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1、小鼠骨髓中性粒细胞分离 小鼠骨髓中性粒细胞的分离 实验器材：器械，无菌塑料滴管，15ml离心管，lEP管，培养皿，1ml注射器，70um尼龙筛网，低温离心机 试剂：PBS，HBSS，percoll，percoll储存液，percoll溶液Histopaque1119，小鼠中性粒细胞缓冲液 材料：8-12周C57小鼠 实验步骤： 1.拉颈处死小鼠，分离其胫骨和股骨，用纱布将胫骨和股骨擦干净，置于75%酒精中浸泡5min 2.用小直剪剪掉骨髓两端，暴露骨髓腔，用MNB冲洗，每次1ml，胫骨冲洗两次，股骨冲洗3次。 3.冲洗液用70um尼龙筛网过滤，离心收集细胞，600g 4 10min,低减速。
2、4.弃上清，用3ml45%percoll溶液重悬细胞 5.Percoll梯度准备：3ml81%，2ml62%，2ml55%，2ml50%percoll溶液 6.小心的将细胞悬液置于percoll梯度上，1600g,30min,10,无制动离心。 7.弃掉62%percoll层以上的溶液，收集62%-81%之间的percoll层。 8.10mlMNB洗两次，600g,10,10min,离心。弃上清，用3mlMNB重悬细胞。 9.将细胞悬液小心得置于3mlHistopaque1119上，1600g,10,30min,无制动离心，去除红细胞层。 10.收集1119和MNB之间的细胞层，10mlMNB 洗两次，600g, 4 10min,低减速离心 11.按需要将细胞用培养基重悬到一定的浓度。
