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1、第四章：抗生素效价的微生物检定法教学目标：.解释抗生素概念、叙述医疗用抗生素特点、了解抗生素的主要作用机制.叙述抗生素的效价和单位及其表示方法.熟知抗生素效价检定操作与基本要求.述说测定原理,教学重点：抗生素概念、医疗用抗生素特点、抗生素的效价和单位及其表示方法 抗生素效价检定操作方法与基本要求,教学难点：抗生素效价检定操作方法二剂量法效价计算公式抗生素的主要作用机制,讲授新课：第一节 概述,一、抗生素的概念:抗生素主要是由微生物所产生的极微量便具有选择性地杀死或抑制它种生物或肿瘤、细胞生长的一类天然有机化合物。二、医药用抗生素的特点具备以下4个特点才能应用到临床。(1)有较大的差异毒力 是由
2、抗生素的作用机制决定的,如青霉素类抗生素能抑制细菌细胞壁的合成，而对人与哺乳动物没有影响,因而该类抗生素具有明显的差异毒力。(2)抗菌活性强 抗菌活性的强弱常用最低抑菌浓度(MIC)来衡量，MIC值越小，表示活性越强。(3)抗菌谱广 即指各种抗生素所能抑制或杀灭微生物的范围，范围广谱者称为广谱抗生素，即对多种病原菌都有抑制和杀灭作用；范围窄的为窄谱抗生素，如青霉素主要抑制革兰阳性菌，多粘菌素只能抑制革兰阴性菌，而具有抗肿癌作用的抗生素则称为抗肿瘤抗生素。(4)不产生副作用和不良反应 良好的抗生素应对机体无毒性，不引起变态反应，不易使病原菌产生耐药性。,三、抗生素效价微生物测定技术,（一）概述,
3、效价测定技术方法,物理、化学法,微生物法,简便、快速，本身纯度不高，采用该法会引起偏差，因此只有在纯度较高情况下可采用,原理和临床应用的要求相一致，直接反映出抗生素的疗效，且灵敏度较高，需用量较小，因此被广泛使用。,微生物法,依据抗生素最小抑菌浓度而设计的稀释法；根据不同浓度的抗生素对微生物生长速度的不同影响程度而设计的比浊法中国药典称之为浊度法并收载；有依据抗生素渗透到含敏感菌的琼脂培养基中产生抑菌圈而设计的管碟法(又称扩散法，杯碟法或垂直扩散法)；,根据对微生物呼吸抑制程度而设计的呼吸度量法；根据对微生物代谢产物的影响而设计的快速法，对微生物体内酶系统产生影响的脱氢法。,浊度法系利用抗生素
4、在液体培养基中对试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后细菌浊度值的大小，比较标准品与供试品对试验菌生长抑制的程度，以测定供试品效价的种方法。管碟法：是利用抗生素在含敏感试验菌的琼脂培养基中的球面扩散渗透作用，从而形成一定的抑菌圈。通过琼脂培养基，可观察并测量出抑菌圈的大小。在一定的抗生素浓度范围内，对数剂量(浓度)与抑菌圈的表面积或直径成正比,（二）抑菌圈的形成,将不锈钢小管(俗称为牛津杯)放置在含敏感试验菌的琼脂培养基上，将抗生素溶液注入小钢管中，抗生素分子随溶剂向培养基内呈球面状放射状扩散。同时将培养基置入适宜试验菌生长的培养箱中，琼脂培养基中的试验菌开始生长。抗生素分子在琼脂培养基中的浓度
