研究生毕业论文三七药材农药残留量研究演讲稿.ppt

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1、1,SPE-GC/MS测定三七药材、三七三醇皂苷和三七通舒胶囊中20种农药残留量的研究,导师：XXX学生：XXX专业：药剂学XXXX年XX月,CHENGDU UNIVERSITY OF TCM,2,报 告 概 要,3,一、引 言,国内外研究现状：,4,一、引 言,项目研究的意义：,5,一、引 言,项目研究的创新点：,6,二、实验仪器与材料,1.实验仪器：*Agilent 7890A 气相色谱仪*Agilent 5975C 质谱仪*Sartorius BP211D 十万分之一分析天平*METTLER AE240 万分之一分析天平*Waters 固相萃取仪*LifeSciences Caliper

2、 自动氮吹仪*IKA MS3 数码涡旋振荡仪*HY-2A 往复振荡器*Gilson Pipetman 系列移液器*Agela ODS C18 固相萃取柱*Agela Florisil 固相萃取柱*Agela PestiCarb/NH2 固相萃取柱,7,二、实验仪器与材料,2.标准品：The 20 pesticide standards and internal standard,8,二、实验仪器与材料,3.供试品：The serial numbers and lot numbers of 3 types of samples,9,二、实验仪器与材料,4.试剂：*色谱纯：乙腈，正己烷，丙酮，乙酸

3、乙酯，甲苯。*分析纯：无水硫酸钠。*高纯氦气（纯度99.999%）。,10,三、实验方法与结果,1.标准品溶液和内标溶液的制备：根据各农药的响应值，配制各农药 标准品溶液和内标溶液。,11,三、实验方法与结果,（1）标准品储备溶液和混合标准品溶液的制备：取一定量的20种农药标准品用乙酸乙酯配制20种农药的单标溶液和混标溶液。结果详见下表。,12,The weighting amounts and the concentration of 20 pesticide standards,13,三、实验方法与结果,（2）内标储备溶液和工作溶液的制备：内标储备溶液的制备：精密称取三硫磷标准品一定量置于

4、100ml容 量瓶中，加入乙酸乙酯溶解再定容至刻度，混匀即得。内标工作溶液的制备：精密移取内标储备液一定量置于50ml容量 瓶中，加入乙酸乙酯定容至刻度，混匀即得。The weighting amounts and the concentration of internal standard,14,三、实验方法与结果,2.色谱、质谱条件的确定：,色谱柱的选择：HP-1MS毛细管柱(30m250m0.25m)HP-1MS毛细管柱(30m320m1m)DB-35MS毛细管柱(30m320m0.25m),进样口温度的选择：230 240 250 260 270,15,(2)质谱条件的选择,特征离子的

5、确定,离子源温度的选择,三、实验方法与结果,SCAN模式选择定性、定量离子：三至四个、丰度高、质量数大、干扰小,230、240、250、260,16,三、实验方法与结果,The TIC of 21 pesticides(including internal standard)at SCAN mode,17,The retention time,quantitative and qualitative ions and their relative abundance of 21 pesticides(including internal standard)and the starting ti

6、me of SIM,18,(3)小 结,色谱条件:,色谱柱 HP-1MS毛细管色谱柱（30m320m1m）柱温升温程序 80（1min）15/min 180 3/min 205（10min）5/min 270（3min）30/min 280（9min）载气 高纯氦气载气速度 1.0ml/min（0-44min），3.0ml/min（44-63min）进样方式 不分流，1.5min后打开分流阀进样口温度 260进样量 2l,三、实验方法与结果,19,三、实验方法与结果,质谱条件：离子源：电子轰击（EI）源；电离能量：70eV；离子源温度：250；接口温度：280；四级杆温度：180；溶剂延迟：1

7、4min；扫描模式：选择离子监测（SIM），1个定量离子，2-3个 定性离子。所有离子按各农药保留时间的先后顺序，分时段分别检测。,20,三、实验方法与结果,3.供试品溶液的制备：,21,三、实验方法与结果,（1）提取溶剂的选择：考察对象：乙腈、乙酸乙酯、丙酮、石油醚（6090）。评价指标：20种农药的回收率。方法：空白加标回收率试验。Effect of 4 solvents for the recoveries of 20 pesticides in Panax Notoginseng、PTS and SanQiTongShu Capsules 由上表可知，采用丙酮提取时20种农药的回收率均

8、在70%-120%范围内，故提取溶剂选择丙酮。,22,三、实验方法与结果,（2）提取方法的选择：考察对象：振荡提取法、超声提取法。评价指标：20种农药的回收率。方法：空白加标回收率试验。Effect of 2 methods for the recoveries of 20 pesticides in Panax Notoginseng、PTS and SanQiTongShu Capsules 由上表可知，采用振荡提取时20种农药的回收率在70%-120%范围内，故提取方法选择振荡提取法。,23,（3）净化方法的选择：考察对象：柱层析法、固相萃取法（SPE）。评价指标：20种农药的回收率。方

