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1、河南省畜牧局实习报告实习总结 今年十月份我去河南省畜牧局下属事业单位河南省兽药监察所实习，我被分到了样品处理二室，主要学习了饲料类样品的前处理及检测方法，还熟悉了牛奶中三聚氰胺的检测方法以及猪肉中磺胺的检测方法。 一、 检测项目及方法 1.1. 饲料中铅含量的测定 采用石墨炉原子吸收光谱法检测，该方法样品处理简单，检出限低，可达到2ug/L,回收率可达到90%-106%。 原理：样品经消解处理后，所含的铅离子在石墨管内高温蒸发解离为原子蒸汽，并吸收铅空心阴极灯发射的共振线，且其所吸收强度在一定范围内与铅浓度成正比， 根据测得的吸收值与标准系列比较进行定量。 样品处理方法：取样品约2g，置于瓷坩
2、埚中缓慢加热至炭化，在500oC高温下加热6-8h, 直至试样呈白色。冷却，用少量水将灰化物湿润，加5mL硝酸，用表面皿盖住，在电热板上加热，待消解完全后，加10mL1mol/L的盐酸使盐类溶解，定容至100.0 mL。 石墨炉仪器参考条件：波长283.3nm；狭缝0.2 nm；灯电流：3mA；测量方式：峰高；负高压：421V。 石墨炉按一定的升温程序进行升温，到设定值之后，先测标准工作曲线的吸光度，再测样品溶液的吸光度，根据吸光度计算出结果。 1.2. 鱼粉中镉含量的测定 方法原理：将试样在电炉上碳化, 马福炉550温度下灰化之后, 酸性条件下溶解残渣, 沉淀并过滤, 定容制成试样溶液, 用
3、火焰原子吸收光谱法, 测量其在283.3nm 处的吸光度, 与标准系列比较定量。 样品处理方法：称取鱼粉样品5g， 置于瓷坩埚中。将坩埚置于可调电炉上, 缓慢加热炭化至无烟 , 然后放入已在550 下预热15min 的马福炉中, 灰化4h。冷却后加入6mol/L 盐酸溶液5mL, 开始时慢慢一滴一滴加入到坩埚中, 边加边转动坩埚, 直到不冒泡，然后再 1 快速放入, 再加入6mol/L 硝酸溶液5mL, 置于电炉上煮沸。冷却后, 用蒸馏水转移定容至50mL 容量瓶中, 摇匀, 过滤待用。同时制备试样空白溶液。 测定：试样溶液和试剂空白, 按绘制标准曲线步骤进行测定, 测出的相应吸光值与标准曲线
4、比较。导入原子吸收分光光度计, 用蒸馏水调零点, 在283.3nm 波长处测定吸光度, 以标准曲线溶液浓度为横坐标, 吸光度值为纵坐标, 绘制标准曲线。 说明：在测量鱼粉中镉含量时，朱老师还试过用微波压力消解炉处理样品，然后用石墨炉原子吸收光谱法检测。两种方法得出的检测结果很相近，证明方法可行。 1.3. 饲料中铁、铜、锰、锌的测定 可采用微波技术消解饲料样品,也可采用普通处理法消解样品，但用微波消解处理法效果较好，该方法快速、灵敏、准确、操作简便。最后用火焰原子吸收光谱法测定铁、铜、锰和锌的含量。 样品处理方法：称取试样0. 300 0 g 于微波消化罐中,加硝酸5. 0 mL ,浸泡过夜后
5、加入过氧化氢1. 0 mL ,连接好消解装置并放入微波消化炉中,按以下程序将样品消解完全: 420 kPa 保持10 min , 770 kPa 保持10 min ,1 120 kPa 保持10 min 。消解程序执行完毕后取出旋转托盘,冷却。开罐,将罐内试样溶液转移至50 mL 容量瓶中,用适量水洗涤消化罐,洗液并入容量瓶中,加水至刻度,摇匀。同时做空白试验。 测定方法：仪器条件：原子化器高度7 mm ; 空气流量4 L min - 1 ; 乙炔流量0. 8 L min - 1 ;氘灯校正背景。 将标准溶液及消解液导入原子吸收分光光度计,按仪器工作条件绘制工作曲线,并由工作曲线求得消解液中测