5、，随离开小钢管的距离增大而降低，离小钢管愈远，琼脂培养基中抗生素分子愈少，相应的抗生素浓度愈低。当抗生 素分子扩散到一定时间，在 小钢管周围形成一个能有效 的抑制试验菌生长的范围，也就是通常所说的抑菌圈。抗生素溶液的浓度不同，抑 菌圈的大小亦不同(图41)。,按设计原理不同分,管碟法,一剂量法（标准曲线法）,二剂量法（22法）,三剂量法（33法）,日常使用多采用二剂量法，对于有争议结果，必须使用三剂量法测定的结果仲裁。另外再介绍浊度法；考虑到一剂量法（标准曲线法）在研制新药的使用和美国药典、日抗基均有收载，本教材以选讲形式进行介绍。,第二节 抗生素的效价和单位,一、抗生素的效价和单位 抗生素的
6、含量用效价和单位表示。该词有时不加区别统称为效价单位。效价（otency）指检品的实际单位数与其标示量的比值。常表示为效价的百分数。效价是从比较检品与标准品的生物活性而得。在不同的微生物效价测定中，效价计算的公式见后述。单位（unit,u）单位是衡量抗生素有效成分的具体尺度。各种抗生素的单位含义不同，在习惯上根据它们的实际发展情况而定，抗生素效价单位的具体表示方法见后述。标准品与国际单位(international unit,iu)抗生素微生物测定用的标准品，除国内的新品种外，凡已制备国际标准品的品种，在制备国家标准品时，均与国际标准品比较而定出效价。,二、抗生素的效价单位的表示方法,、质量单
7、位 以抗生素的生物活性部分质量作单位，微克（）单位，毫克单位。,、类似质量单位 以特定的纯粹抗生素盐类的质量作为单位。如纯粹金霉素盐酸盐及四环素盐酸盐（包括无生物活性的盐酸根在内）微克（）单位，毫克个单位。这是根据国际使用习惯而来的。,、质量折算单位 以特定的纯抗生素盐的质量为单位而加以折算。,、特定单位 以特定的抗生素样品的某一质量定为一单位。,第三节 管碟法测定操作,1.试验用菌液(见表4-4)、缓冲液、培养基的制备 按药典规定进行制备。,2.标准品与供试品溶液的制备 按药典规定制备标准品与供试品高低不同浓度溶液。(见表4-3和4-11)。,3.双碟的制备 制备底层及含一定量试验菌的菌层，
8、并安置小钢管。,4.滴加药液到小钢管内 将标准品、供试品溶液滴入相应的小钢管中。,5.培养 在恒温培养箱中培养至规定时间。,6.测量抑菌圈 可用手工测量或仪器测量。,7.计算结果 先进行可靠性测验,符合规定,再进行效价计算,标准品的称量 标准品的稀释标准品溶液,供试品的称量 供试品的稀释供试品溶液,缓冲液的制备,培养基的制备,底层20 ml菌层5ml,平板的制备,凝固后 凝固后,菌液的制备,加菌液,加小钢管,-,可靠性测验，计算结果 测量抑菌圈培 养,抗生素效价检定管碟法操作流程,第三节 管碟法测定操作,加陶瓦园盖,二、影响因素的控制,1直线斜率的控制斜率小，即抗生素浓度差异小，而抑菌圈的直径
9、差异大，灵敏度的准确性高。,2直线截距的控制直线截距决定于C、D、T、H诸因素，其中D、T值一般相当稳定，所以C、H是决定截距的主要因素。如将培养基厚度H减小，截距也随之减小，抑菌圈增大。据此可设计薄层培养基，可大大提高检验的灵敏度,3抑菌圈大小的控制抑菌圈的大小受L、H、C、D、T及A等诸因素的影响。抗生素总量MCVCAL，（A为管底面积、L为高度、V为管内体积、C为抗生素浓度）,可见抗生素浓度是影响抑菌圈大小的，若C不变，则r随V而变化，那么L或A均影响抑菌圈大小。因此抗生素浓度应准确，包括称量、稀释均应准确，稀释用的仪器、容器均应标准。,4培养基的厚度H、试验菌敏感度C、扩散系数D的影响
