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1、编码：STP-YZ-FY001-00Agilent 1260型高效液相色谱仪确认方案2013年广东健信制药有限公司目 录确认方案审批表确认小组成员与确认实施计划确认方案1. 概述2. 确认目的3. 确认依据及参考资料4. 文件准备和培训5. 确认内容5.1 安装确认（IQ）5.2 运行确认（OQ）5.3 性能确认（PQ）6. 偏差及评估意见7. 确认评价及结论8. 相关SOP的修订，包括仪器操作、校准和维护等9. 再确认10. 附件确认方案审批方案编号STP-YZ-JY001-00起草人日期：审核人质量控制部：日期：审核人确认负责部门：日期：批准人质量负责人：日期：确认小组成员与确认实施计划1
2、、确认小组成员姓名职务/职称部门职责主任质量控制部负责组织、协调本确认方案的起草、培训与实施，负责确认方案及确认报告的审核。确认负责部门负责确认方案、报告的审核，监督确认工作实施。QC质量控制部负责确认方案的起草与培训，确认实施，确认记录数据的收集，确认过程偏差的处理，确认结果的评价与确认报告的起草。QC质量控制部参与仪器确认实施。 工程部参与安装确认，负责仪器安装环境的检查。2、确认实施计划2.1 确认方案的培训：2013年 月 日前完成。2.2 安装确认及仪器的操作培训：2013年 月 日 至 2013年 月 日。2.3 运行确认和性能确认；2013年 月 日 至 2013年 月 日。Ag
3、ilent 1260型高效液相色谱仪确认方案1. 概述Agilent 1260型高效液相色谱仪主要由四元泵（内置脱气机）、自动进样器、柱温箱、检测器、色谱工作站及计算机组成。由高压输液泵将规定的流动相泵入色谱柱，自动进样器注入供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在色谱柱内被分离，并依次进入检测器，由色谱工作站软件记录和处理色谱信号，从而达到分析目的。本仪器主要用于检测成品、原料、中间产品的检测。该仪器安装于质量控制部仪器室。为市售非定制的分析仪器，故只进行安装确认、运行确认及性能确认。由于运行确认测试仪器功能是否满足设计要求和用户需求的过程，性能确认考察仪器运行的可靠性，主要运行参数的稳定和结
4、果的重现，两者较多重复，故运行确认与性能确认一并进行。2. 确认目的确认Agilent 1260型高效液相色谱仪符合相应的要求，为日常检验提供准确的检测结果。3. 确认依据及参考资料3.1 药品GMP指南质量控制实验室与物料系统（2010版）3.2 中华人民共和国药典（2010年版二部）3.3 Agilen 1260型高效液相色谱仪使用说明书4. 文件准备和培训4.1 检查确认所需的各类文件资料，应齐全；相关的文件草案是否已具备。文件/资料文件编号/档案号存放地点检查情况采购合同高效液相色谱仪操作规程检查人： 日期： 4.2 培训参加确认人员需进行本确认方案及仪器相关SOP文件的培训。培训内容
5、培训师培训日期参加人员高效液相色谱仪确认方案高效液相色谱仪使用操作高效液相色谱法SOP5. 确认内容5.1 安装确认（IQ）5.1.1 仪器包装及开箱检查检查外包装应完好无损，仪器各部件、配件与供货合同一致，仪器出厂合格证书及使用说明书等技术资料齐全（参照合同清单），检查情况如下：5.1.1.1 开箱检查项目可接受标准确认结果开箱检查仪器包装完好，仪器各部件与供货合同、装箱单一致，技术资料齐全。外观各部件完好，外观整洁、无污迹，内外表面光亮、平整、无擦痕。5.1.1.2 仪器技术资料资料名称数量存放地点5.1.1.3 设备型号确认部件.设备部件号序列号确认结果四元泵自动进样器柱温箱紫外检测器工
