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1、REF 30 45013207C-cn-2007/04VIDAS BRAHMS PCT (PCT)VIDAS BRAHMS PCT是使用于VIDAS分析仪上，使用ELFA(酶联荧光分析)技术, 检测人血清或血浆 (肝素锂) 中的降钙素原的的定量检测试剂。VIDAS BRAHMS PCT与其他实验室检测结果和临床评估一起用于协助评估到达ICU 病房的重症病人发展重症败血症以至败血症性休克的可能性（危机分析）。摘要及说明降钙素原(PCT) 是降钙素的激素原。降钙素仅在甲状腺的C 细胞受到激素性刺激时才产生，而降钙素原(PCT)则由很多器官的不同类型细胞在受到促炎症反应刺激后分泌，特别是受到细菌引起
2、的刺激（）。临床资料显示，PCT浓度高于0.1 ng/mL时说明存在临床相关的细菌感染，需要采用抗生素进行治疗(2)。当PCT浓度 0.5 ng/mL时，要考虑患者可能有发展成重症败血症或败血症性休克的危险(3, 4)。败血症是免疫系统和凝血系统对感染的一种过激反应(5)。对感染患者进行诊断和监测是医生面临的主要难题。已经证明感染患者降的钙素原(PCT)浓度升高较早，特别是受细菌感染的患者。在实验室诊断中，降钙素原(PCT)是一种能特异性区分细菌感染和其它原因导致的炎性反应的重要标志物（）。此外，败血症再吸收时降钙素原的浓度会下降至正常水平，半衰期为24小时 (6, 7)。在某些情况下（新生儿
3、、多发性损伤、烧伤、大型手术），降钙素原(PCT)的升高可能与感染无关。通常很快回到正常值。病毒感染、变态反应、自身免疫疾病和移植排斥不会引起降钙素原(PCT)显著升高(8)。局部的细菌感染能够导致降钙素原(PCT)浓度中度升高 (2, 9)。VIDAS BRAHMSPCT检验结果需结合患者的病史及所进行的所有其它化验结果来评估。若实验室检测结果与临床体征间存在差异，则必须进行其他检测。原理该项检验的原理是结合一步免疫测定夹心法和最终荧光检测法(ELFA)的方法进行检验。固相吸管(SPR)作为固定相及移液装置。检验的试剂预先配制好，分装在密封的试剂板条中待用。所有检验步骤都由仪器自动完成。将样
4、品转移到装有用碱性磷酸酶标记的抗降钙素原抗体（结合物）的孔中。样品/结合物的混合物在SPR中循环进出几次。该项操作能够使抗原与固定于SPR内壁的免疫球蛋白相结合，使结合物成为夹层状。未结合的化合物在清洗过程中被清除掉。连续进行两次检测。在每步检测中，底物（4-甲基伞形酮酰磷酸酯）在SPR中循环进出。结合物酶催化该底物水解生成一种荧光产物（4-甲基伞形酮），于450 nm处检测其荧光性。其荧光强度与样品中抗原的浓度成比例。检测结束时，仪器自动计算与两次检测对应的两个校准曲线的结果。荧光阈值决定用于检验每个样品的校准曲线。然后打印出结果。试剂盒的内容物（60测试）试剂的重溶60 PCT试剂条STR
5、即用型。60 PCT SPRs 2x30SPR即用型。SPRs内层涂有单克隆的鼠抗人降钙素原免疫球蛋白。PCT 对照液C1 对照液2x2mL（冻干）C2 对照液2 x 2 mL（冻干）C1 C2用2ml蒸馏水重溶。静置5-10分钟后混合。在2-8下可保存8小时，或在- 25 6C下可保存到试剂盒上的有效期。可反复冷冻/融解5次。TRIS NaCI缓冲液(pH 7.3) +重组人PCT + 防腐剂。在MEL卡上的“对照液C1剂量值范围”或“对照液C2剂量值范围”后显示置信区间（单位为ng/mL） 。PCT校准剂S1校准剂2 x 2 mL（冻干）S2校准剂2 x 2 mL（冻干）S1 S2用2ml
6、蒸馏水重溶。 静置5-10分钟后混合。在2-8下可保存8小时，或在- 25 6C下可保存到试剂盒上的有效期。可反复冷冻/融解5次。TRIS NaCI缓冲液(pH 7.3) +重组人PCT + 防腐剂。在MEL卡上的“校准剂（S1）剂量值”或“校准剂（S2）剂量值”后显示“相对荧光度值”的置信区间。1 MLE 卡含有用于校准检验的厂家标准校准数据的质量标准表。1份说明书SPRSPR的内层在生产时涂有单克隆的鼠抗降钙素原免疫蛋白。通过PCT编码识别SPR。开启后仅从袋中取出需要数目的SPRs，并重新正确密封储物袋。试剂条试剂条由10个孔组成，上面用印有标签的铝箔密封。 标签包括一个主要显示检验编码