10、,H增大，r缩小；H减小，r增大。C常受加菌量及对抗生素耐药性等因素的影响而有所改变，从而影响r大小。T受细菌生长快慢的影响而引起r改变。D扩散快慢亦可使r改变，因此应注意选用敏感性的试验菌并保持其不变异，特别要防止染菌，制备菌层时含菌浓度要适宜，可采用预试验来确定；向小钢管内滴加标准溶液和供试溶液时要交叉进行，以免偏向。,5.剂量反应直线范围控制 直线范围在下列情况下会缩短：管径小、装量小；浓度低；因培养基或试验菌吸附或破坏抗生素等因素使小钢管中抗生素量下降，导致直线范围缩短，常使呈弧形。为此可用调整缓冲液的pH值，使抗生素稳定；调整培养基pH值；调整培养基的处方及除去杂质；选用更为敏感的试
11、验菌加以控制。,6.抑菌圈圆整及清晰度的控制抑菌圈常有破裂不圆，甚至无圈现象。这些情况的产生主要是由于向小钢管加抗生素溶液时有溅出或漏出；有时也可能因双碟或小钢管残留或污染有抗生素而造成的。如果污染杂菌或因菌层培养基温度过高，试验菌被烫死，均会使抑菌圈不圆整或破裂。,(2)抗生素的培养基内抗散系数不一所引起抗生素的培养基内抗散系数不一，如混有几种类型的抗生素、抗生素受缓冲液或受培养基内的杂质影响，或使其形成某种化合物，致使抗生素浓度总量发生变化。因此对培养基的原材料如胨、牛肉膏、酵母膏及琼脂等的选用极为重要。这些都可影响仰菌圈的大小和清晰度。,在某些情况下出现抑菌圈边缘模糊、类似锯齿状或双圈等
12、现象，主要由下列因素所引起：(1)试验菌培养物不纯所引起当试验菌培养物不纯，几种菌株，如菌种中杂有耐药性菌，使C含有C，、C，、C，等差异含有一同敏感度的，致使扩散系数紊乱。其次菌种中有不同生产时间的菌体，以致有不同的值，这些都能使抑菌圈边缘不清晰。,(3)小钢管内的抗生素浓度不断下降所引起当试验菌能吸附或破坏抗生素时，这种情况就更加严重，此时可出现双圈现象。,(4)不适当地延长培养时间所引起由于某些抗生素的抑菌圈边缘的菌群只是被抑制，当延长培养时限后，菌量增加，使抗生素敏感度降低。抑菌圈边缘菌群继续繁殖，导致抑菌圈变小或边缘模糊不清不整齐，如测定制霉菌素时，培养时间长，其抑菌圈边缘就不清晰或
13、不整齐。要控制培养时限，使抗生素培养基的浓度，恰当抑制实验菌，而在抑菌圈边缘的浓度能刺激试验菌生长，就能形成清晰的抑菌圈。,此外，对抗生素标准品和供试品同质的要求至为重要。因为效价测定设计是假定二者剂量反应直线是相互平行除操作影响外，无论是标准品中或供试品中若有其他抗菌性物质或影响抗菌活性的物质（加强或拮抗），均可使二者剂量反应直线不平行，对此必须注意。如供试品四环素制剂中含有维生素C时，在标准品中也应加入相应的维生素C，以保持标准品供试品的同质性，这样检验结果才是可行的，也才能准确。,三、操作技术要求,（1）防止抗生素污染 由于管碟法是微量的微生物分析法，故称量稀释除应满足用容量分析及仪器分
14、析进行定量分析的一般要求外，还应注意效价测定试验室内防止抗生素污染。效价测定滴加钢管的操作室内，地面，水平操作台，钢管放置器，钢管，墙壁以及各项玻璃用具，工作服，工作人员双手等，都要避免被抗生素污染。即使有微量抗生素的污染，往往使试验结果混乱。微量的抗生素还可以附着在尘埃上，随着空气流动散落在双碟培养基平板，钢管，钢管放置器上，有时可能是使抑菌圈破裂的原因。因此，要避免将抗生素溶液滴在地上或工作台上，如被污染时应及时清洁。在配制培养基或缓冲液时，亦应严防被抗生素污染。（2）操作次数序安排上的误差在一剂量法制备标准曲线时，双碟数量较多，滴加抗生素溶液至钢管的时间，各个双碟的时间基本一致。如滴加8
