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1、肉羊冷冻精液关键技术的研究与应用 陈月和，魏润元（内蒙古乌兰察布市家畜改良工作站，内蒙古乌兰察布010011）1冷冻精液关键技术的研究1.1研究筛选稀释液基础配方研究筛选稀释液配方是肉羊冷冻精液的关键技术之一。首先，我们收集了国内外多种稀释液配方，经过反复对比试验，筛选出了五种稀释液配方，其解冻后精子活力、顶体完整率和存活时间见表1，根据测定的指标数据分析，用葡3-3液作为冷冻精液稀释液配方，细管冷冻精液解冻后精液主要指标显著高于其他对照组。因此，把葡3-3液作为稀释液基础配方，做进一步的研究。表1不同稀释液配方生产细管冻精解冻后主要指标比较表%配方稀释液液成份活力顶体完整率存活率8012弱酸
2、稀释液液乳糖11g，双蒸水100mL，取80mL，加卵黄20mL0.38242.329液葡萄糖3g，柠檬酸钠3g，双蒸水50mL，再加脱脂乳50mL，取88mL，加甘油12mL葡3-3液液葡萄糖3g，柠檬酸钠3g，双蒸水100mL,消毒后,取80mL加鲜卵黄20mL0.41746.535液取液44mL,加甘油6mL卵柠糖液液葡萄糖5.4g，柠檬酸钠1g，双蒸水100mL,配好后取80mL,加卵黄20mL0.40544.532液取液43mL,加甘油7mL乳2奶液液葡萄糖1.5g，乳糖2g，果糖0.5g，柠檬酸钠3g双蒸水100mL,消毒后取80mL加鲜卵黄20mL0.40843.235液取液47
3、mL,加甘油3mL葡3-3硒液液葡萄糖3g，柠檬酸钠3g，双蒸水100mL,消毒后,取80mL加鲜卵黄20mL0.39243.635液取液44mL,加甘油6mL，硒0.06上述各稀释液中每100mL加青霉素10万单位,链霉素10万单位维生素E3%(V/V)1.2添加多不饱和脂肪酸的对比根据多不饱和脂肪酸对精子顶体具有保护作用的原理，采用葡3-3液配方为基础，添加不同浓度的富含多不饱和脂肪酸（PUFA）的深海鱼油，采用2步稀释法，将鲜精活力在0.70以上的精液稀释冷冻，解冻后活力和顶体完整率统计分析见表2。表2绵羊精液稀释液中添加不同比例多不饱和酸和脂肪酸解冻后活率和顶体完整率变化处理组处理（P
4、UFA添加浓度）（V/V）解冻后活力解冻后顶体完整率10%0.39746.520.5%0.40548.131%0.41848.342%0.41549.353%0.41650.265%0.40247.878%0.38242.1由上表可以看出：A、肉羊冷冻精液稀释液中添加0.5%-5%PUFA后，精子解冻后活率显著高于对照组P0.05），说明在绵羊精液稀释液中添加一定比例的PUFA有利于精子解冻后活力的复活，而如果添加比例超过8%时，解冻后活力显著低于对照组（P0.05）。B、肉羊精液稀释液中添加1%、2%、3%、4%、5%PUFA，精子解冻后活力组间差异不显著（p0.05），其中以添加1%3%精
5、子解冻后活力最高（P0.05），达0.4150.418。C、肉羊冷冻精液稀释液中添加0.5%-5%PUFA后，精子解冻后顶体完整率显著高于对照组和其它试验组（P0.05），精子解冻后顶体完整率达47.8%50.2%，其中以2%3%添加组最高（P0.05），达49.3%50.2%。D、肉羊精液冷冻稀释液中添加PUFA，在0.5%3%范围内，随PUFA添加量增加，精子解冻后顶体完整率有增高趋势。综合分析可知，肉羊精液稀释液中添加3%的PUFA，同时添加3%的维生素E的处理组，冷冻、解冻对精子的损害最小，解冻后各项指标均有所改善。1.3不同冷冻温度的冷冻效果对比冷冻精液温度的高低影响着冷冻精液的质量
