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1、实验93 紫外分光光度法测定水果（或蔬菜）中的维生素C含量,93.1 实验目的(1)掌握紫外分光光度计的工作原理及使用方法。(2)掌握水果（或蔬菜）中的维生素C含量的测定方法。,93.2 实验原理,紫外快速测定维生素C法，是根据维生素C具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243 nm处测定样品液与碱处理样品液两者消光值之差，通过查标准曲线，即可计算样品中维生素C的含量。,（一）标准曲线的制作1抗坏血酸标准溶液的配制：用分析天平准确称取抗坏血酸10 mg，加2 mL 10%盐酸，加蒸馏水定容至100 mL，混匀。此抗坏血酸溶液的浓度为100 gmL-1。,93.3 操作步骤,2.标准曲线的绘
2、制,3消光值的测定：以蒸馏水为空白，在243 nm处测定标准系列抗坏血酸溶液的消光值，以抗坏血酸的含量（g）为横坐标，以相应的消光值为纵坐标作标准曲线。,（二）样品的测定 1样品的提取：将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取5.00 g于研体中，加入25 mL 1%HCl，匀浆，转移到25 mL容量瓶中，稀释至刻度。若提取液澄清透明，则可直接取样测定，若有浑浊现象，可通过离心（10000 g,10 min）来消除。2样品的测定：取0.10.2 mL提取液，放入盛有0.20.4 mL 10%盐酸的10 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白，在243 nm处测定其消光值。3待测碱
3、处理液的制备：分别吸取0.10.2 mL提取液，2 mL蒸馏水和0.60.8 mL 1 molL-1 NaOH溶液依次放入10 mL容量瓶中，混匀，15min后加入0.60.8 mL 10%HCl，混匀，并定容至刻度。以蒸馏水为空白。在243 nm处测定其消光值。,4由待测样品与待测碱处理样品的消光值之差和标准曲线，即可计算出样品中维生素C的含量。5也可直接以待测碱处理液为空白，测出待测液的消光值，通过查标准曲线，计算出样品的维生素C的含量。,93.4 计算 V总维生素C的含量（g/g）=V1W总式中：从标准曲线上查得的抗坏血酸的含量（g）V1测消光值时吸取样品溶液的体积（mL）V总样品定容体积（mL）W总称样重量（g）,93.5 问题讨论,（）除了本实验中的方法外，抗坏血酸还有哪些测定方法?,（1）除了本实验中的方法外，抗坏血酸还有哪些测定方法?答：一、氧化还原法 1.直接碘量法 2.2,6-二氯酚靛酚滴定法 二、分光光度法 1.紫外快速测定法 2.2,4-二硝基苯肼法 3.高铁还原法测定血浆中的抗坏血酸三、光电比浊法四、电化学法五、荧光分析法 1.抗坏铁酸的微量荧光测定法 2.抗坏铁酸总量的荧光测定法,93.6 参考答案,