15、组稀释度双碟，可从中心浓度组开始向高，低二端交叉滴加。如稀释度为C1，C2，C3，C4，C5，C6，C7 及 C8，滴加次序可C4，C5，C3，C6，C2，C7，C1 及 C8。这样，可减少各组间抗生素扩散时间及试验菌生长时间的差异。尤以枯草杆菌在室温较高时，这种影响更为明显。此外，标准品与供试品的称量，应在相近的时间内称取，稀释后的溶液尽量在相同的条件下放置，并使放置的时间也相同，以减少误差。,滴加双碟小钢管的次序所致的误差，受操作者的熟练程度的影响，而且在方法设计上也是无法抵消的。因此，要求滴加迅速，如一组三个双碟18个小钢管的滴加时间，控制在1min以内较好。在操作很多检品时，以分批操作
16、为好，切勿同时放置几排双碟先滴好标准品溶液后滴加各批供试品溶液，这样使标准品与供试品溶液的扩散时间和细菌生长时间人为带来差异，引起误差。（3）测量抑菌圈应避免误差测量抑菌圈是本法取得试验结果的重要环节，目前多已采用抑菌圈面积测量仪测量以克服使用游标卡尺容易产生的主观误差。现国产抑菌圈面积测量仪主要有ZY-300IV型智能抑菌圈测量仪（由北京先驱威锋技术开发公司生产经销，图4-4）和CHB1型抗生素效价测量仪（北京海淀潮声技术开发公司开发，图4-5）。且经微机处理，能自动打印出效价及生物统计分析数据。,抑菌圈测量仪,教学重点：操作方法,结果判断,教学难点：复习旧课：,讲授新课第四节 二剂量法,一
17、、效价计算公式二剂量法效价计算公式经推导可得出供试品的效价计算公式。V=T1+T2 S1 S2（43）W=T2 T1+S2 S1（44）LgR=(W/V).I（45）R=lg1(W/V).I（46）pT=AT.R（47）Lg=(V/W).I（48）=lg-1.(V/W).I（49）,二、操作方法基本要点：高剂量抗生素溶液所形成的抑菌圈直径在2024 mm，个别抗生素的抑菌圈可在1824 mm；高、低剂量所形成的抑菌圈之差最好大于2 mm，有些抗生素的差数可较小；高、低剂量之比一般用2:1，当高、低剂量所致的抑菌圈差别较小时，可用高低剂量之比为4:1的比率。,(一)仪器与用具 1.操作室 2.双
18、碟 3.陶瓦盖 4.钢管 5.钢管放置器（图46）6.恒温培养箱 7.灭菌刻度吸管 8.玻璃容器 9.称量瓶,图46：钢管放置器（北京先驱威锋技术开发公司生产开发）,10.毛细滴管用玻璃拉制，管口光滑。11.天平 分析天平，感量0.1mg。12.抑菌圈直径（面积）测量仪（图4-4）（图4-5）。13.超净工作台用于菌种的接种或传代。超净工作台须置洁净工作室或半无菌室内。,(二)试液1.灭菌缓冲液剂应为分析纯，配制后应澄明，分装于玻璃容器内，经115蒸汽灭菌30min备用。2.磷酸盐缓冲液（pH6.0）3.磷酸盐缓冲液（pH7.0）4.磷酸盐缓冲液（pH7.8）5.磷酸盐缓冲液（pH10.5),
19、(三)培养基培养基中原料的质量对抑菌圈边缘清晰度及试验结果的精确度影响较大，因此应对原材料进行预试验，挑选适当的牌号使用。制成的培养基不应有沉淀，如产生沉淀，可在配制培养基后，置115，20 min溶化，趁热用纸浆减压或适宜方法过滤，调整pH值，分装灭菌备用。根据中国药典(2005年版)抗生素生物测定法中收载的不同处方培养基。按品种要求选用，具体配方可见教材后附录培养基。目前市场已有干燥培养基商品生产、供应。临用时按照使用说明书进行配制，但注意培养基的pH，应符合规定，否则必须校正后，灭菌备用。,（四）试验用菌种检定用标准菌种，由中国药品生物制品检定所提供为冷冻干燥菌种。,1.菌种的复苏 砂轮
