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1、乙型肝炎标志物相关知识培训,主要内容,（一）乙肝病毒的病原学、流行病学（二）乙型肝炎病毒血清标志物指 标及意义（三）我公司的乙肝试剂现状,一、乙肝病毒的病原学及流行病学,1.1 乙肝病毒的流行现状。1.2 乙肝病毒的形态和结构。1.3 乙肝病毒（HBV）的基因结构。1.4 乙肝的传播途径。,1.1 乙肝病毒的流行现状,1.1.1全世界乙肝病毒感染的流行概况1.1.2我国HBV感染流行现状1.1.3乙肝亚型的地理分布 1.1.4乙肝的传播途径,1.1.1全世界乙肝病毒感染的流行概况,1.1.2我国HBV感染流行现状,我国是HBV感染的高流行区。我国HBV感染率概况为：抗HBc及或抗HBs阳性：6
2、0非感染人群：26慢性乙型肝炎：2表面抗原阳性的慢性无症状HBV携带者：10表面抗原阴性的慢性无症状HBV携带者：2,资料来源：骆抗先，乙型肝炎基础和临床第二版,1.1.3乙肝亚型的地理分布,ayw多见于非洲、东地中海、中东及巴基斯坦；adw多见于北欧及美洲；adr多见于东南亚及远东，adw及adr多见于印尼、马来西亚、新几内亚及泰国 我国则具有一定的民族性，汉族人以adr为主，adw次之蒙古族、维吾尔族、回族等兄弟民族几乎都是ayw亚型，ayr亚型极其少见，而adr亚型几乎没有。,1.1.4传播途径,血液传播、（输血、血制品、医疗器械等）,日常生活（伤口、共用刀具、消化道粘膜破损或溃疡等）,
3、母婴 传播,性传播,乙肝病毒的传播途径主要有：,澄清对传播途径认识的误区,HBV并不经口途径传播。依据是：HBV不随粪便排出，除非有消化道出血者。试验证明：污染HBsAg阳性血液的粪便保存数日后HBsAg即转阴。未见有经水、食物污染而引起的乙肝暴发流行。蚊、臭虫等吸血昆虫在HBV传播中的作用尚无确实的证据。,高危人群,母亲是HBV感染者的婴儿乙肝患者的家庭成员吸毒者监狱犯人性传播疾病病人血液透析病人医护人员,1.2 乙肝病毒的形态和结构,1.2.1 HBV的基本（电镜）结构1.2.2 HBV的基因结构,1.2.1HBV形态结构,大球形颗粒（Dane颗粒）,管形颗粒,小球形颗粒,Dane颗粒的基
4、本结构示意图,HBsAg,HBcAg,DNAP,（外膜蛋白）,（核衣壳蛋白）,HBV DNA,1.2.2 HBV基因结构,pre-s1,pre-s2,S,P,C,pre-c,X,HBV DNA 3.2 kb,pre-S1 pre-S1蛋白pre-S2 pre-S2蛋白S HBsAgpre-C HBeAgC HBcAgP DNAPX HBxAg,HBsAg,pre-S2,pre-S1,二、乙型肝炎病毒血清标志物指标及意义,2.1 HBV血清标志物及其临床意义2.2 介绍几个临床乙肝检测的概念2.3 临床常见乙肝血清标志物反映模式,2.1 HBV血清标志物及其临床意义,肝功能(主要为丙氨酸氨基转移
5、酶(ALT)乙肝病毒感染标志物 HBV-DNA 两对半:抗原 抗体 外膜 HBsAg HBsAb 核壳分泌蛋白 HBeAg HBeAb 核壳结构蛋白HBcAb 肝组织病理学检查,ALT的意义,谷丙转氨酶（ALT）主要存在于肝细胞中。当肝脏发生炎症、坏死时，ALT就会从肝细胞内大量释放入血，导致血清中ALT升高，因此ALT升高是判断肝细胞损害的一个敏感指标。但是除了病毒性肝炎外，其它类型的肝炎或肝脏疾病，ALT也会升高。,HBV-DNA的意义,DNA是基因，因此HBV-DNA是HBV的遗传物质，当HBV侵入肝细胞后，就会以HBV-DNA为模板，合成新的HBV颗粒并释放入血，故HBV-DNA是病毒