9、法：空白加标回收率试验。,三、实验方法与结果,24,三、实验方法与结果,（3）净化方法的选择：Effect of different combinations of SPE columns for the recoveries of 20 pesticides in Panax Notoginseng、PTS and SanQiTongShu Capsules 最终三七药材的样品净化方法为依次通过C18柱、Florisil柱和PestiCarb/NH2串联柱，三七三醇皂苷和三七通舒胶囊的样品净化方法为依次通过Florisil柱和PestiCarb/NH2串联柱。,三、实验方法与结果,25,三、

10、实验方法与结果,（4）小结：三七药材供试品溶液的制备：提取 药材粉末2g 丙酮30ml，振荡60min，滤过 滤液 40氮吹 浓缩液。净化 浓缩液 C18柱，乙腈15ml洗脱 洗脱液 40氮吹 浓缩液 Florisil柱，正己烷丙酮（9:1）15ml洗脱 洗脱液 40氮吹 浓缩液 PestiCarb/NH2串联柱乙腈-甲苯（3:1）25ml洗脱 洗脱液 40氮吹 残渣 内标工作溶液40l、乙酸乙酯960l，滤膜滤过 续滤液（供试品溶液）。,26,三、实验方法与结果,三七三醇皂苷原料药供试品溶液的制备：提取 粉末2g 丙酮30ml，振荡60min，滤过 滤液 40氮吹 浓缩液。净化 浓缩液 Fl

11、orisil柱，正己烷丙酮（9:1）15ml洗脱 洗脱液 40氮吹 浓缩液 PestiCarb/NH2串联柱乙腈-甲苯（3:1）25ml洗脱 洗脱液 40氮吹 残渣 内标工作溶液40l、乙酸乙酯960l，滤膜滤过 续滤液（供试品溶液）。,27,三、实验方法与结果,三七通舒胶囊供试品溶液的制备：提取 胶囊内容物2g 丙酮30ml，振荡60min，滤过 滤液 40氮吹 浓缩液。净化 浓缩液 Florisil柱，正己烷丙酮（9:1）15ml洗脱 洗脱液 40氮吹 浓缩液 PestiCarb/NH2串联柱乙腈-甲苯（3:1）25ml洗脱 洗脱液 40氮吹 残渣 内标工作溶液40l、乙酸乙酯960l，滤

12、膜滤过 续滤液（供试品溶液）。,28,三、实验方法与结果,方法学考察,系统适应性试验,检测限和定量限,线性范围考察,4.方法学研究：,回收率试验,重复性试验,精密度试验,专属性试验,耐用性试验,29,三、实验方法与结果,对于定量离子相同的农药，R1.5。按内标三硫磷计算不低于:n=5.54(tR/W1/2)2=3105 定量离子色谱峰：0.95T1.05,分离度,拖尾因子,理论塔板数,系统适应性试验：,30,三、实验方法与结果,检测限和定量限：,信噪比等于3(S/N=3)的 目标化合物含量(mg/kg),检测限定量限,信噪比等于10(S/N=10)的 目标化合物含量(mg/kg),31,LOD

13、 and LOQ of 20 pesticides in 3 types of sample matrices,32,三、实验方法与结果,线性范围考察：在6份等量三七药材空白基质中各加入混合标准品溶液10l、30l、50l、100l、200l、500l，然后各加入等量内标，得到三七药材基质标准工作溶液、，进样测定。以各标准品溶液浓度为横坐标，各标准品峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标，绘制三七药材基质标准曲线。三七三醇皂苷和三七通舒胶囊基质标准曲线的制备方法同上。,33,Linear range,regression equation and correlation coefficient of

14、 20 pesticides in Panax Notoginseng matrix,34,Linear range,regression equation and correlation coefficient of 20 pesticides in PTS matrix,35,Linear range,regression equation and correlation coefficient of 20 pesticides in SanQiTongShu Capsules matrix,36,三、实验方法与结果,回收率试验：对20种农药进行高、中、低 三个浓度的回收率试验，每个浓 度

15、水平平行测定3份。在三种三七 阴性样品中依次加入高、中、低 三个不同浓度的混合标准品溶液 后，处理样品，进样测定。,37,Recoveries of 20 pesticides in Panax Notoginseng(n=3),38,Recoveries of 20 pesticides in PTS(n=3),39,Recoveries of 20 pesticides in SanQiTongShu Capsules(n=3),40,三、实验方法与结果,重复性试验：取三七药材（批号：070401）样品2g，按前三七药材供试品溶液制备方法处理样品，平行测定6份。,41,Repeatabil

16、ities of Panax Notoginseng sample(n=6),三、实验方法与结果,42,三、实验方法与结果,精密度试验：分别取三七药材、三七三醇皂苷和三七通舒胶囊的基质标准工作溶液，连续进样6次。,43,Precisions of every reference in Panax Notoginseng matrix(n=6),44,Precisions of every reference in PTS matrix(n=6),45,Precisions of every reference in SanQiTongShu Capsules matrix(n=6),46,三、