20、刻痕，外壁碘酒消毒、75%酒精棉擦净，火焰烧灼，灭菌滴管吸肉汤滴在灼热管痕处使聚冷而炸裂。管口打开，另取灭菌滴管吸肉汤少许，将冻干菌块溶解，吸出菌液接种至普通肉汤内，或琼脂斜面置3537培养2224 h,观察菌苔形态、涂片，革兰染色镜检，呈典型菌形即可应用。,2.菌种的接种与保存 按无菌接种要求将细菌划在斜面的表面上，将已接种的细菌管置3537培养2224 h，真菌管一般置2425真菌培养箱内培养7 d。取出后放入冰箱保存，一般34周转种一次.,3.菌悬液的制备 依不同的菌来制备,（五）操作方法,1.称量 称量前，将标准品从冰箱取出，使与温室平衡；供试品应放于干燥器内至少30min方可称取。供
21、试品与标准品应用同一天平；吸湿性较强的抗生素，在称量前12更换天平内干燥剂。标准品与供试品的称量最好一次取样称取，不得将已取出的标准品或供试品倒回原容器内，标准品称量不可少于20mg，取样后立即将称量瓶及被称物盖好，以免吸水。称样量的计算：W=VCP式中W为需称取标准品或供试品的重量（mg）；V为溶解标准品或供试品制成浓溶液时用容量瓶的体积量（ml）；C为标准品或供试品浓溶液的浓度（U/ml或g/ml）；P 为标准品的纯度或供试品的估计效价(U/ml或g/mg)。,2.稀释 稀释操作应遵照容量分析的操作规程。从冰箱中取出的标准溶液，必须先在室温放置，使其温度达到室温后，方可量取。标准品与供试品
22、溶液的稀释应采用容量瓶，每步稀释，取样量不得少于2ml为宜，稀释步骤一般不超过3步。举例：取浓溶液1000u/ml。第一步取5ml（1000U/ml）50ml容量瓶100U/ml；第二步取5ml（100u/ml）50ml容量瓶10U/ml（H）；取5ml（100U/ml）100ml容量瓶5U/ml（L）。每次吸取溶液用刻度吸管，量取溶液前要用被量液流洗吸管23次，吸取样品溶液后，用滤纸将外壁多余液体擦去，从起始刻度开始放溶液。稀释标准品与供试品用的缓冲液应同一批和同瓶，以免因pH或浓度不同影响测定结果。稀释时，每次加液至容量瓶近刻度前，稍放置片刻，待瓶壁的液体完全流下，再准确补加至刻度。有关标
23、准品和供试品溶液的稀释可见表43。,3 双碟的制备 在半无菌室内进行，应注意微生物及抗生素的污染，培养基应在水浴中或微波炉中融化，避免直火加热。底层：用灭菌大口吸管（20ml）或其他灭菌分装器，吸取已融化的培养基20ml注入双碟内，等凝固后更换干燥的陶瓦盖，放于3537培养箱中保温，使易于摊布菌层。菌层:取出试验用菌悬液，按已试验妥的菌量按(2.2)法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径在1824mm；(3.3)法标准品溶液的中心浓度所致的抑菌圈直径在1518 mm的初试菌量，用灭菌吸管吸取菌悬液加入已融化并保温在水中(一般细菌4850，芽孢可至60)的培养基内，摇匀作为菌层用。用灭菌大口10m