7、、试剂盒批号及有效期的条码。第一个孔的铝箔上有一个小孔，以便于加入样品。 每个试剂板条的最后一个孔是一个比色槽，用于荧光检测读数。试剂板条的中间部分的孔装有检测所需的各种试剂。PCT试剂条的说明孔试剂1样品孔2-3-4空孔5结合物：碱性磷酸酶标记的小鼠单克隆抗人降钙素原免疫蛋白防腐剂( 400L)。6-7-8TRIS NaCI 吐温 (pH 7.3) + 防腐剂 (600 uL).9空孔10装有底物的检测读数比色槽： 4-甲基伞形酮酰磷酸酯(0.6 mmol/L) + 二乙醇胺* (DEA*) （0.62 mol/L或6.6%, pH 9.2） + 1g/L叠氮化钠 (300 uL).*刺激性
8、试剂：- R 36 ：对眼睛有刺激性。- S 26 ：若不慎入眼，立即用大量水清洗，并立即就医。 欲了解更详细的信息，可来函索取并参阅安全数据表。自备材料-配有用于转移200 uL液体的一次性吸管。-一次性无滑石粉手套。警告和预防措施 仅用于体外诊断。 仅供专业人员使用。 该试剂盒含有源自动物的产物。 动物来源及卫生状态的合格信息并不能完全保证不会传播致病体。 因此建议将这些产品作为潜在传染物进行处理，注意一般的安全预防措施（不得咽下或吸入）。 若储物袋已被穿破，则SPRs不能再使用。 不得使用可见的变质的STRs（铝箔或塑料被损坏）。 不得使用已过标签上标明的有效期的试剂。 不得将不同批次的
9、试剂或耗材混合。 试剂盒中的试剂包括叠氮化钠，该物质能与铅或铜管道起反应生成易爆的金属叠氮化合物。如果含有叠氮化钠的液体被倒入管道系统中，则必须用水冲洗，以避免出现累积。 使用无滑石粉手套，因为已经有粉末会导致某些酶免疫测定的结果错误的报道。 第10个孔中的底物含有刺激性化学试剂（二乙醇胺）。参考上述危险性惯用语“R”及预防措施“S”。 溅出液必须用液体清洁剂和至少含有0.5次氯酸钠的家用漂白粉溶液彻底擦干净。仪器上或内的溅出液的清洁请参考操作手册。含有漂白粉的溶液不得高压灭菌。 VIDAS及迷你VIDAS仪器必须定期清洁和去污（参见操作手册）。储存条件 将VIDAS BRAHMS PCT试剂
10、盒保存在2-8C下。 不得冷冻试剂，除了重溶后的校准剂和对照液。 所以未用的试剂保存在2-8C下。 开启试剂盒后，检查SPR袋是否正确密封且未损害。若未正确密封或已损害，则不得使用其中的SPRs。 使用后，将装有干燥剂的袋子重新密封以保持SPRs的稳定性，并重新将试剂盒保存在2-8C下。 若依据建议的条件储存，则所有的成分在标签上的有效期内能够保持稳定状态。特殊储存条件请参考试剂盒成分表。样本样本类型与采集人血清或血浆（肝素锂）。某个特定患者的PCT检验必须在同类型的取样管中进行。由于EDTA能导致测量值下降，所以收集时含有EDTA的血浆不得用于（检验）。含有悬浮的纤维蛋白颗粒或红细胞基质的样
11、品在检验中必须离心处理。样品的准备- 干燥试管：根据试管生产商有关去除纤维蛋白的建议，等待样品凝固及离心。- 其它试管：参考试管生产商的使用建议。- 冷藏的样品：解冻后，所有样品必须经过离心后使其澄清。注意：由于材料和添加剂的不同，不同生产商生产的血样采集管的检验结果可能不同。实验室有责任验证采集管的类型并参照生产商的使用建议。样品的稳定性从血块中分离出的样品能在2-8C下保存48小时；如果需要保存更长时间，则需于-25 + 6C下冷冻。冷冻了6个月的样品不影响检验结果的质量。已经对三次冷冻/融解循环检验结果进行了验证。样品相关干扰发现以下因素不会显著影响检验：- 溶血（样品中掺入血红蛋白后：
12、347 umol/L），- 脂血症（样品中掺入类脂后：含有30 g/L同等物的甘油三酯）， - 胆红素血症（样品中掺入胆红素后：574 umol/L）。 但是，建议不要使用出现溶血、脂血或黄疸的血样，如果可能，需采集新的血样。使用说明书完整的使用说明请参阅VIDAS或mini-VIDAS操作手册。VIDAS PTC操作协议数据的输入首次进行检验且读取MLE卡前，使用VIDAS或mini-VIDAS条形码读数器扫描条形码（说明书的末端）。该读数将会允许将VIDAS PTC操作协议的数据作为更新输入到VIDAS PC和/或mini-VIDAS仪器的软件中。这些数据需仅在初次检验时使用，或者在VID