17、实验方法与结果,专属性试验：分别精密吸取三七药材空白基质溶液、三七三醇皂苷空白基质溶液、三七通舒胶囊空白基质溶液、混合标准品溶液各1l，进样分析。,47,三、实验方法与结果,The TIC of mixed standard solution,48,三、实验方法与结果,The TIC of Panax Notoginseng blank matrix,49,三、实验方法与结果,The TIC of PTS blank matrix,50,三、实验方法与结果,The TIC of SanQiTongShu Capsules blank matrix,51,三、实验方法与结果,耐用性试验：更换毛细

18、管色谱柱为DB-1MS毛细管柱（30m0.32mm0.1m），并更改进样口温度为250，其余色谱条件和质谱条件不变。,52,三、实验方法与结果,The TIC of 21 pesticides(including internal standard)after changing GC condition,53,三、实验方法与结果,The TIC of 21 pesticides(including internal standard)before changing GC condition,54,三、实验方法与结果,5.农药残留量测定：（1）定性测定：保留时间偏差范围：2.5%定性离子相对丰度

19、偏差范围：,Maximum deviation of ion abundance in qualitative determination,55,三、实验方法与结果,（2）定量测定：以标准曲线内标法对三七 三种样品中20种农药残留量进 行测定计算。,56,三、实验方法与结果,（3）样品测定：对15批三七药材、15批三七三醇皂苷、15批三七通舒胶囊进行检测，对其中20种 农药残留量进行定性定量分析。,57,注：表中数字为检出农药的含量（mg/kg）；01至15为药材的编号，对应的批号见表2。,The determination of pesticide residues in 15 batche

20、s of Panax Notoginseng,58,四、实验结论,三七药材中农药残留现象较为普遍。三七三醇皂苷和三七通舒胶囊未检出农药。,59,四、实验结论,MRLs of 20 pesticides by European Union,60,五、实验讨论,1.三七药材、三七三醇皂苷及三七通舒胶囊20 种农药残留限量标准的制定：为提高国内标准，同时结合农药使用情况和实际测定情况，制定了三七药材、三七三醇皂苷和三七通舒胶囊的农药限度标准。,61,Standards for pesticide residue limits of Chinese materia medica in China,62

21、,五、实验讨论,MRLs of pesticides in Panax Notoginseng and its products,63,五、实验讨论,2.基质效应的影响：,64,五、实验讨论,3.中药农药残留研究中存在的问题：,分析检测技术相对落后,限量标准少而零散,农药使用标准较为缺乏,65,五、实验讨论,4.展望：,更简便 更快捷 更高效 更环保前处理技术：SPE、GPC、SPME、SFE 等。检测技术：GC-MS、LC-MS、CE-MS、SFC-MS等。,66,六、致 谢,光阴似箭，日月如梭，三年的研究生学习生活即将结束，新的人生征程即将开始。值此论文完成之际，向一直关心、帮助我的老师、

22、同学和朋友们致以深深的谢意!首先向我的导师傅超美教授表示由衷的谢意！本课题从选题、设计到完成始终得到了傅老师悉心严谨的指导，一直以来傅老师在工作、学习和生活上都给予了我无微不至的关怀和鼓励。傅老师高尚正直的为人、乐观周全的处事、博闻强识的学识、科学严谨的态度、虚怀若谷的胸襟，令人高山仰止、景行行止，将不断激励着我奋斗前进。在此，对傅老师表示最衷心最诚挚的感谢！其次感谢成都华神集团股份有限公司制药厂为本论文的完成提供了科研经费和实验条件，特别感谢成都华神集团股份有限公司制药厂的万方、林大胜、杨华蓉、刘洋、王莉、曹科等老师的热情帮助！特别感谢四川省食品与药品检验所食品仪器室的贺亚玲、陈小泉两位老师对本论文提供的无私指导和极大帮助，同时感谢杜钢、魏伯平、王颖、余晓琴、李航等老师给予的关心指导！特别感谢冷静师姐对本论文的大力帮助，感谢瞿燕、胡慧玲、廖婉、贾东艳、周绚、彭衡阳、吴学渊、黄逸维、何瑶、刘婧、李文婷、刘芳、毛茜、章津铭、傅薛衡、游宇等师兄弟姐妹，感谢207实验室所有同学三年来对我的真诚关心和无私帮助。感谢四川大学华西药学院陈霞、刘小炜、徐丽华等同学对本论文的关心和帮助！向一直在背后默默支持鼓励我的父母说声谢谢，对他们的感恩之情无以言表，祝愿他们永远健康平安！最后，特别感谢各位专家于百忙之中抽出宝贵时间细心评阅论文，并感谢答辩委员会的不吝指教！,67,恳请各位专家批评指正！,