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1、东 芝 生 化应 用 培 训,2004年3月,主 要 内 容,非线性定标方式的选用双波长的设定异常结果的分析常见问题的解答,非线性校准方式的选用,非线性校准方式的选用,非线性校准方式的选用,Logit-4：4参数对数 Logit-5：5参数对数指数函数：5参数指数样条函数:三次方的样条函数,非线性校准方式的选用,非线性校准方式的选用,非线性校准方式的选用,Logit-4：（4参数对数）KcY=+Y0 1+exp（-（a+blnX）Logit-5：（5参数对数）KcY=+Y0 1+exp（-（a+blnX+Xc）,非线性校准方式的选用,指数函数：（5参数指数）Y=Kcexp（alnX+b（lnX
2、）2+c（lnX）3）+Y0 Y：吸光度 X：浓度 Y0：基值（标准浓度为0的值）Kc：无限大浓度标准与Y0间的差（范围参数）a,b,c,d:测定非线性组分的因数 样条函数:（三次方的样条函数）F(X)=aX3+bX2+cX+d 用上述三次多项式采用内插法进行,非线性校准方式的选用,得到好的非线性校准曲线的必要条件 根据实验的校准曲线正确选择校准方式 合理选择校准物 校准曲线的形状 对实验结果准确性的要求 校准物数目越多，得到的结果越准确。校准物的浓度间隔由每种校准曲线来决定。校准物的浓度间隔影响反应准确度。校准物浓度应覆盖测定实验范围。,双 波 长 的 使 用,双波长的使用,双波长的作用：用
3、于消除反应时的干扰因素。干扰因素：1 分析溶液混浊 2 存在较大的干扰物质的光吸收 3 仪器及电源的噪音,双波长的选择：1 分析溶液混浊 选择副波长时尽量接近主波长 2 消除干扰物质的光吸收 干扰组分在两个波长处有相同的吸光度值 3 仪器及电源的噪音,双波长的使用,影响结果准确的因素,病人标本试剂及校准品仪器人员,结 果 异 常,零 或 负 值？,结 果 异 常,零 或 负 值？,可能的原因：,结 果 异 常,零或负值,硬件：样品针堵塞 管路软件：正常范围/检测范围 主副波长 因数（酶因数/斜率因数）定标次数 反应方向输入错误,结 果 异 常,零或负值,其它：试剂位置是否正确 该试剂是否曾冷藏
4、结冰 样品量不足,结 果 异 常,重 复 性 不 好？,结 果 异 常,重 复 性 不 好？,可能的原因：,结 果 异 常,重复性不好,硬件：注加器泄露 样品针堵塞 灯泡亮度不稳 清洗塔是否工作正常 恒温水浴有异物 检查反应杯,重复性不好,结 果 异 常,软件：测定时间是否合适 定标因数是否过大 其它：试剂是否正确 试剂是否失效，有无异物 交叉污染 标准物是否正确,交 叉 污 染,交 叉 污 染,常见原因：1 仪器清洗机构管路堵塞 2 清洗剂使用不当 3 水质不良 4 样品针/试剂针不清洁 5 特殊样品 6 相邻试剂有干扰,交 叉 污 染,解决方法：1 仪器清洗机构管路堵塞 浓缩废液管是否堵塞
5、 干燥棒是否需要更换 2 清洗剂使用不当 清洗剂是否使用规定品牌 定期清洗是否严格执行,交 叉 污 染,3 水质不良 进水过滤阀是否过脏 纯水装置是否需要更新滤芯或交换树脂 4 样品针/试剂针/比色杯不清洁 调整分析项目的顺序 增加特殊清洗程序或启动OSS功能 定期对样品针/试剂针/比色杯进行清洗,交 叉 污 染,5 特殊样品 样品粘稠度过高6 相邻试剂有干扰 改变仪器添加试剂的顺序,交 叉 污 染,质控结果与病人结果不符,质控数据的方法是否与该试剂相符质控品是否被反复冻溶试剂的正常值范围是否发生变化如果有其它质控品可对比测定调整斜率因数,以室间质控结果为准,常 见 问 题,结果小数点的设置
6、定标次数的设定 TBA-120FR水空白（试剂空白）设置 注意大小写（Water）TBA-120FR清洗剂位置的设定 TBA-120FR Database与Run画面 盘号的对应,血 清 指 数,血 清 指 数,血 清 指 数,血 清 指 数,血 清 指 数,血 清 指 数,血 清 指 数,血 清 指 数,Example of setting,血 清 指 数,最 大 速 率 法,最 大 速 率 法,首先计算实验参数设定的读点时间内每个测光点间的吸光度变化，并确认吸光度变化最大值。其次对此时间两侧的比色点进行检查，确认此吸光度变化相对于最大吸光度变化落在实验参数设定的允许最大速率值（%）内。,用
7、此时间的数据进行最小二乘法计算每分钟吸光度变化。然而，如果最大吸光度变化小于缺省值0.33mAbs/min，将用所有数据进行最小二乘法计算每分钟吸光度变化，噪音将最小。注意：加入试剂后无噪音的第一个测光点应作为测光点设定在读点时间内，至少应设定4个测光点，必须设定允许的最大速率值（%）。,最 大 速 率 法,最 大 速 率 法,最 大 速 率 法,参数设定中常见的问题,参数设定中常见的问题,超出定标范围的结果计算：如果样品结果超出定标范围，计算后在样品结果加有错误号码“？”。超出定标血清浓度的定标曲线由最后两个定标点进行延伸。用百分数设定此线的可靠范围，假设定标曲线的吸光度（吸光度变化）范围为
8、100%。,A,B,当设定YES-50%,“YES”表示此功能使用，假设最高浓度的定标物的吸光度与试剂空白的吸光度差为100%，设定范围A至B百分数。,参数设定中常见的问题,吸光度窗口：表示常规样品、空白和定标物在测定波长下允许的吸光度范围的下限和上限。在测定读点时间内超出设定范围的数据不用于结果计算。,Main-4 OPTIONS-2 TEST PARAMETERS,Abosorbance Window,Primary Wavelength is used,Color Correction,参数设定中常见的问题,吸光度调整点：设定的吸光度窗口可由样品颜色的吸光度进行补偿。对于参数“吸光度调整
9、点”，用周期数设定检查样品颜色的点。对于双试剂系统，建议设在“5加第二试剂前。对于单试剂系统，建议设在加样品后。如果在每个括号内输入“0”，不进行补偿。,参数设定中常见的问题,校准曲线检查：正向斜率：上升曲线的每个定标点的吸光度为正向。负向斜率：下降曲线的每个定标点的吸光度为负向。逐渐增加：邻近的定标点间的吸光度变化逐渐增加。逐渐降低：邻近的定标点间的吸光度变化逐渐降低。,参数设定中常见的问题,参数设定中常见的问题,校准曲线检查：指定校准曲线的斜率方向和定标点间吸光度变化的上升或下降，检查产生的校准曲线是否满足这些设定。如果没有满足这些设定，用此曲线测定的常规样品结果加有错误号码“I”。当设定校准曲线检查为“0”时，不使用此功能。此时括号内无显示。,Main-4 OPTIONS-2 TEST PARAMETERS,Ratio Check,讨 论,？,