6、复制的一个重要指标。,肝组织病理学检查,肝组织病理学检查是“金标准”：明确诊断 衡量肝脏炎症活动度 衡量纤维化程度 决定治疗方案，预测药物疗效,对肝病而言肝组织学检查是比血清ALT 更灵敏而精确的指标,乙肝病毒感染血清标志物,抗原 抗体外膜 HBsAg HBsAb核壳分泌蛋白 HBeAg HBeAb核壳结构蛋白 HBcAg HBcAb DNA HBV-DNA,（1）HBsAg,出现时间：HBV感染后26个月（潜伏期）,持续时间：,急性自限性肝炎：6个月内可消失,慢性肝炎或慢性HBsAg携带者：可持续阳性,曾用名：HA、澳抗,HBsAg 有抗原性而无传染性,HBV,S 基因,整合,肝细胞DNA,
7、持续表达,“空心汤团”,HBsAg,HBsAg 的亚型,adr,adw,ayr,ayw,长江以北,长江以南,新疆、西藏、内蒙等,（2）抗-HBs,出现时间：急性感染后期或HBsAg 消失后,（空白期 或 窗口期）,抗-HBs为保护性抗体（中和抗体）,其出现标志着HBV感染进入恢复期,抗-HBs 对相同 HBsAg亚型的HBV再感染有免 疫力，但对不同亚型的HBV保护力不完全。,（3）HBeAg,HBeAg是HBcAg的降解产物,HBV C基因,前C区,C 区,前C/C 蛋白,HBeAg,HBcAg,表 达,切割、加工,分泌到细胞外,HBeAg只存在于血清中,HBeAg是病毒复制和传染性的标志,
8、血清HBeAg阳性者中，HBV DNA阳性率为92%左右,（4）抗-HBe,出现时间：随着HBeAg的消失而出现,抗-HBe的出现标志着病毒复制减少、传染性降低,抗-HBe阳性者中，16.3%30%左右HBV DNA仍阳性 可能与前C基因变异有关,易加重病情、易演变为肝硬化,-干扰素疗效亦较差,（5）抗-HBc,HBcAg主要存在于HBV感染的肝细胞内或DANE颗粒 核心中，到血液中即被降解为HBeAg。,一般血清学方法检测不到HBcAg，而只能检测到抗-HBc,抗HBc-IgM：是HBV近期感染或慢性感染者病毒活动的标志,抗HBc-IgG：凡“有过”HBV感染者均可阳性,HBcAg的免疫原性
9、最强,持续时间：618个月,可终身阳性,常规检测的HBV血清标志物的基本解释,HBsAg HBV感染，但未必是急性肝炎或者 慢性病变活动的病原。抗HBs 感染后免疫；对疫苗的免疫应答；或HBIG的被动免疫HBeAg 反映HBV复制，有病毒血症，血液高传染性抗HBe ALT持续正常者表示HBV低复制或不复制，HBsAg(+)血液低传染性。ALT波动者表示病毒变异。抗HBc 低滴度表示过去感染；高滴度表示现行感染。IgM抗HBc 高滴度表示急性或近期感染；活动性病变可出现低滴度。,来源：骆抗先，乙型肝炎基础和临床，第二版,2.2介绍几个概念：,“两对半”,血清抗原抗体转换率：HBeAg 抗-HBe
10、,“转 阴”,常用指标：血清HBeAg抗原抗体转换率 HBV DNA 阴转率,2.3 临床常见乙肝血清标志物反映模式,来源：骆抗先，乙型肝炎基础和临床，第二版,三、我公司乙肝五项产品现状,3.1各项的检测方法及生物所和临检中心质量要求。3.2我公司的试剂的基本情况3.3国内主要厂家试剂的的对比情况3.4临床操作及售前、售后服务过程中的注意事项3.5临床常见问题的分析,3.1各项的检测方法及国家标准。,1 乙肝表面抗原（HBsAg）：双抗体夹心法。国家标准:特异性参比：20/20 阳性参比：3/3 灵敏度参比：adr0.5ng/ml adw1ng ay1ng 精密性参比：Cv1 5 临检中心行业
