。9、 试述哺乳动物细胞核移植
25、的主要操作程序，请你设计出用耳皮肤细胞克隆动物的技术路线。胞质受体的准备核供体细胞的准备将核供体细胞核移入去核卵母细胞的胞质内；卵母细胞激活；重组胚的体内、体外培养及移植技术。10、你如何看待克隆的伦理问题？生命科学与人自身及人类社会的联系比其他任何自然学科都更加紧密，它关系到每一个人的命运，所以由此引发的争论当然也最激烈。克隆人引发的争论有技术上的，也有社会伦理方面的。其焦点问题还在于它带来了某些潜在的威胁和社会伦理方面的问题。克隆技术一旦用于人类自身，人类新成员就可以被人为地创造，成为实验室中的高科技产物，他们不是来自合乎法律与道德标准的传统的家庭，兄弟、姐妹、父母、子女之间的相互人伦关系
26、必将发生混乱。人们很难想象和接受这种对人类社会基本组织家庭的巨大冲击。这对人类社会现有法律、伦理、道德产生威胁，对人类的观念是严峻的挑战。11、克隆动物的应用前景如何？克隆技术已展示出广阔的应用前景,概括起来大致有以下四个方面:(1)培育优良畜种和生产实验动物;(2)生产转基因动物;(3)生产人胚胎干细胞用于细胞和组织替代疗法;(4)复制濒危的动物物种,保存和传播动物物种资源。转基因动物研究是动物生物工程领域中最诱人和最有发展前景的课题之一,转基因动物可作为医用器官移植的供体、生物反应器,以及用于家畜遗传改良,创建疾病实验模型等。体细胞克隆的成功为转基因动物生产掀起一场新的革命,动物体细胞克隆
27、技术为迅速放大转基因动物所产生的种质创新效果提供了技术可能。当今动物克隆技术最重要的应用方向之一,就是高附加值转基因克隆动物的研究开发。胚胎干细胞(ES)是具有形成所有成年细胞类型潜力的全能干细胞。克隆技术在基础研究中的应用也是很有意义的,它为研究配子和胚胎发生,细胞和组织分化,基因表达调控,核质互作等机理提供了工具。1、何谓染色体工程、多倍体、雌核发育、雄核发育、性别控制、染色体片断转移技术、染色体特定位点重组技术？定义：是指人们按照预先的设计，消减、添加或替换同种或异种动物细胞染色体的技术多倍体（polyploid）：Winkler，1916年。指体细胞中含有三个或更多个染色体组的个体，并
28、依所含染色体组数顺次称为三倍体、四倍体和五倍体等雌核发育，俗称假受精，指精子虽然正常地钻入卵内，激动卵子，但精子的细胞核并未参与胚胎发育，而是很快消失，胚胎发育仅在母体遗传的控制下进行，因而雌核发育个体完全表现母本性状，其基因型也与母本相同定义：雄核发育是指卵子经过射线照射等处理，使其遗传失活，再与正常精子受精，然后采用适当的方法使精子的染色体加倍为二倍体，而发育成完全父本性状的纯合个体定义：是指通过人为地干预或操作，使动物按照人们的设计繁殖出所需性别后代的技术。定义：指通过显微注射法，将外源染色体片段注入受体胚胎中，从而获得转染色体动物（transomics）的技术能够在特定位点诱发染色体的
29、各种重排2、试述人工诱导多倍体的技术途径、诱导方法以及多倍体的鉴定方法。j抑制受精卵第二极体的排放k抑制受精卵的第一次卵裂。生物学方法：种间杂交获得异源多倍体物理学方法：温度休克法、静水压法、高盐高碱法化学方法：秋水仙碱，细胞松弛素、聚乙二醇、其他麻醉剂直接方法：染色体计数和DNA含量测定等。间接方法：核体积测量法、蛋白质电泳、生化分析和形态学检查等3、试述人工诱导雌核发育和雄核发育的过程及其鉴别方法。第一步，雌核发育的诱导；即采用生物、物理或化学的方法使精子的遗传物质失活，然后用失活精子与卵子受精，启动卵子的雌核发育第二步，雌核发育卵子的二倍体化：单倍体综合症：只含有单倍染色体组的受精卵，胚
30、胎不能正常发育。必须使雌核发育的卵子染色体二倍体化，才能使胚胎正常发育。诱导染色体加倍的方法和多倍体诱导法相同：一是抑制第二极体的排放，二是抑制第一次卵裂鉴定：1、染色体数目和染色体组型分析法2、遗传标记法3、根据形态、颜色等表型特征来鉴别4、动物性别控制的途径有哪些？家畜：（一）X、Y精子分离技术（二）胚胎性别鉴定技术（三）控制受精条件j调节阴道的酸碱度。偏酸雌性；偏碱雄性。 k在精液中加入激素或睾丸、胎盘、脑垂体等组织的抽提物。鱼类两栖类爬行类：控制发育条件、性反转、人工雌核和雄核发育、种间杂交、三倍体不育1、什么是转基因动物？转基因动物是如何制备的？以鱼类和小鼠为例。定义：在基因组中稳定
31、地整合有外源基因的动物称为转基因动物制备： 1.转基因小鼠的制备过程：受精卵的准备：雌雄鼠交配，收集受精卵。基因导入：将目的基因显微注射到受精卵雄原核内。胚胎移植：体外培养至早期囊胚或桑椹胚，再将其移植入假孕养母子宫内。产出嵌合体小鼠。杂交筛选，获得纯合体转基因小鼠鱼：1、注射用针的制作 10mm毛细玻璃针2、DNA溶液的配制 Holtfreter液配成终浓度约40 mg/ mL的DNA溶液3、卵母细胞的收集和体外培养雄鱼追逐的雌鱼，剖腹取卵巢，将分散好的卵母细胞用1mg/ mL的17a-20 b -二氢孕酮溶液24C处理1h以上，待生发泡移至动物极受精孔下方时，即可注射。4、显微注射几pL至
32、几十nL DNA溶液（104 107个基因拷贝）5、注射后卵母细胞的培养 24C培养约3h后，生发泡破裂，再继续培养8-9h后即可人工授精。6、人工授精用尖头镊子去除卵母细胞的滤泡细胞后，立即加入精液进行授精。7、胚胎的培养 受精卵孵化成幼鱼，培养。2、转基因哺乳动物和转基因鱼类的制备有何不同？3、制备转基因动物中常用的基因转移方法有哪些？（一）基因显微注射法（二）反转录病毒感染法（三）精子载体法 （四）胚胎干细胞方法 （五）核移植法转基因（六）受体介导的基因转移4、谈谈你对食用转基因动物及其产品的安全性问题的认识。对人类健康存在潜在的危险性 对生物多样性的破坏防止转基因动物逃逸到野生环境中。对转基因动物的食用安全性不必过分恐惧转基因动物的标识制度 转基因动物，亮出你的身份证！”
