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1、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,实验重点:,筛选菌株统计菌落数目,目 录,实验原理目的要求材料用具试剂配制方法步骤结果分析与讨论思考题附答案,分离,使用专一培养基（含有尿素）可从土壤中分离出分解尿素的细菌。,一、,筛选菌株,实验室中微生物的筛选应用的原理人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、PH值等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。选择性培养基在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养自养微生物；培养基中
2、不加入氮元素，可以选择培养能固氮的微生物；加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。,统计菌落数目,测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌。为了保证结果准确，一般设置35个平板，选择菌落数在30300的平板进行计数，并取平均值。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。,目的要
3、求,了解实验原理学习实验室分离与计数特殊微生物的方法通过实验培养实验操作能力和观察能力,材料用具,灭菌锅或高压锅、250ml三角瓶、封口膜、橡皮圈、90mm培养皿、接种环、涂布器、恒温培养箱、摇床、酒精灯、超净台、一次性塑料手套、装有酒精棉球的广口瓶、镊子、带塞试管、尿素、分离分解尿素细菌培养基、花坛土、LB培养基。,二、实验器材与试剂材料,100mL锥形瓶,设备及用品,试剂材料,方法步骤,土壤取样：从富含有机物、潮湿、PH7的土壤中取样。铲去表层土，在距地表约38cm的土壤层取样。制备培养基：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用
4、。倒平板:每桌倒五个尿素培养基平板,一个LB培养基平板.微生物的培养与观察：将土样以103 依次等比稀释到106稀释度，按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。注明培养基种类、培养日期以及平板培养样品的稀释度。将涂布好的培养皿放在30温度下培养。随着培养时间的延长，会有不同的菌产生。比较牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。细菌的计数：当菌落数目稳定时，选取菌落数在30300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。MC/V(C:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板
5、时所用的稀释液的体积,M为稀释倍数),三、实验步骤,四、实验结果,五、注意事项,结果分析与讨论,思考题,如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？,附答案,统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。这是因为土壤中各类微生物的数量(单位：株/kg)是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。,