6、，温度的变化通过调节冻结网与液氮面的距离来实现的。同一肉羊精液稀释液采用不同冷冻温度的冻精效果见表3。数据显示，冻结网与液氮面的距离在3.55cm，冻结温度在-90-105时，冷冻时间为9min，生产的细管冻精解冻后精液主要指标显著高于其他对照组。表3不同液氮面的冷冻效果对比冻结网距液氮面的距离/cm8753.52冻结温度-55-75-90-105-125解冻活力0.280.330.410.450.30生存指数1.711.791.982.031.451.4解冻温度、时间的对比实验细管冷冻精液的解冻是将细管冷冻精液从液氮中取出后，立即投放与水中，水的温度和在水中停留的时间同样影响精子解冻的效果。
7、采用40、42的解冻温度，在水中停留8s、10s、12s时，冷冻精液解冻后的活力、38存活时间、存活指数和顶体完整率见表4。用42的解冻温度，在水中停留8s，细管冻精解冻后精液主要指标显著高于其他对照组。表4不同解冻温度、时间的对比见表方法408秒4010秒428秒4210秒4212秒活力0.350.330.450.410.4438存活（h）7.36.78.67.28.4存活指数1.751.432.031.741.97顶体完整率45.940.850.247.645.2总结以上对比结果进行综合分析，用葡3-3配方为基础，添加3%的PUFA和3%的维生素E，在冷冻操作时距液氮面3.55cm，冻结温
8、度在-110-90时冷冻，解冻温度42、解冻时间8s效果显著，用此套技术生产的冻精，于2004年4月经自治区种畜禽监测站抽样检测，抽检结果统计如下表5表5（内蒙古）质监认字（0337）号（97）量认（蒙）字V0800)号抽检数量剂量（mL/支）精子活力/%呈直线前进运动精子数（个/0.1mL）精子畸形率/%精子顶体完整率/%存活率/%3738核准0.2530350020405XSXSXSXSXSXS抽检结果24支0.220.007641.87.443807.8206.4913.073.2953.039.2325.046.17精子活力、呈直线前进运动精子数、精子畸形率、顶体完整率、存活时间和微生
9、物等各项指标，均达到或超过了自治区细管冻精DB417-87的标准要求。2冷配试验2.1冷配初试2.1.1试验羊只 来源于乌盟及毗邻地区农牧民畜群中，为小尾寒羊及其杂种羊中的空怀母羊及产羔后3月龄以上的基础母羊。 在配种前没有经过任何同期发情处理，均属自然发情配种，授配母羊膘情在7成以上，生殖系统正常，无疫病。2.1.2起止时间：从二三年十月到二四年三月，2.1.3试验结果肉羊细管型冷冻精液配种情期不返情率统计结果见表7。表7冷配受胎统计表地点授配母羊数只/二十天不返情母羊数/只情期受胎率（二十天不返情率%）四子王旗9280870兴和县3025833市冷冻站88100合计1301138692.2
10、配种中试2.2.1试验羊只来源于乌兰察布市各旗县市肉羊配种站（点）周围农牧民自养的畜群中，羊品种为小尾寒羊及其杂种母羊，年龄从10月龄6周岁，母羊饲养环境、营养水平、管理方式基本相同，膘情在6成以上，无传染和生殖系统疾病，配种前不经任何同期发情处理，均为自然发情配种。2.2.2试验起止时间从二四年五月起到二五年七月一日止2.2.3试验结果肉羊细管型冷冻精液配种情期不返情率统计结果见表8。表8冷配受胎统计表地点授配母羊数/只二十天不返情母羊数/只情期受胎率（二十天不返情率%）总受胎数/只总受胎率/%兴和县11990863372.01104492.11凉城县1667118065.03144286.5商都县108081575.45100993.43四子王旗2334151965.1203587.19丰镇市19331127866.11168887.33合计190041332470.141721890.63结论3.1以葡3-3稀释液（葡萄糖-柠檬酸盐-卵黄）为基础，最新添加3%的PUFA和3%的维生素E作为冷冻肉羊精液的新型添加剂，为最佳稀释液配方。3.2采用冻结网与液氮面的距离在3.55cm，冻结温度在-90-105时，冷冻时间9min为最佳冷冻温度和时间。3.3解冻温度为42，解冻时间为8s，为最佳解冻温度和解冻时间。