24、l吸管或其他分装器，吸取菌层培养基5ml，使均匀摊布在底层培养基上，置水平台上并用陶瓦圆盖覆盖，放置20 30min，待凝固，备用。,4放置钢管 用钢管放置器，将干热灭菌的镊子或适宜方法将钢管装于玻璃管中，放于钢管放置器上，将双碟打开，放入双碟台上，托起双碟台，使钢管平稳落在培养基上，注意使各个钢管下落的高度基本一致，钢管放妥后，双碟静置510 min,使钢管在琼脂内稍下稳定后，再开始加抗生素溶液。5滴加抗生素溶液每批供试品取410个双碟，滴加溶液用毛细滴管或定量加样器，在滴加之前须用滴加液洗23次。滴加标准品及供试品溶液，因实验设计方法不同而异。(2.2)法,在双碟的4个钢管中分别成对角滴加
25、标准品(S)及供试品(T)高(H)、低(L)两种浓度的溶液。(3.3)法的6个钢管中间隔3个钢管中分别滴加标准品及供试品高、中(M)、低3种浓度溶液,并使相同浓度成对角。滴加溶液的顺序:(2.2)法SHTHSLTL；(3.3)法SHTHSMTMSLTL。滴加溶液至钢管口平满，注意滴加溶液间隔不可过长，因溶液的扩散时间不同影响测定结果。,每份滴加的溶液为1单位，但双碟数每次不超过5个，如1份溶液滴加双碟数目多，可分次滴加。每种溶液各用1支毛细滴管。滴加完毕，用陶瓦盖覆盖双碟，平稳置于双碟托盘内，双碟叠放不可超过3个，避免受热不均，影响抑菌圈大小，以水平位置平稳移入培养箱中间位置，3537或303
26、2(依试验菌的要求选用)，培养至所需时间。6抑菌圈测量将培养妥的双碟取出，打开陶瓦盖，将钢管倒入盛有1：1000苯扎溴铵溶液或其他消毒液内，换以玻璃盖，按样品号排妥；测量抑菌圈前应检查抑菌圈是否圆整，如有破圈或圈不圆整应将该碟弃之，切忌主观挑选抑菌圈及双碟，使结果造成偏倚。测量可用ZY-300型抑菌圈面积自动测量分析系统（图44）等测定仪进行，也可用游标卡尺；使用游标卡尺测量时，眼睛视线应与读数刻度垂直，用游标卡尺的尖端与抑菌圈直径的切点成垂直方向测量。,（六）记录与计算1.试验记录 应包括抗生素的品种、剂型、标示量、生产厂、批号、检查目的、检验依据、检验日期、温度、湿度，标准品与供试品的称量
27、、稀释步骤与核对人，抑菌圈测量结果。当用游标卡尺测量抑菌圈直径时，应将测试数据以框图方式顺双碟数记录。当用测量仪测量面积或直径时，应将电脑测试、计算、统计分析的打印纸贴附于记录中。2.计算 见本章第四节。,（七）结果判断1.可靠性测验当用卡尺测量后的结果，将参数输入电脑，用专用（2.2）法和（3.3）法的软件程序（本书附有统计软件光盘）进行统计学处理。如用测量仪测量抑菌圈时，测量与统计学处理一次完成，统计学分析按中国药典生物测定统计规定进行可靠性测量。（2.2）法要求直线回归、剂间P0.05；（3.3）法除（2.2）的规定外，尚考查二次曲线和反二次曲线P0.05，试验结果认为可靠，方可进行效价
28、和可信限率计算。2.可信限率考核实验的精密度，除药典各论另有规定外，本法的可信限率不得超过5%。上述各项规定都能符合者，试验结果成立。3.实验计算所得效价低于估计效价的90%或高于估计效价的110%，则检验结果仅作为初试，应调整供试品估计效价，予以重试。4.效价测定一般需双份样品，平行实验以便核对。对不符合规定的样品应至少有2次符合规定的结果，才能发出报告。,第五节二剂量法的误差分析,通过对试验结果的统计分析和可信限及可信限率的计算，来判断试验结果是否可靠或是否需要复试。中国药典规定对抗生素的效价测定结果，都要进行有关的误差分析。下面以某批红霉素的效价测定为例，进行效价计算、误差分析、可信限率