6、定元素的浓度,进而计算出试样中铁、铜、锰、锌的含量 。 1.4. 高效液相色谱法检测牛奶中三聚氰胺 高效液相色谱法的定量限为2 mg/kg，检测方法相对较简单， 成本较液相色谱-质谱/质谱法和气相色谱-质谱法低。 原理：试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取，经阳离子交换固相萃取柱净化后，用高效液相色谱测定，外标法定量。 样品处理方法：称取2 g试样于50 mL具塞塑料离心管中，加入15 mL三氯乙酸溶液和5 mL乙腈，超声提取10 min，再振荡提取10 min后，以不低于2 4000 r/min离心10 min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至25 mL，移取5 mL滤液，
7、加入5 mL水混匀后做待净化液。 HPLC 参考条件： a) 色谱柱：C8柱，250 mm4.6 mm，5 m，或相当者；C18柱，250 mm4.6 mm，5 m，或相当者。 b) 流动相：C8柱，离子对试剂缓冲液-乙腈，混匀。 C18柱，离子对试剂缓冲液-乙腈，混匀。 c) 流速：1.0 mL/min。 d) 柱温：40 e) 波长：240 nm。 f) 进样量：20 L。 标准曲线的绘制：用流动相将三聚氰胺标准储备液逐级稀释得到的浓度为0.8、2、20、40、80 g/mL 的标准工作液， 浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。基质匹配加标三聚氰胺的样品。 定量
8、测定：待测样液中三聚氰胺的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。 结果计算：试样中三聚氰胺的含量由色谱数据处理软件或按式计算获得： A c V1000 X= f As m1000 式中： X 试样中三聚氰胺的含量，单位为毫克每千克； A 样液中三聚氰胺的峰面积； c 标准溶液中三聚氰胺的浓度，单位为微克每毫升； V 样液最终定容体积，单位为毫升； As 标准溶液中三聚氰胺的峰面积； m 试样的质量，单位为克； f 稀释倍数。 空白实验：除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。 3 回收率：在添加浓度2 mg/kg10 mg/kg浓度范围内，回收率在80%110%之
9、间，相对标准偏差小于10%。 允许差：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 1.5. 高效液相色谱法检测猪肉中磺胺 样品制备：除去猪肉中的脂肪组织并将肌肉组织剁碎、匀浆分装于保鲜袋中,置于冷藏室保存。 样品提取：取事先分装好的试样( 10 g) ,置于100 ml三角瓶中,加入5 g无水硫酸钠后,再加入35 ml乙腈,超声波提取30 min后, 4000 r/min离心5 min,乙腈层过无水硫酸钠后,转移至旋转蒸发瓶中。残渣加入25 ml乙腈,超声波提取20 min后, 4000 r/min离心5 min,合并两次提取液。 样品净化：将合并后的上清液于4
10、0旋转蒸发至近干,加入012 ml正丙醇,蒸发至近干,用45 ml乙腈洗涤旋转蒸发瓶。于40水浴,用蒸发仪吹至1 ml左右,用乙腈准确定容至1 ml。用旋涡式混合器回旋1 min,再加入2 ml正己烷回旋1 min, 4000 r/min离心5 min,弃去正己烷层,乙腈层过0145m尼龙滤膜后,以HPLC测定。 仪器条件：色谱柱: Diamonsil C18 5m, 200 416 mm ;柱温: 35;流动相:甲醇、水;梯度洗脱: 03 min,甲醇:水(V:V) = 30: 70; 36 min,甲醇:水(V: V) =30: 70变化为甲醇:水(V:V) = 70: 30; 612 m
11、in,甲醇:水(V:V) = 70: 30; 检测波长: 275 nm; 进样体积: 20l; 流速:1l/min。 色谱测定：取经过提取、净化的乙腈20l进样,以保留时间定性,峰面积定量。 二、 实习内容 在实习期间，我所负责的工作主要是饲料类样品前处理，包括玻璃容器洗涤、样品称量、样品消解、溶液配制等。 洗涤样品的要求很高，清洗后要达到玻璃器壁上不挂水珠的效果。玻璃容器的一般清洗步骤是：加洗洁精浸泡超声10-30分钟自来水冲洗干净纯水冲洗自然风干或烘干。有时遇到对结果要求严格的检测项目，如比试，还要再超声之前用稀硝酸浸泡。如果测某些4 无机元素，如镉，就不能用洗洁精洗瓶子，因为洗洁精中含微