13、AS仪器要求时读取。批数据的录入注意： 初次进行检验时，必须在读取MLE卡前输入VIDAS PTC操作协议数据（说明书末端的条形码）。 如果在输入VIDAS PTC操作协议数据前读取了MLE卡，则再读一次。使用新的一批试剂前，使用每个试剂盒中的批号数据(MLE)卡（质量标准表）将质量标准（或厂家标准校准曲线数据）输入到仪器（VIDAS或mini-VIDAS）中。 如果在开始检验前没有完成该操作，则仪器无法打印结果。 每批的批数据只需要输入一次。可以利用MLE卡自动输入或手动输入数据。校准开启一批新的试剂时、输入批数据（MLE卡）后及以后每隔28天必须进行利用试剂盒中提供的两种校准品进行校准。
14、该操作能提供仪器特定的校准曲线，并能弥补试剂盒在货架期内检验信号可能出现的小差异。校准品，S1及S2，在同一次运行中必须检验两次。校准值必须在设定的RFV（“相对荧光度值”）的范围内。 如果不在该范围内，使用S1和S2重新校准。步骤1. 从冷藏处取出需要的试剂。2. 每份待测的样品、对照液或校准品都使用一条PCT板条和一个PCT SPR。 确保取出需要的SPRs后已重新密封储物袋。3. 在仪器上键入或选择PCT以输入检测码。校准品需分别标为S1和S2 并且需要重复检测。如果对照液需要检测，则将其标分别为C1和C2并检测一次。4. 采用种涡流式混合器混合校准品和/对照液。5. 吸取200 L 校
15、准品、对照液和样品滴入样品孔中。6. 将SPRs和板条插入仪器中。 检查以保证SPRs上带有检验代码的颜色标签与试剂板条相匹配。7. 立即开始检测。所有检验步骤都由仪器自动完成。 检验将在约20分钟内完成。8. 检验结束后，从仪器中取出SPRs和试剂条。9. 将使用过的SPRs和试剂条放入适当的容器中处理。结果及判定检验完成后得到的结果通过计算机采用储存于仪器中的两条校准曲线进行分析，所得的浓度值的单位为ng/mL。采用VIDAS PC检测时，若得到的结果 J4 & J2 J RFV 阈值”， RFV显示为*。 该警告只与VIDAS BRAHMS PCT技术的读取模式（重复读取）相关，而与检测
16、的浓度无关。由于尚无适用的国际标准，因此采用含有已知浓度降钙素原的人血清的内标板对比校正VIDAS BRAHMS PCT。对于随访患者，建议采用相同的PCT检验技术。降钙素原浓度大于200 ng/mL的样品必须稀释至1/10（1体积样品+ 9体积PCT阴性样品）后进行复验。若创建工作列表(Work List)时未输入稀释倍数（见操作者手册），需将结果乘以稀释倍数得到样品浓度。检验结果需结合患者的病史及所进行的所有其它化验结果来判定。质量控制每个VIDAS BRAHMS PCT试剂盒中有两份对照液。这些对照液必须在新的试剂盒打开后立即使用以保证试剂的性质未发生改变。必须采用这些对照液检查每次的校
17、准。该仪器只有在对照液标记为C1和C2后才能检查这些对照值。若对照值偏离期望值，则无法对检验结果进行验证。在同次检验中的样品也必须进行复验。注意使用者有责任按照任何当地适用的法规进行质量控制检测。该方法的局限性某些含有抗试剂中某种成分的抗体的样品可能会影响检验结果。鉴于这种原因，检验结果需结合患者的病史及所进行的所有其它化验结果来判定。期望值范围与文献（，）相符，在对进入重症监护病房的患者进行研究（参考临床性能），得到以下结果：- 浓度 2 ng/mL表示出现重症败血症和/或败血症性休克的风险较高。但是由于存在与低浓度降钙素原相关的局部感染（无全身性病征）或处于感染初期的全身性感染（ 6小时）
18、，因此浓度 0.5 ng/mL时并不能排除感染的出现。此外，无感染时也可能出现降钙素原浓度升高。PCT浓度在0.5 ng/mL-2.0 ng/mL时需结合患者的病史来判定结果。建议在6-24小时内对对任何测得浓度 2 ng/mL的样品进行PCT复验。性能采用VIDAS BRAHMS PCT进行的研究中得到以下结果：测量范围VIDAS BRAHMS PCT的测量范围为0.05-200 ng/mL。检测限该分析方法的检测限为小于0.05 ng/mL，指能检测出降钙素原的最小浓度，该浓度值与零间具有显著差异的置信概率为95%。采用批内（4批）变异系数（功能检测限）为20%时测得的PCT浓度为0.09