29、计算。,第六节 供试品测定操作一、原料药品是指大包装或半成品干燥粉末或结晶性粉末，不含辅料，一般测定纯度（U/mg），根据抗生素品种及厂方提供的效价进行估计单位，称取样品，估计效价尽量接近真实效价，如估计效价与真实效价距离较远时，可先作初测试验，按初测结果来估计效价，再作精密测定。原料药品一般皆以干燥品计算效价，先测其含水的供试品效价，再根据供试品的水分或干燥失重的结果折算成干燥品的效价。干燥品效价（U/mg）=含水效价（U/mg）/（1-供试品水分含量%）,二、制剂的测定1.粉针剂指注射用灭菌粉末，用小瓶橡皮塞铝盖分装或熔封在安瓶内，均须测定整瓶效价及纯度（U/mg）。取装量差异项下的内容物
30、，称出适量（50mg以上）至称量瓶内，按估计效价进行溶解、稀释，测出每1mg的单位数，再根据装量差异项下的每瓶平均重量计算出整瓶的效价。2.水针剂水针剂系抗生素无菌水溶液，标示量以每毫升含效价单位数计，效价测定时启开安瓶或小瓶盖后，用干燥的标准吸管吸取一定量供试品，将吸管外壁用滤纸擦净，再弃去过多的供试品，沿着容量瓶口内壁缓缓放入已盛有一定溶剂的容量瓶内，以免抗生素结晶析出，振摇，继续加溶液至刻度，摇匀，再稀释至规定的浓度。,3.片剂分为素片、糖衣片和肠衣片。素片 称取20片的总量，求出平均片重，研细混合均匀后，精密称出适量（约相当1片的重量）至称量瓶中，然后根据每片的标示量，用规定的溶剂溶解
31、，稀释至容量瓶中。注意之点：研磨时要注意环境干燥，可在干燥操作柜内操作，研磨要迅速，避免吸水，因片剂内含赋形剂较多，如稀释时赋形剂浮于溶液表面，量取体积时应读取赋形剂层下的溶液度，如沉淀较多，应待其下沉后量取其悬浮液，有些片剂辅料吸附抗生素，需加注意。为节约供试品，可与片剂的重量差异检查结合进行。糖衣片、肠衣片 取规定的供试品数片，放于玻璃乳钵中，研细并根据标示量及规定的溶剂边研磨边溶解，移置于放有小漏斗的容量瓶中，稀释至刻度、摇匀、静置，使赋形剂下沉而抗生素已溶解在溶液内，精密吸取容量瓶中的悬浮液适量，作进一步稀释。,4.胶囊剂取装量差异试验后的内容物，混合均匀，精密称出约相当平均1个胶囊的
32、量，注意研细，按规定的溶剂溶解并移置至所需的容量瓶内，稀释至刻度，摇匀，如供试品中含较多的辅料，照糖衣片项下方法进行。5.软膏剂或眼膏剂将软膏剂或眼膏剂软管的封口切开，擦净管的外壁，置于干燥器内约1 h，取干燥的分液漏斗，将膏剂软管在天平上称重，带手套取出软管将膏剂挤入洁净的分液漏斗内，约2g，再称其膏剂软管的重量，前后称量之差即为分液漏斗内膏剂供试品的重量，溶解膏剂的溶剂可用不含过氧化物的乙醚或石油醚，并且所提取的抗生素应不溶于或微溶于该有机溶剂中，以避免提取过程中抗生素的损失。按规定量加提取溶剂至分液漏斗中，振摇，使基质溶解后，用规定的缓冲溶液使抗生素被提到水相溶液中，用缓冲溶液提取3次，合并3次提取液，置所需的容量瓶内，加缓冲溶液至刻度，摇匀，再稀释至规定的浓度。,标准品的称量,标准品,返回,试验用菌液、缓冲液、培养基、标准品与供试品溶液的制备,制备过程,返回,抽提,加入乙醚进行抽提,共抽提三次(取其下层),返回,双碟的制备,制备底层,制备菌层,放置小钢管,返回,滴加药液到小钢管内,返回,在恒温培养箱中培养至规定时间（盖上陶瓷盖）,返回,测量抑菌圈,测量过程（活动）,方法一,测量仪器,方法二,测量过程（活动）,返回,教学总结：抗生素概念、医疗用抗生素特点、抗生素的主要作用机制。,
