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1、mobio试剂盒提取土壤DNA的步骤UltraClean SoilDNA Isolation Kit Sample详细过程 全过程戴上手套 1、 在2 ml Bead Solution Tubes 里加入0.251g 土样。 发生的反应：土样或废渣样本被装入到Bead Tube中。这是溶解过程的第一步。Bead Solution 是一种打散土壤颗粒的溶液并开始溶解腐殖酸。 2、 轻微地漩涡混合。 发生的反应：混合样本和Bead Solution。 3、 检查S1溶液，如果S1溶液有沉淀，使用前加热到60使沉淀溶解。 发生的反应：S1溶液中含有SDS。如果冷却了就会产生沉淀。加热到60会使SDS
2、溶解。S1溶液在温热的时候可以使用。 4、 加入60 l S1溶液，漩涡几次或简短地漩涡。 发生的反应：S1溶液含有SDS。这是一种帮助细胞溶解的洗涤剂。这种洗涤剂可以破坏脂肪酸和几种微生物细胞膜相关的脂类。 5、 加入200l IRS溶液。只有当DNA要用于PCR时才进行此步。 发生的反应：IRS是一种专门设计的用于沉淀腐殖酸和其他PCR抑制物的试剂。DNA要用于PCR时需要进行此步沉淀。腐殖酸通常呈棕色。他们属于有机化合物的一个大组分，存在于大多数富含有机质的土壤中。 6、 确保使用 MO BIO Vortex Adapter tube holder 进行漩涡时bead tube 是水平放
3、置的。最大速度漩涡10min。 注意：如果使用可放置多于12支试管的24空位的 Vortex Adapter，增加510min的漩涡时间。 发生的反应：略，见使用说明。 7、 将试管在10000 g离心30s。注意：不能超过10000 g 否则试管会坏。 发生的反应：此时细胞的残骸、土壤、珠子和腐殖酸等的微粒将结合成沉淀。DNA在液体状的上清液中。 8、 将上清液转移到另一支干净的2 ml Collection Tube中。 注意：根据不同土壤类型0.25g 土壤将会有400450l 上清液。上清液中可能仍然包含一些土壤颗粒。 9、 在Collection Tube 中加入250l S2溶液漩
4、涡5s。4静置5min。 发生的反应：S2溶液中含有一种蛋白质沉淀试剂。这一步对于移除可能降低DNA纯度和抑制后续DNA利用的污染蛋白十分重要。 10、 10000 g 离心1min。 11、 为了避免聚集成团，将整个上清液转移到另一只干净的2 ml Collection Tube中。 发生的反应：此时的沉淀物包含了腐殖酸、细胞残骸和蛋白质的残渣。为了获得最大量和质量最高的DNA，尽量避免将任何的团状物转移到试管中。 12、 使用前摇晃S3溶液，加1.3 ml S3溶液到上清液中漩涡5s。 注意：大量的溶液将会漫到试管边缘，手拿试管时要小心。 发生的反应：S3溶液是一种使NA凝结的盐溶液。DN
5、A在高盐浓度中凝结在硅砂上 13、 将700l 上步的溶液转入Spin Filter 10000 g 离心1min。 14、 弃掉流出液将剩下的上清液加入Spin Filter，10000 g 离心1min。重复此步知道所有的上清液都通过Spin Filter。 注意：每个样本需要三次添加过程。 发生的反应：DNA选择性地结合在spin filter的硅膜上。几乎所有污染物都通过了过滤膜，只留下需要的DNA。 15、 加入300l S4溶液10000 g 离心30s。 发生的反应：S4是一种用于进一步清洁附着在spin filter 硅膜上DNA的清洗溶液。这种洗涤剂移除了使DNA粘附在硅膜上
6、的盐、腐殖酸和其他污染物的残渣。 注意：如果需要可以进行一次以上的进一步DNA清洗。在土壤中含有很高的腐殖酸成分时，重复清洗的步骤很有益。 16、 弃掉2 ml Collection Tube中的上层洗涤流出液。 发生的反应：洗涤流出液只是包含了乙醇洗涤溶液和没有粘附到spin filter 膜上的成分的废物。 17、 10000 g 离心1min。 发生的反应：此步移除掉S4溶液。移除所有的洗涤溶液是十分必要的，因为洗涤液将会影响DNA的下游反应。 18、 小心地将Spin Filter放入新的干净的2 ml Collection Tube中。避免S4溶液溅到Spin Filter中。 19、 加入500l S5溶液到白色滤膜的中央。 20、 10000 g 离心 30s。 发生的反应：当S5溶液通过硅膜时，DNA脱离下来流经滤膜进入collection tube中。 21、 弃掉Spin Filter。试管中的DNA可用于PCR了。 建议DNA冷冻在-80-20中。