19、 ng/mL。Hook效应当降钙素原的浓度达2,600 ng/mL时，未发现钩状效应。正常值这些数据仅供参考，建议每个实验室从严格筛选的人群中建立自己的参考值。在一项采用VIDAS BRAHMS PCT对来自正常男性(N=98)和女性 (N=102) 受试者的血样进行检测的研究中， 发现百分比为95和99的相应的正常值分别为 0.5 ng/mlTotal 0.5 ng/ml74175 0.5 ng/ml5124129Total 79125204VIDAS BRAHMS PCTBRAHMS PCT LIA 2 ng/ml 2 ng/mlTotal 2 ng/ml1094113 2 ng/ml88
20、391Total 11787204阈值为0.5 ng/mL 和 2 ng/mL时， 2种方法检测的符合率平均值分别为97.1 % 和 94.1%。临床性能在法国及美国的家医院进行了临床研究，共229连续的病人（141男性，88女性）在进入重症病房的第一天被纳入了这研究创伤，烧伤，手术后，长期或严重心源性休克的病人被排除于这研究病人的分类是基于American Colledge of Chest Physicians/Society of Critical Care Medicine 共识会议的条件（）及额外的专家文献资料每一种类的数量，平均年龄及范围如下：u 没有感染：27病人，22-29岁（
21、平均64.4）u SIRS: 62病人，18-87岁（平均59.0）u 败血症: 42病人，21-92岁（平均64.2）u 重症败血症: 48病人，19-89岁（平均66.3）u 败血症性休克: 50病人，33-88岁（平均68.2）下图列出结果：阈值为0.5ng/ml时没有感染SIRS败血症的病人与重症败血症败血症性休克的病人的比较没有感染SIRS败血症的病人重症败血症败血症性休克的病人总数PCT 0.5 ng/ml88391PCT 0.5 ng/ml4395138总数13198229阈值为2.0ng/ml时没有感染SIRS败血症的病人与重症败血症败血症性休克的病人的比较没有感染SIRS败血
22、症的病人重症败血症败血症性休克的病人总数PCT 2 ng/ml11519134PCT 2 ng/ml167995总数13198229废弃物的处理使用过或未使用的试剂同所有其它已污染的一次性材料按照有传染性或潜在传染性物品的处理步骤处理。每个实验室都有责任依据其性质和危险程度处置这些废弃物及所产生的废液，并按照任何适用的法规处理或处置（使其得到处理或处置）。参考文献符号术语表符号意义GB：分类号US：分类号体外诊断医疗设备生产商温度范围使用期限批号参考使用说明可供检测的次数担保生物梅里埃公司不承担任何保证，无论是明确的或是暗含的，包括任何适销性和适合于某特殊目的性的暗含担保。生物梅里埃公司将不对
23、任何间接的或连带的损害承担责任。 在任何情况下，生物梅里埃公司对用户所承担的任何责任而应付的赔款都不应超过用户向生物梅里埃公司支付的购买产品和服务的总款额。与B R A H M S共同开发该试剂。B R A H M S PCT 为BRAHMS Aktiengesellschaft 的注册商标。bioMrieux SA au capital de 12 0269 370 673 620 399 RCS LYON69280 Marcy-IEtoile/France 电话 33(0)4 78 87 20 00传真 33(0)4 78 87 20 90 印刷于中国BioMerieux, the blue logo, VIDAS and SPR are used, pending and/or registered trademarks belonging to bioMerieux SA or one of its subsidiaries