6、作站结论： 检查人： 日期： 5.1.2 安装条件确认确认仪器的安装条件是否符合仪器安装要求。项 目要 求检查情况位 置应无强震动源，无强电磁干扰源，通风良好，无明火。仪器应平稳而牢固地安置在工作台上。环境洁净度室内应保持清洁，无腐蚀性气体。温度535，全天温度变化较小。相对湿度2085%电路电源AC220V22V、50HZ1HZ接地应接地计算机配置操作系统Windows XP 操作系统硬件要求内存不低于2G；硬盘不低于160G；带光区驱动。安全性要求可设置用户权限，用户需要凭密码登录。结论： 检查人： 日期： 5.1.3 仪器组装确认仪器安装完后，对安装情况进行检查。测试项目可接受标准确认结
7、果仪器主体安装仪器安装于精密仪器室操作台，相互仪器间距大于60cm，仪器后面板应留有不小于50cm的空间，前面板至操作台边缘距离不小10cm；仪器安装平稳牢固，接入了UPS电源，仪器外壳与地线连接。电源电缆连接检测器、四元泵、自动进样器、色谱柱、柱温箱与计算机、打印机的电源连接正常，并接入UPS电源。计算机与仪器、计算机与打印机的网线连接正常，IP地址设置正确。管路溶剂瓶、四元泵、自动进样器、柱温箱、检测器与废液瓶之间溶剂管路连接正确，各管路均有标识，溶剂瓶上有标示盛装溶剂名称或代码。计算机安装检查打开电源开关，计算机应能顺利启动系统。仪器控制软件连接启动仪器控制程序，仪器应能与控制软件顺利连
8、接，在控制软件中可对泵、柱温箱、自动进样器、检测器等各模块进行参数设置，各模块依据设置的指令作相应的动作，可顺利完成进样、采集数据。结论： 检查人： 日期： 5.2 运行确认（OQ）5.2.1 运行确认项目与可接受标准项目测试方法与可接受标准确认结果泵运行测试在工作站各泵模块中，开启泵，泵应自动完成自检并启动；设置流速与各溶剂的比例，泵可按运行参数运行；点击关闭泵，泵停止动作，恢复至初始状态。柱温箱在工作站中可实现对柱温箱的开、关控制，并可按设置柱温运行，柱温未到达设定值之前，工作站中的柱温箱模块应显示为未就绪（呈红色）自动进样器在工作站中可实现对进样器的开、关控制，开启后，自动进样器应能完成
9、自检与复位，能按设置参数进行单次进样与系列进样操作检测器在工作站中可实现对检测器的开、关控制，开启后，氘灯应可点亮并自检通过，可实现对检测波长设置的功能。样品测试通过工作站编辑一个分析方法并运行。仪器能顺利执行进样、分析与数据采集任务，在仪器脱机工作程序中，可对采集的图谱进行处理、并可打印出分析报告。泵报警测试溶剂瓶的流动相体积低于0.1L时，泵停止动作，工作站中显示红色报警信号压力报警测试设置最高压力为100bar，逐步增加流速，当压力超过100bar时，泵停止运行，在工作站运行窗口中，显示红色报警信号泄漏报警测试用以纯化水湿润的脱脂棉球轻轻压在漏液传感器上，仪器应显示红色报警信号，且仪器自
10、动停止运行。结论： 检查人： 日期： 复核人： 日期： 5.3 性能确认（PQ）5.3.1 测试项目与可接受标准测试项目可接受标准四元泵流量设定值0.5 ml/min1.0 ml/min2.0 ml/min流量设定值误差（SS）5%3%2%流量稳定性误差（SR）3%2%2%梯度误差（Gc）3%柱温箱温度设定值误差（T）2温度稳定性（Tc）1紫外检测器波长示值误差2nm波长重复性误差2nm基线漂移510-3 AU/h基线噪音510-4 AU最小检测浓度110-7g/ml整机性能定性重复性RSD1.0%定量重复性RSD2.0%5.3.2 四元泵的确认5.3.2.1 输液系统泄漏检查将仪器各部分连接
11、好，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，启动仪器，压力平稳后保持10分钟，用滤纸检查各管路接口处应无湿迹，卸下色谱柱，堵住泵出口端（压力传感器以下），使压力达到最大允许值的90%，保持5min应不漏液。压力最大允许值泵压力是否漏液结 果5.3.2.2 泵流量设定值误差（SS）与稳定性误差（SR）5.3.2.2.1 操作方法将仪器的各部分连接好，用抽滤过的纯化水为流动相，按下表的要求设定泵的流量，待压力稳定后，在泵出口处用清洁称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确地收集表中规定时间流出的流动相，再在分析天平上称重，每组测定三次。计算泵流量设定值误差SS和泵流量稳定性误差SR