12、量镉。 称量样品时，称量纸或称量瓶要放在天平感重盘正中央，位置放偏会对称量结果有一定影响，操作者要带手套，因为手中汗液有可能会粘到称量瓶上，对结果造成影响。另外，在称量前天平要预热半小时以上，门窗封闭好，还要注意温度和湿度。 样品碳化时，要在通风橱内进行，打开电炉，放上石棉网，坩埚放在上面，加盖半掩，注意控制加热功率。加热功率太大时，会造成碳化速度过快，样品小颗粒随烟尘飘出；功率过小时，需要加热很长时间，且碳化不充分。碳化完全后， 不能直接把坩埚拿下，先关电炉，待坩埚降至近常温时再取下，以免热坩埚接触到凉坩埚钳时骤裂。 样品灰化在马福炉内进行，一般设置温度为550。升温速率不能太高，以免坩埚断
13、裂。炉温不宜过高，550即能达到效果。另外，加热及保温过程中不能打开炉门观察样品灰化情况，要等炉温降至近常温时才能打开取出。 溶解灰化样品时，一般要先往坩埚中加少量超纯水，再加酸溶解。加酸时，速度不宜过快，以免溶液溅出。加酸后，对难溶样品还要放到电炉上加热促溶，这是电炉温度不宜设置过高，一般低于100，溶液微沸后即停止加热。 转移样品时，要小心，以防样品损失，最后用超纯水冲净坩埚，全部转移到容量瓶中，定容。定容时，平视液面最低处。如果定容后溶液浑浊，就用漏斗过滤， 过滤时肯定会造成溶液损失，不过因为溶液浓度一定，不会给测定带来影响。过滤完后即可进行上机测定。 因仪器比较贵重，测定都是由朱老师亲
14、自操作。对于测定铜铁锰锌等含量较高的元素，可以采用火焰吸收分光光度法；测铅、镉等含量较低的元素时，可采用 石墨炉分光光度法。石墨炉分光光度法检测限低，需样量少，且可以自动进样，能够测定几十种无机元素。火焰吸收分光光度法测定迅速，成本较低。测定样品时，一般用火焰吸收分光光度法，对于超出火焰法检测限的检测量，可采用石墨炉法。 三、 实习感受 通过本次实习，我基本学会了饲料中某些无机元素的一般检测方法，熟悉了液态奶制品中三聚氰胺的检测方法和猪肉中磺胺的测定方法。在实习中，我发现许多用原子吸收测定无 5 机元素的样品处理法很类似，用高效液相色谱测定有机化合物的样品处理方法也很相似。同类监测项目的检测方
15、法基本相似。 本次实习给我最深的感受是：分析检测项目对结果的准确度要求非常高。一个样品的检测结果是否准确，关键取决于两方面，一是仪器的性能好，二是样品处理时操作规范，处理时细心、谨慎。仪器是客观的，可以通过高价购买性能好的仪器来达到较准确的检测结果。样品处理是主观方面，也是对检测结果影响较大的因素。 我去实习时正赶上局里比试，其中有几个细节给我的感触非常深。比试前，所有的玻璃仪器都要用稀硝酸浸泡十几个小时，然后再用高纯水冲洗干净。称量时，称量瓶要放在天平的正中央，操作者要戴上手套。尽管我们按上面的要求去做了，但检测结果的平行性不是太好。经老师分析，可能是容量瓶和移液管不够标准，后来，我们通过用
16、超纯水定容、天平称重、校准的方法对移液管、容量瓶校正，发现许多移液管和容量瓶都不合标准。我们从中挑选了一批较准确的，再进行检验，检验结果的平行性较好，但空白添加却明显偏高。朱老师和谭老师谈论了好长时间，他们都认为样品处理过程中引入了镉元素。经上网查资料，发现洗洁精也含镉。最后，我们选择了不用洗洁精洗瓶子和使用优级纯试剂的方法，得到了较为满意的结果。 以前，我常以为检测结果的准确性多取决于仪器。通过实习，我才发现样品处理也对检验结果的准确度有很大影响。细节决定成败，要认真做好每一步，这是本次实习我最深的感受。 随着我国加入WTO以来，出口产品都要经过严格检验。尽管如此，我国的蔬菜、水果等农产品还受到一些发达国家的质疑，我们要力争在国内把好检验这一关。目前，随着人民生活水平的提高，对食品的卫生要求也越来越高，某些不法商贩为了牟取个人利益，也在食品上“下功夫”。作为一名分析检测人员， 我们正处在这一历史考验时刻，我们有责任还所有需检测产品一个真实面目，有义务为人类的健康贡献出自己的一份力量。 6