11、标准：0.5ng 2 乙肝表面抗体（抗-HBs）：双抗原夹心法。国家标准:特异性参比：20/20 灵敏度:10mIu 精密性参比：Cv 15 临检中心行业标准:30mIu,3.1各项的检测方法及国家标准。,3 乙肝E抗原（HBeAg）：双抗体夹心法。国家标准:特异性参比：15/15 阳性参比：9/10 灵敏度参比：1#1:64 2#1:128 3#1:32 精密性参比：Cv20 临检中心行业标准：2 NCu 4 乙肝E抗体（抗-HBe）：竞争抑制法。国家标准:特异性参比：15/15 阳性参比：9/10 灵敏度参比：61#1:32 57#1:32 55#1:32 精密性参比：Cv20 临检中心行
12、业标准：4 Ncu,3.1各项的检测方法及国家标准。,5 乙肝核心抗体（抗-HBc）：竞争抑制法。国家标准:特异性参比：15/15 阳性参比：14/15 灵敏度参比：2#1:32 3#1:8 4#1:16 精密性参比：Cv20 临检中心行业标准：2 Ncu,3.2我公司的试剂的基本情况,A 操作简单。B 结果直观。C 特异性好。D 显色快且稳定。E 临床符合率高。,3.3国内主要厂家试剂的的对比情况,HBsAg,抗-HBs,HBeAg,抗-HBe,抗-HBc,各厂家的比较结果,1 前三项：KH本地高，假阳性偏多。灵敏度及个别阳性OD值较LC高。2 后两项：LC阴性OD值高于KH，但阳性率低于K
13、H。3 整体五项：KH与LC均存在特殊模式且KH比LC偏多。4 外观：KH的触感及视感好于LC。5 品牌：KH较LC高。,3.4注意事项,试剂盒自冰箱中取出后应置室温平衡30分钟以上。实验前，仔细阅读说明书，严格按照反应时间及温度孵育。不同批试剂组分不得混用。手工洗板时避免孔内液体外溢，以避免相互污染，造成假阳性。实验物品及试剂盒均按传染品处理。使用后的剩余试剂及时回收至4度冰箱。,3.5常见问题,1 忘加或错加酶标结合物。2 漏加底物或显色剂或把终止液当成底物或显色剂加入。3 显色温度不够。4 操作前没看，拿错包被板。,白板即整板没颜色的常见原因,花板即显色不均匀、偏差大,1 本批标本弱阳性
14、多。2 手工洗板时，洗涤不均一，或机洗时部分孔堵塞或不彻底。3 部分标本处理不好，有溶血或纤维蛋白析出。4 显色时间长。5 试剂盒 的灵敏度高。,显色浅即整体反映弱,1 运输过程中温度过高且时间长，或试剂在冰箱中保存时贴壁结冻。2 试剂盒和样品没有平衡室温。3 洗涤次数太多，洗涤时间太长。4 温育时间不够和显色温度过低。5 加样量不足。,显色偏高即整体反映性强,1 试剂被污染变色2 加样量过大。3 洗板次数不够。4 温育或显色时间长，温箱温度偏高。5 试剂盒灵敏度偏高。,实验结果与实际分析结果不一致,1 以上原因在不同项中出现均可导致结果与实验分析不一致的情况。2 实验标本比较特殊，其临床不确定。3 操作人员改变。4 实验室仪器操作程序改变。5 部分试剂出现问题出现假阳性或假阴性。,出现假阳性,本底高,1.未按说明书正规操作.2.加样时间过长3.需稀释比例不够4.标本污染、溶血、红细胞、纤维蛋白含量过多等标本因素5.洗板不彻底5.判断有误6.试剂盒本身有问题,出现假阴性,1.未按说明书正规操作2.加样量,反应时间、温度不够3.漏加，错加标本或试剂4.显色时间及温度不够5.洗板过量6.判断有误7.试剂盒本身有问题,出现特殊模式,1.临床确实存在不同的模式2.操作不规范3.判断有误4.特殊人群的存在5.S基因变异及亚型的感染,