12、，应符合规定。流量设定值（ml/min）0.51.02.0测 量 次 数333收集流动相时间（min）10555.3.2.2.2 计算公式（1）泵流量设定值误差：SS=（Fm-Fs）/Fs100%；式中：SS：泵流量设定值误差，%；Fm：Fm =（W2-W1）/（tt），流量实测值，ml/min；W2：容量瓶流动相的重量，g；W1：容量瓶的重量，g；t：实验温度下流动相的密度，g/cm3；t：收集流动相的时间，min；Fs：流量设定值，ml/min；（2）泵流量稳定性误差：SR=（Fmax-Fmin）/F100%式中：SR：泵流量稳定性误差，%；Fmax：同一组测量中流量最大值，ml/min；
13、Fmin：同一组测量中流量最小值，ml/min；F：同一组测量值的算术平均值，ml/min。5.3.2.2.3 可接受标准流量设定值（ml/min）0.51.02.0允许误差泵流量设定值误差SS5%3%2%泵流量稳定性误差SR3%2%2%5.3.2.2.4 结果流量（ml/min）次数W1W2W2-W1SSSR0.51231.01232.01235.3.2.3 梯度误差（Gc）5.3.2.3.1 操作方法由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序，A为纯化水，B为0.1%的丙酮溶液，B经由5个阶梯从0变到100%，如下图梯度误差所示。将输液泵和检测器连接（不接色谱柱），开机以后以A溶剂冲洗系统，基
14、线平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线。求出A、B溶剂不同比例时的输出信号值，重复测量2次，计算平均值。从B溶剂的含量及对应的输出信号值，按下计算公式计算梯度误差Gci，取Gci最大者作为仪器梯度误差。输出信号值100%A20%B40%B60%B80%B100%B0%B0%A时间t梯度误差验证示意图5.3.2.3.2 计算公式Gci=（Li-Lm）/ Lm100%式中：Gci：第i段梯度误差（%）；L：第i段输出信号值的平均值；Lm：各段输出信号平均值的平均值。5.3.2.3.3 可接受标准梯度误差不超过3%。5.3.2.3.4 结果次数第一阶段读数第二阶段读数第三阶段读数第四阶段读数第五
15、阶段读数Li12LmGci结论： 检查人： 日期： 复核人： 日期： 5.3.3 柱温箱的确认5.3.3.1 温度设定值误差（Ts）和温度稳定性（Tc）5.3.3.1.1 操作方法将温度计（已校验，分度值为0.1）放置在柱温箱内，选择35和45进行测定。将色谱仪联接好,柱温箱开始升温，待柱温稳定后，用数字温度计测试柱温并开始计时，以后每隔2min记录一次读数，共计7次，求出平均值。平均值与设定值之差为设定值误差Ts，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性Tc。5.3.3.1.2 可接受标准柱温箱温度设定值误差Ts不超过2，温度稳定性Tc不超过1。5.3.3.1.3 结果设定温度实测温度平均值
16、TSTC结 果351234567451234567结论： 检查人： 日期： 复核人： 日期： 5.3.4 紫外检测器的确认5.3.4.1波长示值误差和重复性误差5.3.4.1.1 重铬酸钾溶液的制备取重铬酸钾约120mg，精密称定，用0.005mol/l的硫酸溶液溶解并稀释至100ml的容量瓶中，精密量取2.5ml至50ml的容量瓶中，用0.005mol/l的硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得。5.3.4.1.2 操作方法将仪器连接好,通电预热稳定后，用注射器将重铬酸钾溶液从检测器入口注入流通池中冲洗，并将流通池充满，在235nm，257nm，313nm，350nm波长处检测仪器波长的示值误差。将
