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1、光谱波长荧光 异硫氰酸荧光素FITC 黄色或橙黄色粉末溶于水或乙醇,分子量389.4,吸收波长490-495nm,发射波长520-530nm,黄绿色荧光 四乙基罗丹明RB200 橘红色粉末,不溶于水,溶于乙醇、丙酮,吸收波长570nm,发射波长595-600 nm,橘红色荧光 四甲基异硫氰酸荧光素TRITC 吸收波长550 nm,发射波长620 nm,橙黄色荧光,荧光效率较低 藻红蛋白 R-RE 褐色粉末,不溶于水,溶于乙醇、丙酮,吸收波长565 nm,发射波长578 nm橙色荧光 4-甲基伞酮 激发波长360 nm,发射波长450 nm 是-半乳糖苷酶作用4-甲基伞酮基-R-D半乳糖苷的产物
2、,-Gal主要用于均相酶免 镧系元素 激发波长300-350 nm,发射波长61310 nm ,一般利用6155 nm滤光片 铕Eu3+ 激发波长340 nm,发射波长613 nm 荧光偏振 激发光,蓝光485 nm,发射波长525-550 nm的绿光(用在均相酶免) 对羟基苯丙酸HPA 经HRP作用后,激发波长317 nm,发射波长414 nm 酶免标记 辣根过氧化物酶HRP 由无色糖蛋白和亚铁血红素组成,辅基是酶的活性基团,吸收峰403 nm,而主酶与酶活性无关,吸收峰275 nm,HRP纯度用RZ表示,其RZ值要大于3.0。RZ值仅说明血红素基团在HRP中的含量,并非表示制剂真正的纯度,
3、而且RZ值高不代表酶活性也高,RZ与酶活性无关 HRP底物 邻苯二胺OPD OPD在HRP作用下显橙黄色,加强酸终止反应后呈棕黄色,吸收峰492nm,性质不稳定,需临时配置。避光显色,致癌 四甲基联苯胺TMB TMB优于OPD,TMB经HRP作用显蓝色,加酸终止反应后显黄色,吸收峰450nm,稳定,无致癌,无须避光,目前应用最广,水溶性差 其他:5-氨基水杨酸,2,2-联氮-二胺盐(ABTS) 二氨基联苯胺DAB 呈棕色,主要用在斑点酶免吸附试验和免疫组化技术 免疫印迹法中3,3-二氨基联苯胺 4-氯-1-萘酚 碱性磷酸酶AP底物 对-硝基苯磷酸酯 p-NPP p-NPP经AP作用后为显黄色的
4、对硝基酚,吸收峰405nm -Gal的底物为4-甲基伞酮基-R-D半乳糖苷 化学发光 一:直接化学发光剂,不需酶催化,直接参与发光反应 吖啶酯 在碱性条件下被H2O2 氧化,发出470nm光,发光体为N-甲基吖啶酮,吖啶酯可以直接标记半抗原和蛋白质,为瞬间发光,发光时间短 三联吡啶钌 电化学发光剂,和电子供体三丙胺,在阳极发生氧化反应,可重复发光,时间长,稳定 二:酶促反应发光剂 HRP 底物为鲁米诺,异鲁米诺,及其衍生物 AP 底物为AMPPD 固相酶免 金溶胶 535nm 免疫组化技术 HRP底物 二氨基联苯胺DAB 呈棕色 AEC 氨基乙基卡巴唑 呈橘红色 4-氯-1-萘酚 灰蓝色 胶体金 颗粒在5-20nm 吸收波长520nm时呈葡萄酒红色 颗粒在20-40nm 吸收波长530nm时呈深红色 颗粒在60nm 吸收波长600nm时呈蓝紫色 主要用于细胞表面成分标记,利用不同大小的胶体金可以进行双重或多重标记 胶体铁 普鲁士蓝反应,电镜定位研究 透射比浊 340nm