17、检测器波长调到低于标准波长5nm处（例如检定257nm时，检测器波长先调到252nm），每10秒改变1nm，直至高于规定波长5nm处，该最大吸收值所对应的波长与标准溶液波长之差为波长示值误差。每个波长重复测量3次，其中最大值与最小值之差为波长重复性误差。5.3.4.1.3 可接受标准波长示值误差2nm，波长重复性误差2nm。5.3.4.1.4 结果测试波长235nm257nm313nm350nm实测值示值误差5.3.4.2 基线漂移和基线噪声5.3.4.2.1操作方法选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，紫外检测器的波长设定为254nm，待仪器稳定后，记录基线30
18、min，由检测器的衰减倍数和测得的基线峰峰高对应的记录仪标度，计算基线噪音，用检测器自身的物理量（AU）作单位表示；基线漂移用1h内基线偏离原点的值（AU/h）表示。5.3.4.2.2 可接受标准基线漂移不超过510-3（AU /h），基线噪声不超过510-4（AU）。5.3.4.2.3 结果基线漂移在1h内偏离原点的值为 （AU/h）。衰减倍数测得的基线峰峰高对应的记录仪标度基线噪音结 果注：Nd=KB 式中：K：衰减倍数；B：测得的基线峰峰高对应的记录仪标度5.3.4.3 最小检测浓度5.3.4.3.1 操作方法在基线漂移和基线噪声确认的色谱条件下，取适量的萘，用甲醇稀释制成110-7g/
19、ml的溶液，等基线稳定后，注入20ul，记录色谱图，由色谱峰高和基线噪声峰峰高，按下列公式计算最小检测浓度。5.3.4.3.2 计算公式CL=2NdcVH20式中：CL：最小检测浓度，g/ml；Nd：基线噪声峰-峰高，mm；c：标准溶液的浓度，g/ml；H：标准溶液的色谱峰高；V：进样体积，l；5.3.4.3.3 可接受标准最小检测浓度不超过110-7g/ml。5.3.4.3.3 结果萘的称样量稀释倍数萘的色谱峰高最小检测浓度结 果结论： 检查人： 日期： 复核人： 日期： 5.3.5 整机性能的确认仪器的整机性能用定性、定量测量重复性误差RSD表示。5.3.5.1 操作方法将仪器联接好，用C
20、18色谱柱，用纯甲醇为流动相，设定适当的流速，检测波长为254nm，取适量的萘，用甲醇稀释制成110-4g/ml的溶液，等基线稳定后，注入10ul 的萘-甲醇溶液，连续测量6次，记录色谱峰的保留时间，计算定性测量重复性误差RSD；记录色谱峰的峰面积，计算定量测量重复性误差RSD。5.3.5.2 可接受标准定性测量重复性误差RSD1.0%，定量测量重复性误差RSD2.0%。5.3.5.3 结果进样次数123456平均值RSD保留时间峰面积结论： 检查人： 日期： 复核人： 日期： 6. 偏差及评估意见确认应按此制定并经审核批准后的方案进行，详细记录在本次确认中出现偏差的详细情况，以及所采取的措施
21、，得到的结果，对于偏差及所采取的措施在整个确认过程中的影响进行评估，确认本次确认过程及数据可否于确认的相关评价，可否达到预期的确认目的，是否需要进行补充确认或重新确认。7. 确认评价及结论确认结束后应及时汇总确认结果，并对确认结果进行评价，得出确认结论并提交确认报告。8. 相关SOP的修订，包括仪器操作、校准和维护等 确定之前的SOP的可操作性与否，是否需要修订，如需修订，上报质量部门按程序修订。9. 再确认9.1 仪器变更等引起的再确认9.1.1 当仪器有下列情况时，确认状态受到影响应进行再确认：（1）经历重大维修，或更换关键部件；（2）安装地点变化；（3）软件或硬件升级；（4）由偏差，数据超出标准或数据趋势分析引起；9.1.2 再确认内容应根据仪器变更情况，对仪器可能受到影响的环节进行确认。9.2 定期再确认正常条件下，每年再确认一次。10. 附件附件1：高效液相色谱仪性能测试记录
